FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件1

流式細(xì)胞術(shù)檢測原理及在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)檢測原理及在1流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometryFCM)是利用流式細(xì)胞儀對單個生物顆粒(紅細(xì)胞、白細(xì)胞、各類組織細(xì)胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和生物學(xué)特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析，并能對特定細(xì)胞群體加以分選的分析技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)的概念流式細(xì)胞術(shù)的概念2FCM的工作原理

流式細(xì)胞儀組成：1.液流系統(tǒng)2.光學(xué)系統(tǒng)3.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)FCM的工作原理

流式細(xì)胞儀組成：31.液流系統(tǒng)：由樣本和鞘液組成。待測細(xì)胞被制備成單個細(xì)胞的懸液，經(jīng)熒光染料標(biāo)記的McAb染色后置入樣品管中，在清潔氣體壓力下進(jìn)入流動室形成樣本流。在鞘液(sheath)的約束下，通過噴嘴，使其形成單細(xì)胞液柱。FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件14FlowCellInjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluidFlowCellInjectorFluorescence5鞘液：輔助樣本流能被正常檢測的基質(zhì)液作用：

1.包裹在樣本流的周圍，使其處于噴嘴中心，以保證檢測的精確性；2.防止樣本流中的細(xì)胞靠近噴孔壁而堵塞噴孔。鞘液：輔助樣本流能被正常檢測的基質(zhì)液62.光學(xué)系統(tǒng)：由激發(fā)光源、分光鏡、光束成形器等組成。激光是較常用的光源,穩(wěn)定性好、單色性好。檢測信號：散射光和熒光信號被收集、處理、轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號。2.光學(xué)系統(tǒng)：由激發(fā)光源、分光鏡、光束成形器等組成。7InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluidInjectorFluorescencesignalsFo8FCM檢測信號散射光信號

前向散射光（fowordscatter,FS）：在激光束正前方的檢測器，用于檢測細(xì)胞或其他粒子物體的表面屬性，如大小、形狀等。反映細(xì)胞顆粒的大小。

側(cè)向散射光（sidescatter，SS）：與激光束垂直方向的檢測器為側(cè)向檢測器，主要用于檢測細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)屬性，可獲得細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的參數(shù)。反映顆粒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度。熒光信號(反映被染上熒光的細(xì)胞數(shù)量多少）FCM檢測信號散射光信號9FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件110FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件111FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件112FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件113熒光信號每種熒光染料都有特定的激發(fā)波長，受激光激發(fā)后會產(chǎn)生特定波長的熒光和顏色，如綠色、紅色、黃色等。流式細(xì)胞儀就是利用不同波長的光學(xué)濾片來檢測這些特定發(fā)射波長的光學(xué)信號。熒光信號反映被染上熒光的細(xì)胞數(shù)量多少。熒光信號每種熒光染料都有特定的激發(fā)波長，受激光激發(fā)后會產(chǎn)生特14FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件1153.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：主要由計算機(jī)及其軟件組成。通過檢測散射光及熒光信號對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析存儲、顯示。具有智能化、自動化特點。3.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：主要由計算機(jī)及其軟件組成。16FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件117免疫熒光標(biāo)記直接免疫熒光染色法：選用熒光標(biāo)記的McAb是直接針對細(xì)胞表面抗原特異性標(biāo)志的單一抗體,如抗CD3-FITC抗體、抗CD4-PE抗體、抗CD8-PeCy5抗體。間接免疫熒光染色法：選用特異性McAb與相應(yīng)抗原結(jié)合后，再用熒光素標(biāo)記的第二抗體進(jìn)行染色。雙標(biāo)記或多標(biāo)記分析：目前使用的流式細(xì)胞儀能用一個激光束激發(fā)檢測三色甚至四色熒光信號。檢測時需注意熒光補(bǔ)償。免疫熒光標(biāo)記直接免疫熒光染色法：選用熒光標(biāo)記的McAb是直接18常用免疫熒光染料組合常用免疫熒光染料組合19FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件120熒光補(bǔ)償：每兩種熒光信號間不可避免會出現(xiàn)重疊現(xiàn)象，重疊區(qū)越大，信號檢測的準(zhǔn)確性就越差，因此需計算機(jī)工作軟件進(jìn)行自動跟蹤調(diào)節(jié)補(bǔ)償。熒光補(bǔ)償：21

流式細(xì)胞儀的基本功能細(xì)胞表型分析(包括細(xì)胞膜、胞漿內(nèi)蛋白表達(dá)及核膜成份分析DNA含量及細(xì)胞周期分析：DNAcontentanalysis，如細(xì)胞凋亡檢測細(xì)胞分選cellsorting自身免疫性疾病相關(guān)HLA抗原分析、自身抗體的檢測：如用Hep-2細(xì)胞檢測抗核抗體。流式細(xì)胞儀的基本功能22臨床免疫學(xué)臨床血液學(xué)臨床腫瘤學(xué)血栓與止血骨髓和器官移植基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用臨床免疫學(xué)流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用23

FCM在臨床免疫學(xué)中的應(yīng)用(1)淋巴細(xì)胞亞群分析T細(xì)胞：CD3+CD4+(Th)CD8+(Ts/Tc)B細(xì)胞：CD19+NK細(xì)胞：CD3-CD16+CD56+FCM在臨床免疫學(xué)中的應(yīng)用24(2)淋巴細(xì)胞亞群細(xì)分T細(xì)胞：Ts：CD8+CD28-Tc：CD8+CD28+Th：CD4+CD29+

B細(xì)胞：B1：CD5+CD19-B2：CD5+

CD19+(2)淋巴細(xì)胞亞群細(xì)分25根據(jù)T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同還可將CD4+、CD8+分為

CD4+:Th1:CD4+IFN-r+Th2:CD4+IL4+Th0:CD4+IFN-r+IL4+

CD8+:Tc1:CD8+IFN-r+Tc2:CD8+IL4+Tc0:CD8+IFN-r+IL4+根據(jù)T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同還可將CD4+、CD8+分為26輔助性T細(xì)胞亞群的生物學(xué)功能及臨床意義Th1細(xì)胞：介導(dǎo)細(xì)胞免疫、細(xì)胞毒性T細(xì)胞的生長和活化、巨噬細(xì)胞的活化、介導(dǎo)遲發(fā)型過敏反應(yīng)。其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致炎癥慢性遷延，器官特異性自身免疫病，急性排異反應(yīng)和接觸性皮炎等的發(fā)病和免疫病理損傷。Th2細(xì)胞：介導(dǎo)體液免疫，促進(jìn)B細(xì)胞的生長、活化和分化，是IgG1和IgE類抗體的轉(zhuǎn)換因子，其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致特異性過敏反應(yīng)，參與高IgE綜合癥和嗜酸性粒細(xì)胞增多癥。輔助性T細(xì)胞亞群的生物學(xué)功能及臨床意義27(3)活化淋巴細(xì)胞亞群活化總T細(xì)胞：CD3+/HLA—DR+靜止總T細(xì)胞：CD3+/HLA—DR-活化CD4+細(xì)胞：CD4+/HLA—DR+活化CD8+細(xì)胞：CD8+/HLA—DR+活化誘導(dǎo)分子：CD69白細(xì)胞介素2低親和力受體：CD25CD25+/CD3+：活化T細(xì)胞CD25-/CD3+：靜止T細(xì)胞(3)活化淋巴細(xì)胞亞群28(4)淋巴細(xì)胞功能分析：細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒試驗、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的測定自身免疫性疾病變態(tài)反應(yīng)性疾病免疫缺陷性疾病感染性疾病(病毒、細(xì)菌、寄生蟲感染)免疫治療監(jiān)測腫瘤免疫監(jiān)測移植免疫監(jiān)測(4)淋巴細(xì)胞功能分析：細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒試驗、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子29(二)FCM在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用1.白血病的MIC分型Morphology（形態(tài)學(xué)）Immunology（免疫學(xué)）Cytogenetics（細(xì)胞遺傳學(xué)）白血病分型是選擇化療方案和判斷預(yù)后的重要依據(jù)。白血病免疫分型是MIC分型的重要組成部分，也是對FAB分型的補(bǔ)充，對白血病的診斷、治療策略制定、預(yù)后判斷及對白血病發(fā)病機(jī)制的研究都具有重要作用。(二)FCM在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用30免疫分型的臨床意義

彌補(bǔ)FAB分型的不足

診斷其他血液系統(tǒng)腫瘤

診斷僅表達(dá)個別非本系列相關(guān)抗原的急性白血?。↙Y+—AML、MY+—ALL）

急性雙系或雙表型白血病的診斷

骨髓增生異常綜合征（MDS）免疫表型分析的臨床意義

免疫分型對鑒別慢性淋巴細(xì)胞增生性疾病各亞型亦有肯定的診斷價值免疫分型的臨床意義彌補(bǔ)FAB分型的不足31以下為各系列較特別的標(biāo)志：

AML：

MPO、CD33、CDl3、CDl4CDl5、CDllb、CDllc

T-ALL：

c／mCD3、CD2、CD5、CD7、CD4／CD8、CD38

B-ALL：

cCD22、cCD79、CDl9、CDl0、CD24、HLA—DR、CD20、CD38

造血干／祖細(xì)胞:CD34、CDll7、CD38、HLA-DR、ACl33以下為各系列較特別的標(biāo)志：32在AML各亞型的免疫分型中有時仍較難分辨，有以下特點可供參考：

①CD41、CD61是巨核細(xì)胞的標(biāo)志，見于FAB—M7，但血小板粘附于某細(xì)胞上可造成假陽性。

②CD71與血型糖蛋白是紅系的標(biāo)志，見于FAB—M6型。

③CDl4、CD64是單核細(xì)胞的標(biāo)志，見于M4或M5。

④FAB—M3，t(15；17)者典型的免疫表型是CDl3+、CD33+、CD9+、CD38+、CD34-、DR-。

⑤t(8；21)M2的表型為CDl3+、DR+、CD34+、CD33+、CDl5+、CDl9+或CD56+。

⑥M0與M1較難區(qū)分，應(yīng)有髓系標(biāo)志而無淋系標(biāo)志，胞漿MPO應(yīng)陰性。CD34及DR在M0較強(qiáng)，并可伴有CD7與CD4。在AML各亞型的免疫分型中有時仍較難分辨，有以下特點可供參考33

⑦CDll7+多見于AML。

⑧CD7常與CD34共表達(dá)，CD4見于M4、M5。CD2+見于M4Eo，往往伴有16號染色體異常。M3亦可有CD56+表達(dá)。正常粒細(xì)跑可表達(dá)CDl0。由此可見，單抗本身有其多向性，勿輕易判斷為雜合型白血病。

⑨T／B—ALL可分為幾個亞型，然而對臨床價值不大。但若B—ALL伴有CD34表達(dá)時，應(yīng)進(jìn)一步作遺傳學(xué)與基因檢測，以確定是否是Ph+ALL，不論是M—bcl/abl或m-bcr／ablmRNA陽性者，其預(yù)后均較差，應(yīng)接受大劑量化療或早期接受異基因骨髓移植。⑦CDll7+多見于AML。34FCM檢測白血病微小殘留病變(MRD):過去認(rèn)為FCM測定殘存白血病細(xì)胞不可靠，因為現(xiàn)用的McAb不能鑒別正常血細(xì)胞與白血病細(xì)胞。雖然至今尚未發(fā)現(xiàn)白血病細(xì)胞特異抗原，但近來有人提出根據(jù)白血病細(xì)胞的以下特征，F(xiàn)CM檢測的敏感度可明顯提高FCM檢測白血病微小殘留病變(MRD):35白血病細(xì)胞的某些抗原表達(dá)量明顯高于相應(yīng)的正常血細(xì)胞

如小兒ALL，其CDl0+細(xì)胞的熒光強(qiáng)度可高達(dá)3-4個對數(shù)值，而其CD45則為弱陽性或陰性。相應(yīng)正常細(xì)胞CDl0+的細(xì)胞熒光強(qiáng)度約為2個對數(shù)值，CD45為陽性。若能定量則更可靠。白血病細(xì)胞的某些抗原表達(dá)量明顯高于相應(yīng)的正常血細(xì)胞36FCM在臨床腫瘤學(xué)中的應(yīng)用1.血液標(biāo)本的檢查腫瘤患者的免疫功能檢查腫瘤患者的粘附分子檢查ICAM-1CD54ICAM-2CD102ICAM-3CD106CD62、CD63、CD42a/b、CD41/61、TSPFCM在臨床腫瘤學(xué)中的應(yīng)用37(2)腫瘤實體標(biāo)本的FCM檢查耐藥基因檢查粘附分子檢查細(xì)胞凋亡檢查細(xì)胞DNA分析增殖性核抗原腫瘤細(xì)胞耐藥性篩選腫瘤相關(guān)抗原激素受體與癌細(xì)胞生物行為有關(guān)的因子，如CD44(2)腫瘤實體標(biāo)本的FCM檢查38組織標(biāo)本的正確處理：

去除脂肪、結(jié)締組織洗滌除去紅細(xì)胞用眼科剪剪成肉糜狀用250至350目的銅網(wǎng)過濾要求：

細(xì)胞碎片、細(xì)胞連片少，單細(xì)胞要多組織標(biāo)本的正確處理：39利用特殊的熒光染料(PI、EB、AO等)與細(xì)胞內(nèi)DNA堿基結(jié)合，被這些熒光染料染色的細(xì)胞在激光照射下發(fā)射出熒光，熒光強(qiáng)度與DNA含量成正比。流式細(xì)胞儀通過測定細(xì)胞的熒光強(qiáng)度推算出細(xì)胞的DNA含量。細(xì)胞DNA分析原理利用特殊的熒光染料(PI、EB、AO等)與細(xì)胞內(nèi)DN40細(xì)胞周期與DNA的倍體關(guān)系細(xì)胞周期與DNA的倍體關(guān)系41DNA非2倍體出現(xiàn)是鑒別良性與惡性腫瘤的特異性指標(biāo):良性腫瘤和正常組織良性增生不出現(xiàn)DNA非2倍體細(xì)胞而惡性腫瘤?？沙霈F(xiàn)異倍體細(xì)胞；實體瘤以多倍體居多；實體惡性腫瘤的非2倍體出現(xiàn)率>70%,淋巴瘤和白血病以亞二倍體居多,出現(xiàn)率達(dá)50%。交界性腫瘤形態(tài)學(xué)介于良惡性之間,難于監(jiān)別。如果交界性腫瘤出現(xiàn)異倍體即已具有惡性特征,盡管病理形態(tài)學(xué)尚不能證實,也應(yīng)視為惡性。DNA非2倍體出現(xiàn)是鑒別良性與惡性腫瘤的特異性指標(biāo):42觀察病情演變判斷預(yù)后非整倍體的腫瘤惡性程度高，復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差。近二倍體和二倍體腫瘤:預(yù)后好。但少數(shù)腫瘤的DNA分析對預(yù)后無判斷價值。S期細(xì)胞比例的評估對腫瘤惡性程度和預(yù)后有意義,高S期腫瘤一般比低S期對化療敏感。觀察病情演變43DNA的倍體和DNA指數(shù)的關(guān)系DI=樣品G0/1細(xì)胞峰均道值正常二倍體標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞G0/1期細(xì)胞均道值DNA的倍體和DNA指數(shù)的關(guān)系DI=樣品G0/1細(xì)胞峰均道值44輔助診斷腫瘤估計腫瘤的預(yù)后監(jiān)測療效細(xì)胞DNA分析的臨床意義輔助診斷腫瘤細(xì)胞DNA分析的臨床意義45流式細(xì)胞術(shù)檢測原理及在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)檢測原理及在46流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometryFCM)是利用流式細(xì)胞儀對單個生物顆粒(紅細(xì)胞、白細(xì)胞、各類組織細(xì)胞、血小板、微生物等)以及人工合成微球的物理和生物學(xué)特性進(jìn)行多參數(shù)定量分析，并能對特定細(xì)胞群體加以分選的分析技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)的概念流式細(xì)胞術(shù)的概念47FCM的工作原理

流式細(xì)胞儀組成：1.液流系統(tǒng)2.光學(xué)系統(tǒng)3.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)FCM的工作原理

流式細(xì)胞儀組成：481.液流系統(tǒng)：由樣本和鞘液組成。待測細(xì)胞被制備成單個細(xì)胞的懸液，經(jīng)熒光染料標(biāo)記的McAb染色后置入樣品管中，在清潔氣體壓力下進(jìn)入流動室形成樣本流。在鞘液(sheath)的約束下，通過噴嘴，使其形成單細(xì)胞液柱。FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件149FlowCellInjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluidFlowCellInjectorFluorescence50鞘液：輔助樣本流能被正常檢測的基質(zhì)液作用：

1.包裹在樣本流的周圍，使其處于噴嘴中心，以保證檢測的精確性；2.防止樣本流中的細(xì)胞靠近噴孔壁而堵塞噴孔。鞘液：輔助樣本流能被正常檢測的基質(zhì)液512.光學(xué)系統(tǒng)：由激發(fā)光源、分光鏡、光束成形器等組成。激光是較常用的光源,穩(wěn)定性好、單色性好。檢測信號：散射光和熒光信號被收集、處理、轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號。2.光學(xué)系統(tǒng)：由激發(fā)光源、分光鏡、光束成形器等組成。52InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluidInjectorFluorescencesignalsFo53FCM檢測信號散射光信號

前向散射光（fowordscatter,FS）：在激光束正前方的檢測器，用于檢測細(xì)胞或其他粒子物體的表面屬性，如大小、形狀等。反映細(xì)胞顆粒的大小。

側(cè)向散射光（sidescatter，SS）：與激光束垂直方向的檢測器為側(cè)向檢測器，主要用于檢測細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)屬性，可獲得細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的參數(shù)。反映顆粒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度。熒光信號(反映被染上熒光的細(xì)胞數(shù)量多少）FCM檢測信號散射光信號54FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件155FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件156FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件157FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件158熒光信號每種熒光染料都有特定的激發(fā)波長，受激光激發(fā)后會產(chǎn)生特定波長的熒光和顏色，如綠色、紅色、黃色等。流式細(xì)胞儀就是利用不同波長的光學(xué)濾片來檢測這些特定發(fā)射波長的光學(xué)信號。熒光信號反映被染上熒光的細(xì)胞數(shù)量多少。熒光信號每種熒光染料都有特定的激發(fā)波長，受激光激發(fā)后會產(chǎn)生特59FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件1603.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：主要由計算機(jī)及其軟件組成。通過檢測散射光及熒光信號對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析存儲、顯示。具有智能化、自動化特點。3.數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：主要由計算機(jī)及其軟件組成。61FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件162免疫熒光標(biāo)記直接免疫熒光染色法：選用熒光標(biāo)記的McAb是直接針對細(xì)胞表面抗原特異性標(biāo)志的單一抗體,如抗CD3-FITC抗體、抗CD4-PE抗體、抗CD8-PeCy5抗體。間接免疫熒光染色法：選用特異性McAb與相應(yīng)抗原結(jié)合后，再用熒光素標(biāo)記的第二抗體進(jìn)行染色。雙標(biāo)記或多標(biāo)記分析：目前使用的流式細(xì)胞儀能用一個激光束激發(fā)檢測三色甚至四色熒光信號。檢測時需注意熒光補(bǔ)償。免疫熒光標(biāo)記直接免疫熒光染色法：選用熒光標(biāo)記的McAb是直接63常用免疫熒光染料組合常用免疫熒光染料組合64FCM原理及臨床應(yīng)用(新)課件165熒光補(bǔ)償：每兩種熒光信號間不可避免會出現(xiàn)重疊現(xiàn)象，重疊區(qū)越大，信號檢測的準(zhǔn)確性就越差，因此需計算機(jī)工作軟件進(jìn)行自動跟蹤調(diào)節(jié)補(bǔ)償。熒光補(bǔ)償：66

流式細(xì)胞儀的基本功能細(xì)胞表型分析(包括細(xì)胞膜、胞漿內(nèi)蛋白表達(dá)及核膜成份分析DNA含量及細(xì)胞周期分析：DNAcontentanalysis，如細(xì)胞凋亡檢測細(xì)胞分選cellsorting自身免疫性疾病相關(guān)HLA抗原分析、自身抗體的檢測：如用Hep-2細(xì)胞檢測抗核抗體。流式細(xì)胞儀的基本功能67臨床免疫學(xué)臨床血液學(xué)臨床腫瘤學(xué)血栓與止血骨髓和器官移植基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用臨床免疫學(xué)流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用68

FCM在臨床免疫學(xué)中的應(yīng)用(1)淋巴細(xì)胞亞群分析T細(xì)胞：CD3+CD4+(Th)CD8+(Ts/Tc)B細(xì)胞：CD19+NK細(xì)胞：CD3-CD16+CD56+FCM在臨床免疫學(xué)中的應(yīng)用69(2)淋巴細(xì)胞亞群細(xì)分T細(xì)胞：Ts：CD8+CD28-Tc：CD8+CD28+Th：CD4+CD29+

B細(xì)胞：B1：CD5+CD19-B2：CD5+

CD19+(2)淋巴細(xì)胞亞群細(xì)分70根據(jù)T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同還可將CD4+、CD8+分為

CD4+:Th1:CD4+IFN-r+Th2:CD4+IL4+Th0:CD4+IFN-r+IL4+

CD8+:Tc1:CD8+IFN-r+Tc2:CD8+IL4+Tc0:CD8+IFN-r+IL4+根據(jù)T淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的不同還可將CD4+、CD8+分為71輔助性T細(xì)胞亞群的生物學(xué)功能及臨床意義Th1細(xì)胞：介導(dǎo)細(xì)胞免疫、細(xì)胞毒性T細(xì)胞的生長和活化、巨噬細(xì)胞的活化、介導(dǎo)遲發(fā)型過敏反應(yīng)。其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致炎癥慢性遷延，器官特異性自身免疫病，急性排異反應(yīng)和接觸性皮炎等的發(fā)病和免疫病理損傷。Th2細(xì)胞：介導(dǎo)體液免疫，促進(jìn)B細(xì)胞的生長、活化和分化，是IgG1和IgE類抗體的轉(zhuǎn)換因子，其功能亢進(jìn)將導(dǎo)致特異性過敏反應(yīng)，參與高IgE綜合癥和嗜酸性粒細(xì)胞增多癥。輔助性T細(xì)胞亞群的生物學(xué)功能及臨床意義72(3)活化淋巴細(xì)胞亞群活化總T細(xì)胞：CD3+/HLA—DR+靜止總T細(xì)胞：CD3+/HLA—DR-活化CD4+細(xì)胞：CD4+/HLA—DR+活化CD8+細(xì)胞：CD8+/HLA—DR+活化誘導(dǎo)分子：CD69白細(xì)胞介素2低親和力受體：CD25CD25+/CD3+：活化T細(xì)胞CD25-/CD3+：靜止T細(xì)胞(3)活化淋巴細(xì)胞亞群73(4)淋巴細(xì)胞功能分析：細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒試驗、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的測定自身免疫性疾病變態(tài)反應(yīng)性疾病免疫缺陷性疾病感染性疾病(病毒、細(xì)菌、寄生蟲感染)免疫治療監(jiān)測腫瘤免疫監(jiān)測移植免疫監(jiān)測(4)淋巴細(xì)胞功能分析：細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒試驗、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子74(二)FCM在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用1.白血病的MIC分型Morphology（形態(tài)學(xué)）Immunology（免疫學(xué)）Cytogenetics（細(xì)胞遺傳學(xué)）白血病分型是選擇化療方案和判斷預(yù)后的重要依據(jù)。白血病免疫分型是MIC分型的重要組成部分，也是對FAB分型的補(bǔ)充，對白血病的診斷、治療策略制定、預(yù)后判斷及對白血病發(fā)病機(jī)制的研究都具有重要作用。(二)FCM在臨床血液學(xué)中的應(yīng)用75免疫分型的臨床意義

彌補(bǔ)FAB分型的不足

診斷其他血液系統(tǒng)腫瘤

診斷僅表達(dá)個別非本系列相關(guān)抗原的急性白血?。↙Y+—AML、MY+—ALL）

急性雙系或雙表型白血病的診斷

骨髓增生異常綜合征（MDS）免疫表型分析的臨床意義

免疫分型對鑒別慢性淋巴細(xì)胞增生性疾病各亞型亦有肯定的診斷價值免疫分型的臨床意義彌補(bǔ)FAB分型的不足76以下為各系列較特別的標(biāo)志：

AML：

MPO、CD33、CDl3、CDl4CDl5、CDllb、CDllc

T-ALL：

c／mCD3、CD2、CD5、CD7、CD4／CD8、CD38

B-ALL：

cCD22、cCD79、CDl9、CDl0、CD24、HLA—DR、CD20、CD38

造血干／祖細(xì)胞:CD34、CDll7、CD38、HLA-DR、ACl33以下為各系列較特別的標(biāo)志：77在AML各亞型的免疫分型中有時仍較難分辨，有以下特點可供參考：

①CD41、CD61是巨核細(xì)胞的標(biāo)志，見于FAB—M7，但血小板粘附于某細(xì)胞上可造成假陽性。

②CD71與血型糖蛋白是紅系的標(biāo)志，見于FAB—M6型。

③CDl4、CD64是單核細(xì)胞的標(biāo)志，見于M4或M5。

④FAB—M3，t(15；17)者典型的免疫表型是CDl3+、CD33+、CD9+、CD38+、CD34-、DR-。

⑤t(8；21)M2的表型為CDl3+、DR+、CD34+、CD33+、CDl5+、CDl9+或CD56+。

⑥M0與M1較難區(qū)分，應(yīng)有髓系標(biāo)志而無淋系標(biāo)志，胞漿MPO應(yīng)陰性。CD34及DR在M0較強(qiáng)，并可伴有CD7與CD4。在AML各亞型的免疫分型中有時仍較難分辨，有以下特點可供參考78

⑦CDll7+多見于AML。

⑧CD7常與CD34共表達(dá)，CD4見于M4、M5。CD2+見于M4Eo，往往伴有16號染色體異常。M3亦可有CD56+表達(dá)。正常粒細(xì)跑可表達(dá)CDl0。由此可見，單抗本身有其多向性，勿輕易判斷為雜合型白血病。

⑨T／B—ALL可分為幾個亞型，然而對臨床價值不大。但若B—ALL伴有CD34表達(dá)時，應(yīng)進(jìn)一步作遺傳學(xué)與基因檢測，以確定是否是Ph+ALL，不論是M—bcl/abl或m-bcr／ablmRNA陽性者，其預(yù)后均較差，應(yīng)接受大劑量化療或早期接受異基因骨髓移植。⑦CDll7+多見于AML。79FCM檢測白血病微小殘留病變(MRD):過去認(rèn)為FCM測定殘存白血病細(xì)胞不可靠，因為現(xiàn)用的McAb不能鑒別正常血細(xì)胞與白血病細(xì)胞。雖然至今尚未發(fā)現(xiàn)白血病細(xì)胞特異抗原，但近來有人提出根據(jù)白血病細(xì)胞的以下特征，F(xiàn)CM檢測的敏感度可明顯提高FCM檢測白血病微小殘留病變