異構體方法學研究課件

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異構體方法學研究

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異構體方法學研究1*

手性的概念：一種鏡像反射的對稱性

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手性的概念：一種鏡像反射的對稱性

MirrorI2*手性分子：組成相同但空間結構上互成鏡像的分子，稱之為對映異構體。分子結構中含有不對稱碳原子是最常見的手性結構。根據(jù)對偏振光的作用不同可分為R、S體，兩者的等量混合物稱之為消旋體。

*手性分子：組成相同但空間結構上互成鏡像的分子，稱之為對映異3*

在未研究清楚兩種單一對映體之間的生物學差異時，以消旋體給藥往往會影響藥物質量，甚至會嚴重損害人體健康。“反應?！?Thalidomide)作為人工合成藥，當時投入使用時是兩種對映體的混合物。

*在未研究清楚兩種單一對映4*手性藥物的現(xiàn)狀臨床藥物1850種天然和半合成藥物523種化學合成藥物1327種非手性6種手性517種非手性799種手性528種以單個對映體給藥509種以外消旋體給藥8種以單個對映體給藥61種以外消旋體給藥467種*手性藥物的現(xiàn)狀臨床藥物天然和半合成藥物化學合成藥物非手性65*常用手性高效液相色譜法

手性固定相法-手性色譜柱手性流動相添加法-手性試劑-左氧氟沙星手性衍生化試劑法*常用手性高效液相色譜法6*對映體除了偏振光的偏轉方向不同外，其它理化性質完全相同，因而分離難度大。

手性色譜拆分方法：創(chuàng)造（或引入）手性環(huán)境，構造非對映異構體，使藥物對映體間呈現(xiàn)理化特性的差異，從而實現(xiàn)藥物對映體的色譜分離。*對映體除了偏振光的偏轉方向不同外，其它理化性質完全相同，因7*含多個手性碳原子化合物，分子中所含手性碳越多，對映異構體的數(shù)目越多。對映體對映體非對映異構體*含多個手性碳原子化合物，分子中所含手性碳越多，對映異構體的8*手性高效液相色譜法（ChiralHPLC)

手性衍生化試劑法（CDR）（分析物）手性固定相法（CSP）（固定相）手性流動相添加法（CMP）（流動相）*手性高效液相色譜法（ChiralHPLC)9*手性固定相法（CSP）原理：將手性試劑化學鍵合到固定相上與藥物對映體反應形成暫時的非對映體對復合物，這種固定相稱作CSP。在CSP表面所形成的非對映體對，可根據(jù)其穩(wěn)定常數(shù)不同而獲得分離。（三點結合模型）*手性固定相法（CSP）原理：將手性試劑化學鍵合到固定相上與10*手性固定相吸附型電荷轉移型蛋白質類環(huán)糊精類多糖衍生物反相、防有機溶劑正相、防水正、反相均可*手性固定相吸附型電荷轉移型蛋白質類環(huán)糊精類多糖衍生物反相11*纖維素的單體D-葡萄糖以β-1,4-糖苷鍵相連而成的線型聚合物，將羥基衍生化成酯以增強手性識別能力。由于水和鹵代烴都能溶解纖維素及其衍生物，故流動相大都為正相色譜系統(tǒng)，使用極性較小的非鹵代烴有機溶劑。多糖及其衍生物類手性固定相*纖維素的單體D-葡萄糖以β-1,4-糖苷鍵相連而成的線型聚12*最常用的多糖型手性色譜柱（Daicel，大賽璐）

淀粉柱：ChiralpakAD、ChiralpakAS、纖維素柱：ChiralcelOD、ChiralcelOJ*最常用的多糖型手性色譜柱（Daicel，大賽璐）淀13*CHIRALPAKAD系列直鏈淀粉-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；用于分離胺類、酯類化合物CHIRALPAKAS系列直鏈淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；適合于分離β-內酰胺類、環(huán)氧化物、酸類、雜環(huán)類化合物化合物。CHIRALCELOD系列纖維素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；適用于分離β-受體阻滯劑、具有相同功能的化合物、類固醇類化合物，如：阿普羅爾、美托洛爾、氧烯洛爾。（芳氧丙醇胺類）CHIRALCELOJ系列纖維素-三[4-甲基苯甲酸酯]衍生物；被用于分離布洛芬、氯胺酮等藥物，以及在手性中心含有一個大的取代基的化合物*CHIRALPAK直鏈淀粉-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯14**15*手性柱通用性差正相、反相不同手性柱使用注意事項不一致，應用時一定要找負責人或者供貨商要說明書

手性柱使用說明*手性柱通用性差手性柱使用說明16**17*方法學驗證內容：

準確度（回收率）

精密度

重復性

中間精密度

專屬性

定量限和檢測限

線性

范圍

耐用性

*方法學驗證內容：18*制劑-異構體研究*制劑生產(chǎn)工藝中或者輔料長期作用下產(chǎn)生異構體

因此制劑也要求對異構體進行研究0月、影響因素30天、加速6月、長期12月、長期24月

*制劑-異構體研究*19*1.以異構體限度濃度（常0.1%）為100%，與原料混合制備成混合溶液。原料濃度為供試溶液濃度不變。

制備幾個點：

定量限濃度、10%（20%)、50%、100%、150%

每個點3份，自身對照法計算2.要求：平均回收率80%-120%，RSD≤10%異構體-原料-準確度*1.以異構體限度濃度（常0.1%）為100%20*

一.重復性

制備6份100%（異構體限度濃度）回收率溶液，進樣。

要求：RSD≤15%，建議≤10%

如果樣品本身含0.05%-0.1%異構體，也可以不加對照品，直接制備6份供試溶液測試。

異構體-原料-精密度*一.重復性異構體-原料-精密度21*

二.中間精密度

方法同重復性，換人、儀器、時間。

要求：12份溶液RSD≤20%

異構體-原料-精密度*二.中間精密度異構體-原料-精密度22*

二.中間精密度

方法同重復性，換人、儀器、時間。

要求：12份溶液RSD≤20%

異構體-原料-精密度*二.中間精密度異構體-原料-精密度23*1.溶劑干擾2.各異構體、主峰的分離度3.未知雜質干擾4.強制降解試驗*

高溫、光照（可共用影響因素高溫、光照試驗數(shù)據(jù)）異構體-原料-專屬性*1.溶劑干擾異構體-原料-專屬性24*

二.中間精密度

方法同重復性，換人、儀器、時間。

要求：12份溶液RSD≤20%

異構體-原料-精密度*二.中間精密度異構體-原料-精密度25*CDE黃曉龍建議

異構體-原料-檢測限/定量限？水-測PH*CDE黃曉龍建議異構體-原料-檢測限/定26分析不同觀點*分析不同觀點*27*

1.定量限目前的做法：

制備S/N=10倍的供試品溶液，進6針，RSD≤10%

建議：樣品制備方法描述照黃曉龍走，以便應付某些客戶。2.檢測限

制備S/N=3倍的供試品溶液，進3針，

異構體-原料-檢測限/定量限*異構體-原料-檢測限/定量限28*

二.中間精密度

方法同重復性，換人、儀器、時間。

要求：12份溶液RSD≤20%

異構體-原料-精密度*二.中間精密度異構體-原料-精密度29*

1.線性溶液制備：

定量限、10%（20%）、50%、80%、100%（限度濃度）、120%、150%

2.要求：回歸線的相關系數(shù)（R）不得小于0.990，Y軸截距應在100％響應值的25％以內，響應因子的相對標準差應不大于10%。

異構體-原料-線性（范圍）*異構體-原料-線性（范圍）30*1.柱溫改變：室溫、標準溫度、+2-5℃。（注意色譜柱最高耐受溫度），2.流速改變：±0.1ml/min3.流動相比例變化±5%（低比例溶劑）4.波長改變：±2nm或者（±5nm）

異構體-原料-耐用性*1.柱溫改變：室溫、標準溫度、+2-5℃。（注31**32*師傅領進門，修行在個人

*師傅領進門，修行在個人

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thanks34*

異構體方法學研究

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異構體方法學研究35*

手性的概念：一種鏡像反射的對稱性

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手性的概念：一種鏡像反射的對稱性

MirrorI36*手性分子：組成相同但空間結構上互成鏡像的分子，稱之為對映異構體。分子結構中含有不對稱碳原子是最常見的手性結構。根據(jù)對偏振光的作用不同可分為R、S體，兩者的等量混合物稱之為消旋體。

*手性分子：組成相同但空間結構上互成鏡像的分子，稱之為對映異37*

在未研究清楚兩種單一對映體之間的生物學差異時，以消旋體給藥往往會影響藥物質量，甚至會嚴重損害人體健康?！胺磻！?Thalidomide)作為人工合成藥，當時投入使用時是兩種對映體的混合物。

*在未研究清楚兩種單一對映38*手性藥物的現(xiàn)狀臨床藥物1850種天然和半合成藥物523種化學合成藥物1327種非手性6種手性517種非手性799種手性528種以單個對映體給藥509種以外消旋體給藥8種以單個對映體給藥61種以外消旋體給藥467種*手性藥物的現(xiàn)狀臨床藥物天然和半合成藥物化學合成藥物非手性639*常用手性高效液相色譜法

手性固定相法-手性色譜柱手性流動相添加法-手性試劑-左氧氟沙星手性衍生化試劑法*常用手性高效液相色譜法40*對映體除了偏振光的偏轉方向不同外，其它理化性質完全相同，因而分離難度大。

手性色譜拆分方法：創(chuàng)造（或引入）手性環(huán)境，構造非對映異構體，使藥物對映體間呈現(xiàn)理化特性的差異，從而實現(xiàn)藥物對映體的色譜分離。*對映體除了偏振光的偏轉方向不同外，其它理化性質完全相同，因41*含多個手性碳原子化合物，分子中所含手性碳越多，對映異構體的數(shù)目越多。對映體對映體非對映異構體*含多個手性碳原子化合物，分子中所含手性碳越多，對映異構體的42*手性高效液相色譜法（ChiralHPLC)

手性衍生化試劑法（CDR）（分析物）手性固定相法（CSP）（固定相）手性流動相添加法（CMP）（流動相）*手性高效液相色譜法（ChiralHPLC)43*手性固定相法（CSP）原理：將手性試劑化學鍵合到固定相上與藥物對映體反應形成暫時的非對映體對復合物，這種固定相稱作CSP。在CSP表面所形成的非對映體對，可根據(jù)其穩(wěn)定常數(shù)不同而獲得分離。（三點結合模型）*手性固定相法（CSP）原理：將手性試劑化學鍵合到固定相上與44*手性固定相吸附型電荷轉移型蛋白質類環(huán)糊精類多糖衍生物反相、防有機溶劑正相、防水正、反相均可*手性固定相吸附型電荷轉移型蛋白質類環(huán)糊精類多糖衍生物反相45*纖維素的單體D-葡萄糖以β-1,4-糖苷鍵相連而成的線型聚合物，將羥基衍生化成酯以增強手性識別能力。由于水和鹵代烴都能溶解纖維素及其衍生物，故流動相大都為正相色譜系統(tǒng)，使用極性較小的非鹵代烴有機溶劑。多糖及其衍生物類手性固定相*纖維素的單體D-葡萄糖以β-1,4-糖苷鍵相連而成的線型聚46*最常用的多糖型手性色譜柱（Daicel，大賽璐）

淀粉柱：ChiralpakAD、ChiralpakAS、纖維素柱：ChiralcelOD、ChiralcelOJ*最常用的多糖型手性色譜柱（Daicel，大賽璐）淀47*CHIRALPAKAD系列直鏈淀粉-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；用于分離胺類、酯類化合物CHIRALPAKAS系列直鏈淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；適合于分離β-內酰胺類、環(huán)氧化物、酸類、雜環(huán)類化合物化合物。CHIRALCELOD系列纖維素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]衍生物；適用于分離β-受體阻滯劑、具有相同功能的化合物、類固醇類化合物，如：阿普羅爾、美托洛爾、氧烯洛爾。（芳氧丙醇胺類）CHIRALCELOJ系列纖維素-三[4-甲基苯甲酸酯]衍生物；被用于分離布洛芬、氯胺酮等藥物，以及在手性中心含有一個大的取代基的化合物*CHIRALPAK直鏈淀粉-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯48**49*手性柱通用性差正相、反相不同手性柱使用注意事項不一致，應用時一定要找負責人或者供貨商要說明書

手性柱使用說明*手性柱通用性差手性柱使用說明50**51*方法學驗證內容：

準確度（回收率）

精密度

重復性

中間精密度

專屬性

定量限和檢測限

線性

范圍

耐用性

*方法學驗證內容：52*制劑-異構體研究*制劑生產(chǎn)工藝中或者輔料長期作用下產(chǎn)生異構體

因此制劑也要求對異構體進行研究0月、影響因素30天、加速6月、長期12月、長期24月

*制劑-異構體研究*53*1.以異構體限度濃度（常0.1%）為100%，與原料混合制備成混合溶液。原料濃度為供試溶液濃度不變。

制備幾個點：

定量限濃度、10%（20%)、50%、100%、150%

每個點3份，自身對照法計算2.要求：平均回收率80%-120%，RSD≤10%異構體-原料-準確度*1.以異構體限度濃度（常0.1%）為100%54*

一.重復性

制備6份100%（異構體限度濃度）回收率溶液，進樣。

要求：RSD≤15%，建議≤10%

如果樣品本身含0.05%-0.1%異構體，也可以不加對照品，直接制備6份供試溶液測試。

異構體-原料-精密度*一.重復性異構體-原料-精密度55*

二.中間精密度

方法同重復性，換人、儀器、時間。

要求：12份溶液RSD≤20%

異構體-原料-精密度*二.中間精密度異構體-原料-精密度56*

二.中間精密度

方法同重復性，換人、儀器、時間。

要求：12份溶液RSD≤20%

異構體-原料-精密度*二.中間精密度異構體-原料-精密度57*1.溶劑干擾2.各異構體、主峰的分離度3.未知雜質干擾4.強制降解試驗*

高溫、光照（可共用影響因素高溫、光照試驗數(shù)據(jù)）異構體-原料-專屬性*1.溶劑干擾異構體-原料-專屬性58*

二.中間精密度

方法同重復性，換人、儀器、時間。

要求：12份溶液RSD≤20%

異構體-原料-精密度*二.中間精密度異構體-原料-精密度59*CDE黃曉龍建議

異構體-原料-檢測限/定量限？水-測PH*CDE黃曉龍建議