鼻咽癌放療敏感性的現(xiàn)狀與策略

關(guān)于鼻咽癌放療敏感性的現(xiàn)狀與策略第1頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六腫瘤放射治療的瓶頸1.放療敏感性的個體性差異2.乏氧細胞造成的放療抗拒3.正常組織耐受量的限制4.治療不能解決潛在的遠處轉(zhuǎn)移第2頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六影響放療敏感性的主要因素腫瘤細胞的固有敏感性是否乏氧，乏氧克隆細胞所占的比例腫瘤放射損傷的修復第3頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六鼻咽癌的綜合治療放射治療化療手術(shù)生物靶向治療基因治療免疫治療第4頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六放療抗拒失敗復發(fā)轉(zhuǎn)移復發(fā)對鼻咽癌療效的影響第5頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六復發(fā)對鼻咽癌預后的影響5年局部失敗率為20%-40%局部復發(fā)原因占死亡率20%第6頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六DNA損傷修復在真核生物，DNA損傷修復主要有兩種途徑，即同源重組HR(homology-directedrepair)和非同源末端連接NHEJ(non-homologousendjoining)。在哺乳類細胞中NHEJ是最重要的一種。DNA-PK是NHEJ一個核心部分，是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，由催化亞單位DNA-PKcs和調(diào)節(jié)亞單位Ku蛋白組成。研究證實：Ku的功能是與DNA-PKcs組成DNA-PK全酶，參與NHEJ進行DSB修復是Ku的重要功能。第7頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六第一部分放療敏感性的判斷方法臨床實踐水平回顧性判斷前瞻性預測基礎研究水平細胞水平分子水平蛋白水平基因水平（甲基化及乙?；?第8頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六臨床回顧分析敏感性短期療效

從單純放療開始至放療結(jié)束后較短的時間內(nèi)，觀察腫瘤殘存率及消退情況。

長期療效

復發(fā)時間的長短來判定腫瘤放療的敏感性。

第9頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六分子表觀放療結(jié)束復發(fā)或殘存時間雜志作者放療敏感放療抵抗RKIP蛋白6w無殘存且2m內(nèi)無復發(fā)6w不消退JournalofCellularBiochemistry(2010)Zhi-QiangXiaoMDR多態(tài)性大于3y小于3y南方醫(yī)科大學學報2007袁亞維COX2蛋白大于36個m小于12個m臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志2007劉陽云-----大于5Y小于5YInt.J.RadiationOncologyBiol.Phys2006XiaYun-FeiP53、VEGF蛋白大于5Y小于5Y癌癥,2006閔華慶BCL-23y12mClin.Otolaryngol.2004,P.A.NIXMRP蛋白LN無殘存LN殘存實用腫瘤學雜志，2006張建文第10頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六放療前根據(jù)影像學表現(xiàn)預測敏感性SPECT斷層顯像乏氧組織顯像劑99mTc—HL91l應用于診斷鼻咽癌組織的乏氧情況，具有較高臨床價值。PET-CT反映腫瘤的解剖結(jié)構(gòu)和代謝功能的改變彩色多普勒超聲血供情況預測頸部轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)放療敏感性。血供豐富高于血供中等、血供貧乏者第11頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六第12頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六臨床判斷放療敏感性-------小結(jié)根據(jù)放療結(jié)束一定時間后的腫瘤殘存率和復發(fā)率來評價臨床腫瘤的放療敏感性，有一定的指導價值。只能事后起著間接提示作用，它受到臨床分期、放療劑量、貧血、腫瘤分化程度等諸多因素的影響。第13頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六細胞分子水平預測放射內(nèi)在敏感性

細胞分子水平研究放射敏感性的研究，可以較好地預測腫瘤的內(nèi)在敏感性，是目前腫瘤放射敏感性研究的熱點。第14頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六基礎試驗檢測放療敏感性細胞水平研究ColonyFormationAssaysCellCycleAnalysisApoptosisAnalysis組織細胞的蛋白組學研究蛋白組學Westernblot免疫組化（IHC）“彗星”分析法（cometassay）第15頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六基礎水平研究放療敏感性第16頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六細胞水平檢測鼻咽癌放療敏感性的研究第17頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六方法一--------克隆形成試驗

原理一個單細胞，形成了50個或更多細胞的克隆細胞線性二次模型擬合求出SF2、D0、Dq、N等放射生物學參數(shù)單個細胞集落形成效率PEPE=集落數(shù)/細胞總數(shù)×100%SF=計數(shù)所得克隆數(shù)/(接種細胞數(shù)×PE)第18頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六方法二：流式細胞技術(shù)檢測腫瘤細胞增殖動力學G0期S期G2期M期G1期第19頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六處于不同增殖周期的細胞放射敏感性的差異G2/MG1EarlySLateS1.00.10.010.00104008001200SurvivalfractionDose(cGy)第20頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六細胞增殖周期和放射敏感性的關(guān)系細胞時相的敏感性差異M期最敏感G2期次之S期最不敏感G1/S期抗拒照射后增殖周期中的細胞（時相）分布不同第21頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六14種鼻咽癌細胞株放療劑量-生存曲線參數(shù)的比較第22頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六HNE1與CNE2敏感性差異的蛋白組學分析上調(diào)蛋白：6種

I型角蛋白（typeIIcytokeletal1）、谷胱苷肽S轉(zhuǎn)移酶、磷酸甘油酸激酶（phosphoglyceratekinase1）、脂肪酸合成酶、纖維母細胞生長因子受體2前體、P73樣腫瘤蛋白。下調(diào)蛋白：3種果糖二磷酸醛縮酶（Fructose-bisphosphatealaldolaseA）、II型角蛋白Keratin（typeIIcytokeletal1）和MyeloperoxidaseHNE1CNE2第23頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六CNE1敏感性低于CNE2鼻咽癌細胞株(CNE1、CNE2)內(nèi)在的輻射敏感性的差異原因之一可能與其在經(jīng)電離輻射后發(fā)生的G，期阻滯程度不同有關(guān)。：CNE1與CNE2劑量-生存曲線參數(shù)的比較第24頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六輻射抵抗相關(guān)基因輻射敏感相關(guān)基因內(nèi)在敏感性基因表達差異第25頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六影響放療內(nèi)在敏感性的基因及其功能細胞凋亡促凋亡：p53,Bcl-XL,Bak抑制凋亡：Bcl-2細胞周期調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子細胞增殖調(diào)節(jié)劑細胞分化

第26頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六基因的多態(tài)性與放療敏感性輻射抵抗型基因RAF基因DNA-PKATM基因輻射敏感型基因P53RKIP第27頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六第28頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六DNA的細胞核形態(tài)與放療敏感性第29頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六核DNA含量與鼻咽癌放療敏感性第30頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六“彗星”分析法“彗星”分析法檢測敏感性單細胞凝膠電泳Singlecellgelelectrophoresis是一種快捷、高靈敏度的檢測DNA受損的方法.測量指標包括頭半徑，尾長度，積分光密度，頭/尾DNA含量比例，尾矩，Olive矩等多種參數(shù)用尾力矩之比(RTM)表示，即RTM=TM5/TM0TM0：未照射的鼻咽癌細胞的尾力矩TM5：照射5Gy的鼻咽癌細胞的尾力矩：第31頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六第32頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六分子改變方法細胞株雜志作者gp96andGDF15cDNAmicroarrayanalysisHNE1,CNE2MolCancerTher2007ChangDNA-dependentPKCloneformationassayCNE1,2ActaPhysiologicSinica，2007XiaYun-FeiRKIPDefinetime5-8F,6-10BJournalofCellularBiochemistry(2010)RuanLimicroRNA-17QPCRCNE1,2JSouthMedUniv,2010YUANYa-weiTyrosinekinaseEtk/BMXSUNE1-etkSUNE1CancerBiology&Therapy,2011ZhenhuaZhang多種蛋白雙向凝膠電泳分析及質(zhì)譜分析HNE1,CNE2中華放射醫(yī)學與防護雜志，2007王輝實粘附分子整合素V三維立體(多細胞球)培養(yǎng)CNE2Z臨床腫瘤學雜志，2008梁后杰第33頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六蛋白水平直接檢測放療敏感性指示劑多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)、Bcl-2、P53蛋白、血管內(nèi)皮生長因子C放療抗拒組比放療敏感組高，提示與放療抗拒有關(guān)EGFR及NF-Kβ與鼻咽癌放射敏感性呈負相關(guān)PCNA，Ki-67CyclinD與放療敏感性正相關(guān)TNF腫瘤壞死因子促進細胞CNE2-S1放療抵抗亞群的同步化作用，增強鼻咽癌放射敏感性第34頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六蛋白分子水平endoplasmicreticulum(ER)stress-inducibleprotein RP26內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導蛋白RAF蛋白RKIP蛋白第35頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六轉(zhuǎn)染RKIP對鼻咽癌細胞凋亡的影響第36頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六G2-M阻滯對細胞周期分布的影響第37頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六第38頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六關(guān)于RAF-1與放療反應的關(guān)系放療抵抗性相關(guān)（觀點一）放療敏感性相關(guān)（觀點二）第39頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六c-raf-1與輻射抗性有關(guān)

觀點一體外轉(zhuǎn)染c-raf-1和c-myc基因到人，不但可形成肺癌，而且增加輻射抗性。（PfeiferA，BiochemBiophysResCommun，1998）第40頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六RAF-1蛋白與輻射抵抗RAF-1蛋白在喉癌SQ-20B耐藥有關(guān)（1987,Science）RAF-1蛋白在肝癌HepG2耐藥有關(guān)（OncolRep，2004）第41頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六原癌基因c-raf-1與放療敏感有關(guān)

觀點二：原癌基因c-raf-1的表達與放療敏感性有關(guān)（Warenius，EurJCancer.1994）表達c-raf-1的放療敏感的人細胞與G2期快速逃逸有關(guān)。（Warenius，RadiatRes.1996（晚G1期積累與內(nèi)源性raf-1蛋白的表達及內(nèi)在敏感性有關(guān)。（WareniusBrJCancer.1998）第42頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六RAF-1與放療敏感性有關(guān)RAF-1蛋白與多種細胞株放療敏感性第43頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六RAF-1與放療敏感性有關(guān)第44頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六第45頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六第三部分增強鼻咽癌放療敏感性的策略增敏治療化療增敏生物靶向治療增敏熱療增敏基因治療改善腫瘤組織的缺氧細胞凋亡誘導劑第46頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六（一）鼻咽癌的放療增敏-----化療

增敏治療的藥物分類細胞毒性藥物健擇、三氧化二砷、泰索帝細胞周期阻滯劑喜樹堿衍生物拓撲替康、安卡膠囊、薏苡仁酯抑制放射損傷修復能力的藥劑

第47頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六（一）鼻咽癌的放療增敏-----化療健擇、三氧化二砷、泰索帝姜黃素血卟啉衍生物(hematoporphyrinderiva．tive；HPD)、石上柏、蟾蜍靈第48頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六（二）惡性腫瘤的放療增敏-----熱療熱療使腫瘤局部溫度升高，循環(huán)加快，氧和度升高，氧含量增加，敏感期細胞增多（因處于DNA合成期的S期細胞對射線不敏感，但對熱療敏感。）瘤體中心乏氧細胞減少，使放射線殺傷癌細胞效力增加，起到放射增敏作用。熱療本身的作用與射線作用起著協(xié)同作用。熱療在放療前、中、后都起作用，最好的療效是同時進行（但實際中難以達到），一般在放療后進行，溫度﹤42℃，時間60分鐘，也可在熱療后半小時內(nèi)放療。第49頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六

放療加熱療作用機理對放射線不敏感的S期細胞，對熱敏感。細胞分裂越快的腫瘤，對高熱越敏感。對于缺氧（慢性氧缺乏）、營養(yǎng)不良和低PH值環(huán)境（酸環(huán)境）的腫瘤，對放射線敏感性差，但對高熱敏感。加熱療后可減少放療劑量（1/5---1/6左右）和放療次數(shù)，而不影響放療的效應。放療可造成免疫抑制，熱療可激活免疫反應。

腫瘤對高熱的敏感性是一致的，而放療因腫瘤的組織學類型不同而效應不同。第50頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六（三）鼻咽癌放療增敏-----基因治療P53gene（今又生）RAF反義寡核苷酸（ASODN）cytosinedeaminase（胞嘧啶脫氨酶）suicide,Egr-1genepromoter,hTERT

genepromoterDNA-PK反義寡核苷酸（ASODN）逆轉(zhuǎn)CNE1的輻射抗性

第51頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六第52頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六RAF-1基因治療Raf-1基因反義寡核苷酸的脂質(zhì)體注射液治療多種實體瘤I期臨床試驗已經(jīng)取得令人鼓舞的效（ClinCancerRes.2006）RNA干擾技術(shù)抑制鼻咽癌細胞株（HNE1）RAF-1基因表達，發(fā)現(xiàn)凋亡率增加，其mRNA表達下降。（臨床耳鼻喉頭頸外科雜志，2006）第53頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六CD自殺基因治療cytosinedeaminase(胞嘧啶脫氨酶，CD)suicidetherapyFCFUCD第54頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六（三）鼻咽癌增敏-----基因治療

ATM的PI3K功能區(qū)反義逆轉(zhuǎn)錄病毒重組體對鼻咽癌細胞CNE1的輻射增敏。使用ATM基因沉默技術(shù)直接抑ATM制基因表達或者間接抑制ATM功能都可能達到更好的輻射增敏效。第55頁，共62頁，2022年，5月20日，19點2分，星期六基因治療總結(jié)通過基因治療方式改