實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌的芽孢染色法課件

實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌的芽孢染色法實(shí)驗(yàn)的目的要求學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法初步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征細(xì)菌芽孢染色的意義芽孢又稱內(nèi)生孢子，是某些細(xì)菌生長(zhǎng)到一定階段在菌體內(nèi)形成的休眠體，通常呈圓形或橢圓形。細(xì)菌能否形成芽孢以及芽孢的形狀、芽孢在芽孢囊內(nèi)的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。形成芽孢需要一定的外界條件，這些條件因菌種而異。炭疽芽孢桿菌在有氧(O2)條件下才能形成芽孢，而破傷風(fēng)芽孢桿菌則在無(wú)氧條件下形成芽孢。芽孢對(duì)惡劣環(huán)境條件有很強(qiáng)的抵抗能力，尤其耐高溫。如肉毒梭狀芽孢桿菌的芽孢，在沸水中可存活6小時(shí)，在180℃的干熱中，10分鐘仍可存活。在一定條件下，芽孢保持活力數(shù)年至數(shù)十年之久。高溫滅菌的主要目的就是殺死細(xì)菌的芽胞。芽孢在適宜條件下萌發(fā)成新個(gè)體，但一個(gè)芽孢只產(chǎn)生一個(gè)營(yíng)養(yǎng)體，所以芽孢不是一種繁殖方式。細(xì)菌的芽孢具有厚而致密的壁不易著色，若用一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色(芽孢呈無(wú)色透明狀)。芽孢染色法就是根據(jù)芽孢既難以染色而一旦染上后又難以脫色這一特點(diǎn)而設(shè)計(jì)的。所有的芽孢染色法都基于同一個(gè)原則：除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱，以促進(jìn)芽孢著色，再使菌體脫色，而芽孢上的染料則難以滲出，故仍保留原有的顏色，然后用對(duì)比度強(qiáng)的染料對(duì)菌體復(fù)染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。細(xì)菌芽孢染色原理材料菌種:蘇云金芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌染色劑：5%孔雀綠水溶液0.5%番紅水溶液儀器或其他用具：Eppendorf管Eppendorf管架載玻片顯微鏡電磁爐搪瓷燒杯方法Schaeffer-Fulton氏染色法(P78)改良的Schaeffer-Fulton氏染色法制備菌懸液染色涂片固定脫色復(fù)染鏡檢改良的Schaeffer-Fulton氏染色法制片生理鹽水

1、滴生理鹽水

挑取少量菌苔與生理鹽水混勻均勻涂布或電吹風(fēng)吹干2、涂片滴半滴生理鹽水在載玻片中央

3、干燥室溫自然晾干脫色待玻片冷卻后，水洗脫色不要直接沖菌膜復(fù)染0.5%番紅水溶液1、滴番紅水溶液滴加數(shù)滴番紅染液在菌膜上，染色2min2、水洗不要直接沖菌膜鏡檢或吸水紙吸干1、干燥或電吹風(fēng)吹干室溫自然晾干2、鏡檢顯微鏡操作油鏡使用制備菌懸液生理鹽水

1、滴生理鹽水

挑取2-3環(huán)菌苔與生理鹽水混勻均勻2、制備菌懸液在EP管中滴2滴生理鹽水染色