丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶抑制

實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料與儀器實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)討論第一頁(yè)，共12頁(yè)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、學(xué)習(xí)和掌握競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用的特點(diǎn)。2、觀(guān)察丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。

第二頁(yè)，共12頁(yè)。實(shí)驗(yàn)原理化學(xué)結(jié)構(gòu)與酶作用的底物結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)，可與底物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至喪失，這種抑制作用稱(chēng)為競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。E+SESE+P+IEI+S

EIS+I第三頁(yè)，共12頁(yè)。琥珀酸脫氫酶：是機(jī)體內(nèi)參與三羧酸循環(huán)的一種重要的脫氫酶，其輔基為FAD，如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下，可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫可將藍(lán)色的甲烯藍(lán)還原成無(wú)色的甲烯白。這樣，便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作用第四頁(yè)，共12頁(yè)。實(shí)驗(yàn)材料與儀器：

器材：大白鼠、手術(shù)剪、滴管鑷子、紗布、漏斗、量筒、燒杯、研缽刻度吸量管

試管及試管架、恒溫水箱、

試劑：0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液0.2mol/L丙二酸溶液0.02mol/L丙二酸溶液、1/15mol/LPH=7.4磷酸鹽緩沖液、0.02%甲烯藍(lán)

第五頁(yè)，共12頁(yè)。1、酶提取液的制備：取大白鼠的骨骼肌，用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸緩沖液pH在7.4。在研缽中碾碎，然后用紗布過(guò)濾，用干凈的燒杯收集過(guò)濾的備用。實(shí)驗(yàn)步驟:第六頁(yè)，共12頁(yè)。

2、取試管6支，編號(hào)，在按圖步驟操作酶提取液（ml）磷酸緩沖液（ml）0.2mol/L琥珀酸（滴）0.02mol/L琥珀酸（滴）0.2mol/L丙二酸溶液（滴）0.02mol/L丙二酸溶液（滴）蒸餾水（滴）甲烯藍(lán)（滴）褪色時(shí)間（分鐘）試管12—8———83試管22—8——8—3試管32—8—8——3試管42——88——3試管5—28———83試管62—8———83試管6：酶提取液在100℃水浴中保溫第七頁(yè)，共12頁(yè)。3.各管溶液立即混均勻，沿試管壁加入液體石蠟，約0.5cm，各管置于37℃的水浴中保溫，切勿搖動(dòng)試管，隨時(shí)觀(guān)察比較各試管顏色的變化，記錄褪色時(shí)間。

第八頁(yè)，共12頁(yè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：褪色時(shí)間（分鐘）[I]/[S]試管1試管2試管3試管4試管5試管6第九頁(yè)，共12頁(yè)?！咀⒁馐马?xiàng)】：

1、酶提取液的制備應(yīng)操作迅速，以防止酶活性降低。2、加入液體石蠟的作用是隔絕空氣，以避免空氣中的氧氣對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響，因此加石蠟時(shí)試管壁要傾斜，注意不要產(chǎn)生氣泡。3、37℃水浴保溫過(guò)程中，不能搖動(dòng)試管，避免空氣中的氧氣接觸反應(yīng)溶液，使得還原型的甲烯白重新氧化成藍(lán)色。4.、37℃水浴保溫過(guò)程中，要注意隨時(shí)觀(guān)察各試管的褪色情況。5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)束后，一定要洗干凈試管內(nèi)的液體石蠟。第十頁(yè)，共12頁(yè)。實(shí)驗(yàn)討論：

1、酶提取液中有琥珀酸脫氫酶活性，表1所示，在試管1中沒(méi)有抑制劑，但琥珀酸依然能脫氫，使得甲烯藍(lán)反應(yīng)得甲烯白。

2、各管的褪色有明顯的時(shí)間差別，褪色時(shí)間隨[I]/[S]逐漸增大，而增大。

3、丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶抑制作用的類(lèi)型是競(jìng)爭(zhēng)性抑制，其特點(diǎn)：最大反應(yīng)速率Vmax不變，米氏常數(shù)Km增大，競(jìng)爭(zhēng)性抑制可以通過(guò)增大底物濃度來(lái)減輕抑制程度。

4、本實(shí)驗(yàn)中5號(hào)、6號(hào)試管的作用是做對(duì)照，5號(hào)試管和1號(hào)試管做對(duì)照，說(shuō)