細(xì)胞培養(yǎng)中的黑膠蟲問題

Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercial細(xì)胞培養(yǎng)中的黑膠蟲問題1.我實(shí)驗(yàn)室最近一次的情:我們前后從上海細(xì)胞中心買了三批細(xì)胞細(xì)胞剛到的時候，觀察均生長良好，密度適中，培養(yǎng)液清亮也有見小黑點(diǎn)但是對細(xì)胞傳代以后就陸續(xù)出現(xiàn)多少不等的小黑點(diǎn)時候在一夜之間暴長給養(yǎng)液加慶大素也濟(jì)于事對貼壁細(xì)胞用生理鹽水及D-hanks液沖洗七遍后見減少但是隨后幾天出現(xiàn)剛始懷疑操作有問題但由有經(jīng)驗(yàn)的老師操作也出現(xiàn)這種問題，陸續(xù)對培養(yǎng)液，血清及胰酶進(jìn)行培養(yǎng)也沒發(fā)現(xiàn)問題。同時培養(yǎng)箱也有本實(shí)驗(yàn)室保存的3t3胞進(jìn)行培養(yǎng)生快很快鋪滿仔細(xì)觀察也可以見到少量的黑點(diǎn)。后來還有從軍科院過來的Hela細(xì)，沒有使用我們的血清，直接吸出多余的培養(yǎng)液后，進(jìn)行培養(yǎng)，傳代后用原來吸出的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，同樣發(fā)現(xiàn)了問題?？梢园l(fā)現(xiàn)如下的特點(diǎn)：（）與胞共生，細(xì)胞長好或密度大的話，小黑點(diǎn)就少，反之則多（）對生素?zé)o效；（）可通過培養(yǎng)箱空氣行污染；（）單培養(yǎng)液及血清培沒發(fā)現(xiàn)問題。（）換沖洗后也無效。以下是論壇里我找來的相關(guān)帖子內(nèi)容“黑膠蟲”是近十幾年才發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞污染物，“黑膠蟲”的分類目前尚無鑒定確認(rèn)?！昂谀z蟲”可寄生于動物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代“黑膠蟲與細(xì)胞競爭性生長始時對細(xì)胞并沒有什么影響當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時候，細(xì)胞長就會受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動的開展和進(jìn)行所以“黑膠蟲的污染常在培養(yǎng)條件改變胞接種密度降低細(xì)胞狀態(tài)不佳時顯現(xiàn)并使實(shí)驗(yàn)中斷，尤其在凍存細(xì)胞復(fù)蘇時可造成大量細(xì)胞死亡。目前比較公認(rèn)的觀點(diǎn)認(rèn)為“黑膠蟲”是一種微生物殖緩慢但對細(xì)胞有損害量到一定程度可引起細(xì)胞死亡來源可能是細(xì)胞本身的污染或從動物取材時污染造成的污在全世界細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中普遍存在，解決該問題是一個世界性難題關(guān)于是什么的問題的討論A.玻培養(yǎng)瓶中的類似氧化的東西（曾經(jīng)有文獻(xiàn)報道過）B.據(jù)這是黑膠蟲，又有人是原生動物，好象也沒個統(tǒng)一的說法C.據(jù)毒所和軍科院鑒定是種寄生于牛血清內(nèi)的一種原蟲和履蟲和變形蟲有類似之處，然而由于課題經(jīng)費(fèi)不夠而不能繼續(xù)進(jìn)行下去。D.有說納級細(xì)菌其他的特點(diǎn)（）態(tài)上有些像細(xì)菌，直徑約在0.5~1微米（）在400X倒置顯微鏡小，典型的布朗運(yùn)動（不規(guī)則的原地小距離抖動）。（）細(xì)內(nèi)好像也有存在，（）但不引起培養(yǎng)液混濁（）時稍長，細(xì)胞狀態(tài)明顯化，并最后死亡

大家的處理：1.換一點(diǎn)的血清（我覺著和血的關(guān)系不大）。2.如是貼壁細(xì)胞的話可無的PBS洗幾次可一定程度上緩解若懸浮的話就太好處理拉以其中少加一滋養(yǎng)細(xì)小鼠腹腔內(nèi)取的巨噬細(xì)胞種胞不分裂，過一陣就死掉了做抗體雜交瘤合的同志肯定知道加滋養(yǎng)細(xì)胞對有黑膠蟲的剛復(fù)蘇的細(xì)胞很有效！還有就是實(shí)驗(yàn)環(huán)境要注意好，保持細(xì)胞間整個環(huán)境的潔凈度。3.換進(jìn)口的一次性塑料培養(yǎng)瓶4.建清理無菌室所有物品，重滅菌KMnO4熏按首次使用無菌室做，細(xì)胞重新復(fù)蘇，。5.在液前先加入生理鹽水并輕輕拍打，沖洗干凈后再加入培養(yǎng)液，堅持天天洗，傳代時加生理鹽水再離心一次接密稍大一些一段時間后，蟲子就會大大減少，對細(xì)胞的生長也不會有大的影響。6.有料稱minocycline具一的作用，可以和換液結(jié)合起來使用。殺滅蟲的一種估計養(yǎng)細(xì)胞，很多人到過所謂“黑膠蟲”。最近養(yǎng)細(xì)胞，不幸的，也中獎，看到培養(yǎng)瓶里仿一夜之間出來的密麻麻的小黑東西真是有苦難言為曾在園里看過有“黑膠蟲”帖子，不對付，沒有效的殺滅方法，據(jù)說有專殺培養(yǎng)，但又有么好的方可以消除實(shí)室和培養(yǎng)內(nèi)的污染？紫外照射、甲醛高錳酸鉀熏蒸------些方法不其對“黑膠蟲”確切效果有些對人毒害，有沒有一種方法，即能殺死黑膠蟲”人毒性又較小呢？想到了試新爾（扎溴）是否以，新潔滅是外用膚消毒劑，我們實(shí)驗(yàn)室常規(guī)來擦洗手工作臺面。首先說明這東西在低下呈黑色狀在高倍下呈狀確實(shí)是不停地運(yùn)動有些戰(zhàn)友不相信它動也有人不相有這種所謂的“黑膠蟲”只靜下心來仔盯住一點(diǎn)你就會能注意到它實(shí)在運(yùn)動我也錄了段相，足以可以證明，太大，160多M題：殺滅處理黑膠的一種新法目：找到種高效且或無毒的滅處理“黑膠蟲”的方法。方取有黑膠蟲污染的六孔板內(nèi)有2ml培養(yǎng)液污染的孔內(nèi)別加入0.5ml、1ml、2ml、3ml的新潔滅原液，邊邊在倒置微鏡下觀。結(jié)加入潔爾滅時培養(yǎng)液內(nèi)漸變得有些混濁且有絮狀的東西形成（肉看是白色的），這際上是由黑膠蟲”集而成（見下面的圖），約2-3分鐘后“黑膠蟲”慢慢停止了運(yùn)動。了進(jìn)一步察其效果把六孔板放入37度培養(yǎng)繼續(xù)培養(yǎng)第二天觀察發(fā)現(xiàn)：有些仍成團(tuán)絮但不會動有貼在瓶壁也不會動有些已由桿變成了圓球象是生了水腫一樣，更會動了，計“黑膠”已死亡。這幾種劑量的新潔爾滅果是一樣。結(jié)：新潔滅與水或養(yǎng)基的比為1：時即殺死“黑蟲”（更的濃度沒有試，當(dāng)時殺蟲心，就想多點(diǎn)，反正不貴，一瓶新潔爾滅才7多錢）。以噴灑或洗用于實(shí)驗(yàn)室或培養(yǎng)內(nèi)消毒若胞不珍貴不想要了也以用來殺滅其中的“黑蟲”若細(xì)珍貴，不要輕嘗試，除你不想要；你試了，本人概不負(fù)責(zé)

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