艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程V:1.0精細(xì)整理，僅供參考艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程日期：20xx年X月HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)室SOP文件適用部門：檢驗(yàn)科目錄第一部分工作制度 -1-實(shí)驗(yàn)室工作制度 -1-HIV標(biāo)本采集與接收登記制度 -1-艾滋病實(shí)驗(yàn)室保密制度 -2-艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室常規(guī)消毒清理工作制度 -2-差錯事故處理制度 -3-報(bào)告單簽發(fā)審核制度 -3-設(shè)備管理制度 -4-試劑管理制度 -4-艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)制度 -5-艾滋病病毒職業(yè)暴露預(yù)防處理方案 -5-第二部分標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 -8-第二章樣品采集與處理 -8-第二章標(biāo)準(zhǔn)操作程序 -8-一、北京金豪 -8-二、上?？迫A生物 -9-三、英科新創(chuàng) -10-第三章結(jié)果報(bào)告與注意事項(xiàng) -12-第三部分設(shè)備SOP文件 -13-一、多功能自動酶標(biāo)儀RT-2100C -13-二、KHBST－36W洗板機(jī) -16-三、電熱恒溫水箱 -18-第四部分流程圖 -20-一、HIV抗體篩查流程圖 -20-二、暴露級別的評估 -21-附件：血清加樣表 -22-第一部分工作制度實(shí)驗(yàn)室工作制度室內(nèi)應(yīng)經(jīng)常保持整潔，各種儀器設(shè)備要安裝適當(dāng)，器皿試劑擺放整齊，標(biāo)志清晰，有良好的通風(fēng)設(shè)備。實(shí)驗(yàn)室工作人員工作時一律穿制服，保持衣帽整潔，試驗(yàn)過程中應(yīng)專心致志、認(rèn)真負(fù)責(zé)，堅(jiān)守工作崗位，不得隨意串崗、閑談，保持實(shí)驗(yàn)室安靜，下班離開實(shí)驗(yàn)室前要檢查并關(guān)好水、電、門、窗等，注意實(shí)驗(yàn)室安全。認(rèn)真開展實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制工作，儀器設(shè)備應(yīng)定期保養(yǎng)，有溫度記錄，檢測標(biāo)本的保存要求符合規(guī)范要求。實(shí)驗(yàn)室不得放置與測試無關(guān)的物品，水、溫、濕度、光照、防震、防塵、防噪聲等，環(huán)境必須符合實(shí)驗(yàn)室的工作要求。實(shí)驗(yàn)和樓道內(nèi)必須配置足夠的安全防火措施，并定期檢查保養(yǎng)。對不同屬性、品種和含量水平的試樣，應(yīng)有足夠的試驗(yàn)區(qū)域，予以分離檢驗(yàn)，尤其是已知具有生物危害的試樣必須分離檢驗(yàn)。防止損害工作人員健康和污染環(huán)境。與檢驗(yàn)無關(guān)人員不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，外單位人員聯(lián)系工作，一律在辦公室接待。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時清理實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場和用品，對染菌帶毒的器具廢棄物應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行消毒無菌處理。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止吸煙、用餐和進(jìn)食。HIV標(biāo)本采集與接收登記制度采樣前和接收標(biāo)本時應(yīng)核對病人身份，嚴(yán)格執(zhí)行查對制度。采血時應(yīng)戴好手套、帽子、口罩。HIV標(biāo)本采集應(yīng)建立詳細(xì)的記錄本，記錄內(nèi)容包括：送檢單位、病人姓名、門診號、數(shù)量、種類（血清）、送樣者、接收者或采集者。采集后，應(yīng)將HIV樣本單獨(dú)分裝，勿與其它項(xiàng)目共用。艾滋病實(shí)驗(yàn)室保密制度為確保艾滋病實(shí)驗(yàn)室所有資料嚴(yán)格保密，應(yīng)遵守以下制度1、與HIV/AIDS相關(guān)檢測項(xiàng)目的所有資料均應(yīng)嚴(yán)格保密，包括采樣記錄與檢測記錄的保管，報(bào)告單的發(fā)放和送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室檢測等。2、工作人員不得向無關(guān)人員提供檢驗(yàn)結(jié)果，要妥善保存各種實(shí)驗(yàn)記錄。3、對初篩疑似陽性感染者不能告訴受檢者本人，更不能到處亂講。4、實(shí)驗(yàn)室的有關(guān)檢驗(yàn)資料，檔案、結(jié)果記錄其他人不得翻錄查閱，修改和銷毀。5、實(shí)驗(yàn)室工作人員，不能在非正式場合對外提供任何結(jié)果、數(shù)據(jù)。艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室常規(guī)消毒清理工作制度1、檢測可疑樣品時，充分準(zhǔn)備好廢棄物消毒具及消毒藥、液。如：次氯酸鈉含有效氯2000—5000mg/L，75%乙醇和2%戊二醛。2、實(shí)驗(yàn)室用的吸頭及時打入消毒器皿中。3、一次性手套，隔離服更換后，應(yīng)丟棄在一次性垃圾袋內(nèi)。4、常用消毒方法、物理消毒方法4.1.1、高壓蒸汽消毒，121°C，保持15—20min；、化學(xué)消毒方法4.2.1、廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉4.2.2、工作臺面及儀器表面：75%乙醇4.2.3、溢出物：5000mg/L次氯酸鈉4.2.4、污染的臺面和器具：2000mg/L次氯酸鈉5、實(shí)驗(yàn)室中發(fā)生可疑樣品溢出時，應(yīng)及時用75%乙醇噴灑，然后用消毒劑浸泡的吸水物質(zhì)覆蓋10-15分鐘，最后再用消毒劑清洗該地方，擦干。6、全部實(shí)驗(yàn)工作結(jié)束后，應(yīng)對實(shí)驗(yàn)臺、儀器、設(shè)備（接觸部位）地面進(jìn)行徹底消毒處理。7、廢棄物處理

從HIV實(shí)驗(yàn)室出來的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、包裝盒和其他物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物。差錯事故處理制度艾滋病檢測工作人員必須要有高度的責(zé)任心和嚴(yán)肅的法制觀念，嚴(yán)防差錯事故的發(fā)生。由于責(zé)任心不強(qiáng)、不認(rèn)真執(zhí)行規(guī)章制度，不遵守操作規(guī)程或技術(shù)因素而引發(fā)檢驗(yàn)錯誤，對病人未造成嚴(yán)重后果的，稱為差錯。差錯按程度不同，分為一般差錯和嚴(yán)重差錯。一級差錯記差錯一次，二級差錯扣款50元，三級差錯扣除當(dāng)月效益工資。一級差錯：

（1）違反操作規(guī)程，導(dǎo)致標(biāo)本損壞，需重新采集標(biāo)本或由于接收標(biāo)本未認(rèn)真查對，違反查對制度，影響檢驗(yàn)者。（2）工作環(huán)境不能做到5S管理、違反生物安全者。（3）未按時記錄結(jié)果、繪制質(zhì)控圖、當(dāng)發(fā)現(xiàn)失控時隱瞞不報(bào)者。二級差錯：（1）未按時間先后順序使用試劑，導(dǎo)致試劑過期或由于存放不當(dāng)造成試劑變質(zhì)者。（2）項(xiàng)目漏查、做錯項(xiàng)目，且標(biāo)本已處理，需再次采取標(biāo)本檢驗(yàn)者。(3)因操作不當(dāng)，導(dǎo)致設(shè)備故障，影響較大者。三級差錯：（1）漏做、錯做一般標(biāo)本的檢驗(yàn)?zāi)康?，編錯試管號碼，標(biāo)錯標(biāo)本聯(lián)號、采錯病人標(biāo)本，寫錯檢驗(yàn)結(jié)果并已發(fā)出報(bào)告者。（2）粗心大意寫錯報(bào)告難以挽回者。(3)因責(zé)任心不強(qiáng)、管理不善導(dǎo)致陽性標(biāo)本丟失者。報(bào)告單簽發(fā)審核制度各崗位的工作由本崗位人員進(jìn)行操作檢驗(yàn)，然后填寫檢驗(yàn)報(bào)告單。工作完成后，再對本崗位所有的檢驗(yàn)報(bào)告進(jìn)行核查一次，在你認(rèn)為可以發(fā)出時，蓋上檢驗(yàn)者印章，填寫好報(bào)告日期。交給本實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或有資質(zhì)的高年資檢驗(yàn)人員核查簽名；但在危急情況下或單獨(dú)一人值班時（如夜班）除外。沒有上崗證人員不得單獨(dú)簽發(fā)檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告單。專業(yè)責(zé)任主管技師對本專業(yè)的所有報(bào)告單進(jìn)行審核，審核的基本內(nèi)容有：臨床醫(yī)師所申請的檢驗(yàn)項(xiàng)目是否已全部檢驗(yàn)，有無漏項(xiàng)；檢驗(yàn)結(jié)果的填寫是否清楚、正確；檢驗(yàn)報(bào)告單上所有內(nèi)容是否全部填寫完整；有無非常異常的、難以解釋的結(jié)果；有無書寫錯誤；是否有需要復(fù)查的結(jié)果當(dāng)發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果有凝議時可指令本崗位人員對檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行復(fù)查。確認(rèn)報(bào)告無問題時蓋章后，方可發(fā)出報(bào)告。設(shè)備管理制度由科主任或科室主管負(fù)責(zé)監(jiān)督和檢查儀器設(shè)備的使用狀況，定期校準(zhǔn)儀器的準(zhǔn)確度。各科應(yīng)對本科室儀器設(shè)備建立臺賬明細(xì)。每月應(yīng)向總庫遞交儀器設(shè)備使用狀況表，并存檔。貴重儀器應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理。儀器操作前必須培訓(xùn)、考核，仔細(xì)閱讀儀器操作說明書，熟練掌握該儀器的使用方法及維護(hù)辦法，考核合格后方可操作。當(dāng)班者在使用中應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，遇到問題應(yīng)作及時處理，并詳細(xì)記錄。問題嚴(yán)重者，應(yīng)及時上報(bào)科主任或主管加以解決。每次使用完畢，應(yīng)檢查儀器的電源、廢液傾倒情況，并詳細(xì)記錄該次使用情況。對有溫度要求的儀器設(shè)備，如冰箱冷藏室、冷凍室及恒溫培養(yǎng)箱、水浴箱等，均應(yīng)建立登記本，每天監(jiān)測溫度。試劑管理制度為了更好地管理檢驗(yàn)科試劑，由主管對檢驗(yàn)科試劑申購、品牌、質(zhì)量、價格、使用及管理情況進(jìn)行督查。每周上報(bào)周計(jì)劃，各組人員根據(jù)各崗情況，認(rèn)真、詳細(xì)填寫計(jì)劃表，務(wù)必注明詳細(xì)的名稱、規(guī)格、數(shù)量及品牌。檢驗(yàn)科試劑必須由主管審核，并負(fù)責(zé)報(bào)物流中心采購，品牌不得隨意更改。杜絕浪費(fèi)和積壓。所用的試劑必須符合質(zhì)量要求，必須有三證。不得使用過期、劣質(zhì)試劑。供應(yīng)商所送的試劑由總庫清點(diǎn)后才能接收，特殊試劑由檢驗(yàn)科主管清點(diǎn)后才能在貨單上簽字，有出入者必須向科主任或物流中心主任報(bào)告，再將貨單交物流中心統(tǒng)一結(jié)賬。領(lǐng)用時應(yīng)檢查物品質(zhì)量和試劑品名、廠家、人份、批號、過期時間及外包裝有無滲漏等，若有問題，應(yīng)及時向總庫反映。冰箱內(nèi)不能貯存乙醚、異戊烷或類似的易燃、可燃性液體。艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)制度為確保實(shí)驗(yàn)室人員的工作安全，防止交叉感染，請嚴(yán)格遵守安全防護(hù)制度1、工作人員要完成與工作有關(guān)的充足有效的技術(shù)培訓(xùn)，要了解HIV危害，提高全員安全意識，實(shí)驗(yàn)室安全負(fù)責(zé)人要對工作和環(huán)境的安全負(fù)責(zé)，所有工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和他人的安全。3、對有放試劑、樣品血清的冰箱專人管理。4、實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)熟練掌握操作知識和消毒技術(shù)。5、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿隔離衣，戴手套，傳染性危險大時應(yīng)戴雙層手套，戴防護(hù)鏡，口罩，如防護(hù)用具破損應(yīng)及時更換，不用戴手套的手觸摸暴露的皮膚等部位。6、實(shí)驗(yàn)期間盡量避免使用利器，易碎器皿，禁止采用口腔吸液管。7、送檢樣品應(yīng)視為有潛在傳染性，由專人接管，登記，存放，提取。9、實(shí)驗(yàn)用吸頭、手套、隔離服、污染物、廢棄物均放在指定垃圾袋中統(tǒng)一進(jìn)行消毒，焚燒到無害化處理。10、不得在實(shí)驗(yàn)室中吃食物，化妝打扮等，不得在實(shí)驗(yàn)室會客。11、實(shí)驗(yàn)室用品（包括工作服）不得用于其他用途，不可將私人和無關(guān)的物品帶入實(shí)驗(yàn)室。12、工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作服，用肥皂和流動水洗手，洗手后離開實(shí)驗(yàn)室。

13、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，要對工作平臺、儀器、地面進(jìn)行消毒處理。14、遇有意外事故，應(yīng)立即口頭和書面報(bào)告上級部門，并進(jìn)行局部處理，如含氯消毒劑浸泡傷口，洗眼，漱口等，如遇高危意外事故，除進(jìn)行局部處理外，同時應(yīng)立即采取預(yù)防措施，包括對其隨訪，HIV檢測，休息并暫離崗位二個月，按醫(yī)囑服用HIV藥物等。艾滋病病毒職業(yè)暴露預(yù)防處理方案為維護(hù)醫(yī)務(wù)人員及其他部門有關(guān)人員的職業(yè)安全，有效預(yù)防在工作中發(fā)生職業(yè)暴露感染艾滋病病毒，一旦發(fā)生職業(yè)暴露后最大限度的避免或減少艾滋病病毒感染，特制定本方案。

一、職業(yè)暴露（一）職業(yè)暴露是指醫(yī)務(wù)人員以及有關(guān)工作人員，在從事艾滋病防治工作及相關(guān)工作的過程中意外被艾滋病毒感染者或者艾滋病患者的血液、體液污染了皮膚或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭及其他銳器刺破皮膚，有可能被艾滋病病毒感染的情況。（二）數(shù)據(jù)分析表明，醫(yī)護(hù)和預(yù)防保健等人員對艾滋病病毒和艾滋病患者從事醫(yī)療和實(shí)驗(yàn)檢測活動是比較安全的。執(zhí)行嚴(yán)格的安全操作及防護(hù)措施，醫(yī)護(hù)及檢驗(yàn)等人員的暴露事件是可以避免的。二、職業(yè)暴露的預(yù)防1、醫(yī)務(wù)人員對所有病人的血液、體液(包括羊水、心包液、胸腔液、腹腔液、腦脊液、滑液、陰道分泌物等人體物質(zhì)，下同)及被血液、體液污染的物品均視為具有傳染性的病原物質(zhì)，在接觸這些物質(zhì)時，必須采取防護(hù)措施。2、醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行有可能接觸血液、體液的診療和護(hù)理操作時必須戴手套，操作完畢，脫去手套后立即洗手，必要時進(jìn)行手消毒。3、在診療、護(hù)理操作過程中，有可能發(fā)生病人血液、體液飛濺到醫(yī)務(wù)人員的面部時，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)戴手套、具有防滲透性能的口罩、防護(hù)眼鏡；有可能發(fā)生血液、體液大面積飛濺或者有可能污染醫(yī)務(wù)人員的身體時，還應(yīng)當(dāng)穿戴具有防滲性能的隔離衣或者圍裙。4、醫(yī)務(wù)人員手部皮膚發(fā)生破損，在進(jìn)行有可能接觸病人血液、體液的診療和護(hù)理操作時必須戴雙層手套。5、醫(yī)務(wù)人員在進(jìn)行侵襲性診療、護(hù)理操作過程中，要保證充足的陽光，并特別注意防止被針頭、縫合針、刀片等銳器刺傷或劃傷。

6、使用后的銳器應(yīng)當(dāng)直接放入耐刺、防滲漏的利器盒，或者利用針頭處理設(shè)備進(jìn)行安全處置，也可以使用具有安全性能的注射器、輸液器等醫(yī)用銳器，以防刺傷。7、禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。三、艾滋病病毒暴露后的預(yù)防處理（一）緊急局部處理：1、用肥皂液和流動水清洗污染的皮膚，用生理鹽水沖洗粘膜。2、如有傷口，應(yīng)當(dāng)在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，用再肥皂液和流動清水沖洗；禁止進(jìn)行傷口的局部擠壓。3、受傷部位的傷口沖洗后，應(yīng)當(dāng)用消毒液，如70%乙醇或者%碘伏進(jìn)行消毒，并包扎傷口；被暴露的粘膜，應(yīng)當(dāng)反復(fù)用生理鹽水沖洗干凈。（二）暴露后的報(bào)告及處理程序1、醫(yī)護(hù)人員發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后，要立即上報(bào)醫(yī)院領(lǐng)導(dǎo)（具體由醫(yī)院確定院內(nèi)程序，注意給暴露者保密）。及時報(bào)告天山區(qū)疾控中心，組織專家對暴露的級別和暴露源的病毒載量水平進(jìn)行評估和確定。2、醫(yī)務(wù)人員發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后，區(qū)疾控中心應(yīng)當(dāng)會同相關(guān)醫(yī)療衛(wèi)生單位對其進(jìn)行隨訪和咨詢。隨訪和咨詢的內(nèi)容包括：在暴露后第4周、第8周、第12周及6個月時對艾滋病病毒抗體進(jìn)行檢測，對服用藥物的毒性進(jìn)行監(jiān)控處理，觀察和記錄艾滋病病毒感染的早期癥狀等。不進(jìn)行暴露后預(yù)防用藥者，也要定期檢測艾滋病病毒抗體，檢測時間同上。3、在對艾滋病病毒職業(yè)暴露事件的整個處理過程中，必須始終做好保密工作。凡涉及暴露者個人的相關(guān)資料，不得向無關(guān)單位和人員泄露。四、暴露后預(yù)防性用藥

對發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露的醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)根據(jù)暴露源病毒載量水平實(shí)施預(yù)防性用藥方案。

預(yù)防性用藥應(yīng)當(dāng)在發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后盡早開始，最好在4小時內(nèi)實(shí)施，最遲不得超過24小時；即使超過24小時，也應(yīng)當(dāng)實(shí)施預(yù)防性用藥。暴露后預(yù)防性用藥的推薦方案：1、基本用藥程序：兩種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。如雙汰芝（AZT與3TC聯(lián)合制劑）

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mg/次，每日2次，用藥時間為連續(xù)服用28天?；騾⒖伎共《局委熤笇?dǎo)方案。本程序適用于輕度低危暴露。2、強(qiáng)化用藥程序：基本用藥程序加一種蛋白酶抑制劑，如佳息患或利托那韋。均使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。本程序適用于嚴(yán)重暴露。鑒于醫(yī)務(wù)人員暴露后的感染率很低而用藥的毒、副作用很大，所以應(yīng)嚴(yán)格掌握用藥的指征。第二部分標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程第二章樣品采集與處理樣本采集接患者申請單后，填寫血樣采集記錄，記錄包括患者日期、姓名、年齡、門診號、采集人簽名等。用帶分離膠的負(fù)壓管采集一定量的靜脈血，顛倒混勻5~6次，室溫下自然放置半小時，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min。標(biāo)本采集注意事項(xiàng)樣本采集嚴(yán)格按靜脈穿刺規(guī)范操作。采集樣本時應(yīng)注意安全，直接接觸HIV感染/艾滋病病人血液的操作，應(yīng)戴雙層手套，里層是PE手套，外層為乳膠手套。樣本保存在一周內(nèi)檢測的樣本，可存放于2~8℃；在一周以后檢測的樣本，須存放于-20℃。樣本運(yùn)送樣本運(yùn)送一般為血清或血漿，不運(yùn)送全血。容器要求：①血清應(yīng)置于帶蓋的離心管內(nèi)，管外應(yīng)有明顯的標(biāo)記，姓名與門診號要清晰；②在離心周圍應(yīng)墊有可緩沖吸水材料，以免破碎；③隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣本分開放置。④外層容器要求耐受性好、防滲漏、容納并保護(hù)第一層容器。天氣過熱，需采用干冰或冰壺冷藏運(yùn)輸。第二章標(biāo)準(zhǔn)操作程序一、北京金豪【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反應(yīng)板，用gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血清、血漿標(biāo)本中的HIV（1+2）抗體。【HIV篩查試驗(yàn)操作程序】試驗(yàn)前準(zhǔn)備：試驗(yàn)開始前將試劑和樣品放置于室溫（18~23℃）半小時。換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。緩沖液配制：用蒸餾水1：25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。試驗(yàn)操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個陰性對照孔，2個HIV-1陽性對照孔。取陽性對照和陰性對照分別充分混勻各50ul加入對照孔中，空白對照孔只加樣品稀釋液。2、每檢測孔加入樣品稀釋液50ul，待檢樣品50ul，可振搖5~10S。3、覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育30min。4、置洗板機(jī)上洗滌5遍（用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S，共洗滌5遍，洗完后孔上方及底部不應(yīng)殘存液體，禁止在濾紙上拍干）。5、每孔加酶結(jié)合物100ul，取新粘膠紙覆蓋反應(yīng)板，37±2℃孵育30min。6、同步驟4。7、每孔加入底物緩沖液50ul，TMB50ul，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育10min。8、每孔加入50ul1M硫酸終止反應(yīng)，充分混勻。9、在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm，或雙波長450/630nm測OD值。（三）試驗(yàn)結(jié)果1、NC≤2、Cutoff值＝+NC＝3、標(biāo)本OD值小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性（四）報(bào)告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實(shí)施檢測的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性報(bào)告。二、上?？迫A生物【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反應(yīng)板，用gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血清、血漿標(biāo)本中的HIV（1+2）抗體?！綡IV篩查試驗(yàn)操作程序】試驗(yàn)前準(zhǔn)備：試驗(yàn)開始前將試劑和樣品放置于室溫（18~23℃）半小時。換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。緩沖液配制：用蒸餾水1：25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。試驗(yàn)操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個陰性對照孔，3個HIV-1陽性對照孔。2、每孔加入100ul待檢樣品及對照（對照要后加），可振搖15S。3、覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育60±2min。4、置洗板機(jī)上洗滌5遍（用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S，共洗滌5遍，洗完后孔上方及底部不應(yīng)殘存液體，禁止在濾紙上拍干）。5、每孔加酶結(jié)合物100ul，取新粘膠紙覆蓋反應(yīng)板，37±2℃孵育30min。6、同步驟4。7、每孔加入底物緩沖液50ul，TMB50ul，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育10min。8、每孔加入50ul1M硫酸終止反應(yīng)，充分混勻。9、在2h內(nèi)置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm，或雙波長450/630nm測OD值。試驗(yàn)結(jié)果1、NC≤2、Cutoff值＝陽性對照值×10%3、標(biāo)本OD值小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性報(bào)告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實(shí)施檢測的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽性報(bào)告。三、英科新創(chuàng)【方法】膠體金法【原理】本試劑盒采用膠體金免疫技術(shù)和層析原理，定性測定血清樣本中的HIV1/2型抗體。血清陽性樣本中HIV抗體與膠體金標(biāo)記抗原結(jié)合形成復(fù)合物，由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動，經(jīng)過檢測線時與預(yù)包被的重組Au－HIV（1+2）－Ag則在對照線處與抗HIV單克隆抗體結(jié)合而富集顯色。 陰性標(biāo)本則僅在對照線處顯色，30分鐘內(nèi)觀察結(jié)果即可。【HIV篩查試驗(yàn)操作程序】試驗(yàn)前準(zhǔn)備：試驗(yàn)開始前將試劑和樣品放置于室溫（18~23℃）半小時，編號。戴好帽子、口罩、雙層手套。將所需測試卡從包裝盒中取出，置于臺面上。試驗(yàn)操作：1、用微量加樣器取60ul樣本血清，加到測試卡的加樣處。2、加樣后，陽性標(biāo)本可在1~30分鐘內(nèi)檢出。30分鐘后觀察結(jié)果將造成影響。試驗(yàn)結(jié)果陽性：測試卡在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測的紫紅色條帶隱約可見，應(yīng)用酶免試劑重復(fù)檢測。陰性：測試卡只在對照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。失效：對照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶?！痉椒ā侩p抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】采用雙抗原夾心兩步法檢測人血清或血漿樣本中的HIV抗體。當(dāng)待檢樣本中存在HIV抗體時，在反應(yīng)過程中形成“固相HIV抗原－HIV抗體－酶標(biāo)記HIV抗原”的免疫復(fù)合物，加入底物后形成顯色反應(yīng)。【HIV篩查試驗(yàn)操作程序】（一）試驗(yàn)前準(zhǔn)備：試驗(yàn)開始前將試劑和樣品放置于室溫（18~25℃）半小時，編號。換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。緩沖液配制：用蒸餾水1：19倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w內(nèi)有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。（二）試驗(yàn)操作1.按順序分別在相應(yīng)孔加入50ul待測樣品及陰、陽性對照血清。2.覆上封板膜，置37℃3.用洗滌液充分洗滌5次（每次應(yīng)保持30~60秒浸泡時間），扣干。4.分別在每孔中加入酶標(biāo)抗原100ul。5.覆上封板膜，置37℃6.用洗滌液充分洗滌5次（每次應(yīng)保持30~60秒浸泡時間），扣干。7.每孔加底物A、B各50ul，輕拍混勻，覆上封板膜，置37℃8.每孔加入終止液50ul。9.用酶標(biāo)儀測定。（三）試驗(yàn)結(jié)果1.陽性對照值應(yīng)大于陰性對照值以上且陰性對照值小于方可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)有效。value=+陰性對照均值（若陰性對照小于以計(jì)）3.樣品OD值大于或等于臨界值為初篩陽性，小于臨界值為陰性。第三章結(jié)果報(bào)告與注意事項(xiàng)【復(fù)檢試驗(yàn)】對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。（具體詳見流程圖）【篩試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告】對HIV抗體篩查試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報(bào)告。對初篩試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報(bào)告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告。【初篩試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送】如需送上級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單”，經(jīng)1名檢驗(yàn)人員和1名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字，與血樣品一同送天山區(qū)疾控中心實(shí)驗(yàn)室，再轉(zhuǎn)送市疾控中心艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，或在本實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢后直接送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室?！静僮髋_消毒處理】用3~5%84消毒液擦拭臺面，如工作臺被溢出物污染，則用消毒液浸泡30分鐘后，再行擦拭?！痉块g消毒】

每日用紫外線照射30~60min【方法學(xué)特性及注意事項(xiàng)】試劑盒4~30℃干燥保存。有效期16個月?？鼓獞?yīng)采用EDTA，樣品應(yīng)避免溶血。樣品應(yīng)在收集后7天內(nèi)檢測，2~8℃保存，如果大于7天，應(yīng)冷凍保存。測試卡僅用于HIV抗體的現(xiàn)場初篩，檢測陽性必須用ELISA方法進(jìn)一步確認(rèn)。樣本的加樣應(yīng)使用微量加樣器準(zhǔn)確加入。實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)保持一定濕度、避風(fēng)，18~25℃進(jìn)行。本試劑盒應(yīng)視為有感染源的物品，應(yīng)按生物危險樣品處理。【血清加樣表】見附件。每次檢測完畢需填寫血清加樣表，由審核者簽字復(fù)核，存檔，以備查。第三部分設(shè)備SOP文件一、多功能自動酶標(biāo)儀RT-2100C儀器簡介RT-2100C是一臺網(wǎng)絡(luò)化的酶標(biāo)免疫測試分析儀器，可廣泛用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、血液病、艾滋病、內(nèi)分泌障礙測定等診斷領(lǐng)域。儀器原理光學(xué)及比色系統(tǒng)光學(xué)及比色系統(tǒng)信號放大A/D轉(zhuǎn)換計(jì)算機(jī)LCD顯示屏觸摸屏打印機(jī)環(huán)境要求：避免陽光直曬溫度：10℃~40℃，濕度20%~85%電源必須接地良好電源穩(wěn)定，禁止與大功率用電器共用電源操作步驟4．1開機(jī)打開儀器背面的電源開關(guān)，等待約10秒鐘，開機(jī)初始化流程要完成以下工作：系統(tǒng)程序加載系統(tǒng)自檢讀取用戶數(shù)據(jù)前端初始化等待光源穩(wěn)定：儀器需要等待光源穩(wěn)定約1分鐘左右。光路自檢：期間濾光片輪會轉(zhuǎn)動，酶標(biāo)板將往返走板一次。開機(jī)結(jié)束后，進(jìn)行主菜單窗口。4．2項(xiàng)目設(shè)置在主菜單中按[項(xiàng)目設(shè)置]鍵，進(jìn)入項(xiàng)目列表窗口。4．2．1新建與更改項(xiàng)目按[新建]或[更改]鍵，添加或更改項(xiàng)目，如果項(xiàng)目數(shù)已經(jīng)超過100，將無法創(chuàng)建新項(xiàng)目。按圖所示設(shè)置參數(shù)設(shè)置。項(xiàng)目名稱：該項(xiàng)必須輸入，注意不要與已經(jīng)存在的項(xiàng)目名重復(fù)。試劑名稱：根據(jù)所用試輸入，也可以不輸入。波長：從列表中選取，注意主波長和次波長不能重復(fù)。計(jì)算方法：從列表中選取雙樣本：若選擇雙樣本，則布板時每個樣本孔的相鄰孔自動設(shè)置為重復(fù)孔，計(jì)算時取兩者吸光度的平均值?？瞻咨舷蓿郝氂稍噭┮罂瞻妆仨毑怀^,則空白應(yīng)設(shè)為<，測試時如果空白孔吸光度值超過設(shè)定的上限，系統(tǒng)會提示用戶“空白也吸光度值過高”。定量計(jì)算，根據(jù)試劑說明輸入：標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量：選擇2~8個標(biāo)準(zhǔn)品。濃度單位：從列表中選擇。雙標(biāo)準(zhǔn)：若選擇雙標(biāo)準(zhǔn)：則布板時每個標(biāo)準(zhǔn)孔的相鄰孔被自動設(shè)置為重復(fù)孔，計(jì)算時取兩者吸光度的平均值。標(biāo)準(zhǔn)品吸光度：雙擊標(biāo)準(zhǔn)品濃度列表項(xiàng)，可以在彈出窗口中輸入濃度值，注意標(biāo)準(zhǔn)品濃度順序必須為由小到大。8）計(jì)算，按試劑說明在窗口中輸入：Cut-off公式系數(shù)：各鐘試劑的定性公式如有不同形式如S/N，（N-S）/N等均可轉(zhuǎn)換為S/（X*N+Y*P+Fac）的形式。陰性對照和陽性對照的吸光度范圍：對照的吸光度超出上限和下限進(jìn)分別按上限和下限計(jì)算。例如有試劑要求陰性對照小于0。05按0。05計(jì)，則陰性對照下限應(yīng)設(shè)為0。05。對照：可以任意設(shè)置對照，但對照的數(shù)量不超過5個，計(jì)算時取所有對照吸光度的平均值。9）陰陽性判定設(shè)置窗口在此窗口中輸入判定陰性和陽性的臨界值，吸光度模式下，臨界值為吸光度值：Cut-off方式下，臨界值為樣本與Cut-off值的比值，定量計(jì)算方式下，臨界值為濃度值。定性方式分為3類：正向閾值模式：陰性＜陰性臨界值，陽性≥陽性臨界值，兩者之間為灰區(qū)，在此區(qū)間內(nèi)的樣本判定為可疑。反向閾值模式：陰性＞陰性臨界值，陽性≤陽性臨界值。不需要判定陰陽性：在定性方式中選擇“無。所有參數(shù)設(shè)置完畢，按[完成]鍵。4．3樣品測試在主菜單中按[樣品測試]鍵，進(jìn)入如下窗口：布板方向：橫向或縱向進(jìn)板方式：選擇連續(xù)方式（＜5秒）提高測量速度，選擇步進(jìn)方式（＜15秒）獲得更高的測量精度。振板參數(shù)：振板速度分快速，中速和慢速3檔，振板時間1~60秒，也可以選擇不振板。設(shè)定完以上參數(shù)后，按[確定]鍵，進(jìn)入布板窗口。4．4布板4．4．1樣本任意點(diǎn)擊欲設(shè)置為樣本的孔位，樣本號從1起自動遞增并顯示在該孔位上。如果要修改樣本號，可再次點(diǎn)擊該孔位。4．4．2空白空白孔在項(xiàng)目測試中用以吸光度調(diào)零，即其它孔位的吸光度均要減去空白孔吸光度值。根據(jù)不同項(xiàng)目測試的要求，可以選擇是否設(shè)定空白。舊空白的保存和使用：空白孔的測試結(jié)果將自動保存，如果在同一項(xiàng)目的后續(xù)測試中不重新設(shè)定空白，則系統(tǒng)自動用舊空白進(jìn)行計(jì)算。第個項(xiàng)目只允許設(shè)置一個空白孔，如果在設(shè)置空白孔時多次點(diǎn)擊不同的孔位，那么只有最后一次點(diǎn)擊的孔位被設(shè)定為空白孔，前面設(shè)置的空白孔被自動清除。4．4．3依次設(shè)置陰性對照和陽性對照。按[開始]鍵，系統(tǒng)確認(rèn)布板無誤后，開始走板測試。走板結(jié)束，系統(tǒng)自動進(jìn)入吸光度顯示。4．5關(guān)機(jī)在主菜單中按[關(guān)機(jī)]，系統(tǒng)顯示關(guān)機(jī)確認(rèn)窗口，按[YES]執(zhí)行關(guān)機(jī)程序，按[NO]返回主菜單。儀器維護(hù)保持儀器工作環(huán)境的清潔。儀器表面的清潔，可以用中性清潔劑和濕布擦拭。液晶顯示器請用柔軟的布清潔勿讓任何溶劑，油脂類，腐蝕性物質(zhì)接觸儀器。二、KHBST－36W洗板機(jī)1

目的

規(guī)范洗板機(jī)的操作程序，保證洗板機(jī)的正常狀態(tài)。

2

適用范圍

本實(shí)驗(yàn)室KHBST-36W洗板機(jī)的操作。

3

操作人員

本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員。

4

操作步驟

拔掉廢液瓶口的塞子（接有與洗板機(jī)相連的廢液管），倒掉廢液瓶的廢液，再把塞子安緊在廢液瓶口上。注意不要讓廢液管擰緊，以保證廢液管的通暢。

擰開洗液瓶的蓋子（接有與洗板機(jī)相連的洗液管），倒掉前一天洗液瓶里剩的洗液，倒進(jìn)新配的洗液。擰緊蓋子，注意不要讓洗液管擰緊，以保證洗液管

的通暢。

保證待洗反應(yīng)板所有的孔處于同一水平位置，以免孔邊緣過高碰到洗板機(jī)的吸液針。

開機(jī)

插上電源，打開電源開關(guān)（按后面板【POWER】鍵），儀器顯示“儀器復(fù)位中，請稍候”儀器初始化結(jié)束后。儀器顯示：“就緒，當(dāng)前程序#X請選擇功能鍵”X處顯示的數(shù)字（范圍0~15之間）表示當(dāng)前準(zhǔn)備就緒的是第幾號程序。此時儀器正處于待機(jī)狀態(tài)，用戶可進(jìn)行下一步操作。

預(yù)洗

在待機(jī)狀態(tài)下，使預(yù)洗槽處于清洗頭下方，按下【預(yù)洗/返回】鍵，清洗頭抬起，電磁閥打開，洗液進(jìn)入預(yù)洗槽。清洗頭將對預(yù)洗槽洗滌3次，清洗容量為400UL，但清洗時沒有暫停和浸泡步驟。

編程

按下【編程】鍵。進(jìn)入編程菜單界面。畫面最左邊有閃動的指示光標(biāo)“→”，按下【↑】鍵或【↓】鍵移動所需要設(shè)定的參數(shù)前，按下【確定】鍵，即選中了該參數(shù)項(xiàng)，再按下【↑】或【↓】鍵設(shè)定該參數(shù)的參數(shù)值。

運(yùn)行

按下【運(yùn)行】鍵，系統(tǒng)將立即按照用戶設(shè)定的程序執(zhí)行。

關(guān)機(jī)

4.8.1

日常關(guān)機(jī)

最后一次洗板結(jié)束后，將電源開關(guān)置于【OFF】位；并將酶標(biāo)板托盤上的預(yù)洗槽用蒸餾水裝滿，使清洗頭浸入預(yù)洗槽。

長期關(guān)機(jī)

將長時間不使用洗板機(jī)時，先用蒸餾水沖洗一遍整個系統(tǒng)，再進(jìn)行日常關(guān)機(jī)；并且傾倒、清洗廢液瓶，保持液體干燥，以免清洗液中的緩沖鹽類結(jié)晶而堵塞清洗頭。

5

鍵盤功能

【編程】：進(jìn)入編程菜單。用來設(shè)定儀器的運(yùn)行方式及各項(xiàng)參數(shù)。

【運(yùn)行】：執(zhí)行先定的程序。

【↑】：處于待機(jī)狀態(tài)時，此鍵用來順次遞增程序號；處于編程狀態(tài)時，用來使光標(biāo)“→”上移。

【↓】：處于待機(jī)狀態(tài)時，此鍵用來順次遞減程序號；處于編程狀態(tài)時，用來使光標(biāo)“→”下移。

【復(fù)位】：終止當(dāng)前操作，使儀器恢復(fù)到開機(jī)狀態(tài)。

【預(yù)洗/返回】：處于待機(jī)狀態(tài)時，此鍵用來使儀器執(zhí)行預(yù)洗程序；處于編程狀態(tài)時，此鍵可使顯示面板界面回到待機(jī)狀態(tài)

【確定】：確認(rèn)光標(biāo)所指示的參數(shù)項(xiàng)。

6

編制洗滌程序

編程菜單中包括清洗方式、清洗頭數(shù)、清洗條數(shù)、清洗容量、加洗次數(shù)、清洗次數(shù)、暫停時間、浸泡時間8種參數(shù)項(xiàng)目。

清洗方式，條洗和板洗。

清洗頭數(shù)，可設(shè)定為12頭或8頭。

清洗條數(shù)，或設(shè)定在1~12范圍內(nèi)，該參數(shù)設(shè)置與清洗頭數(shù)有關(guān)，當(dāng)頭數(shù)為12時條數(shù)最大值為8。反之當(dāng)頭數(shù)為8時，條數(shù)最大值為12。

清洗容量，可在50UL、100UL、150UL、200UL、250UL、300UL、350UL、400UL、450UL中選擇設(shè)定。

加洗次數(shù)，加洗次數(shù)可在1~3范圍內(nèi)設(shè)定。

清洗次數(shù)，清洗次數(shù)可在1~10范圍內(nèi)設(shè)定。

暫停時間，當(dāng)清洗方式為知洗時，清洗頭在注滿酶標(biāo)板每行后啟動暫停，時間可在0~10秒內(nèi)任意設(shè)定，增量為1秒；當(dāng)清洗方式為板洗時，清洗頭在每次過板注滿水后啟動暫停，時間可在0~60秒任意設(shè)定，增量為5秒。

浸泡時間，一般清洗過程中，清洗頭在酶標(biāo)板最后一行中注滿水后，即啟動浸泡功能。浸泡時間可在0~300秒內(nèi)任意設(shè)定，增量為30秒，但在加洗程序中不能啟動浸泡功能。

7

維護(hù)保養(yǎng)程序

平常不用時，拔掉電源插頭。

每天洗板機(jī)工作結(jié)束時，要對內(nèi)外其進(jìn)行清潔，用濕抹布擦洗洗板機(jī)的外壁及載物臺，以保證其潔凈。用蒸餾水將所有的管道清洗一遍，防止洗液的結(jié)晶堵塞管道。

及時倒棄廢液，以免廢液瓶過滿致使廢液回流而造成洗板機(jī)的故障。

保證待洗的反應(yīng)板的孔邊緣不要過高且水平，以免造成吸液針損傷。

定期將洗液及廢液管道拆卸下來進(jìn)行沖洗，以保證管道的通暢。

8

儀器消毒

消毒試劑：甲醛溶液10%；酒精70%；戊二醛溶液4%。

消毒步驟

準(zhǔn)備10%甲醛溶液200ml，4%戊二醛溶液200ml，70%酒精一瓶，若干醫(yī)用棉球。

清洗儀器

給儀器注入蒸餾水，抬起清洗頭，用戊二醛溶液注滿托盤預(yù)洗槽。

用清洗頭抽干托盤預(yù)洗槽，再用蒸餾水注滿托盤預(yù)洗槽，抽干。

移走酶標(biāo)板架和清洗頭，將它們浸泡在戊二醛溶液中24小時。

傾倒液體瓶。

切斷電源，撥掉電源線。

儀器消毒

用浸透70%酒精的棉球?yàn)閮x器外殼消毒。

拆離主機(jī)和液體瓶，并打開液體瓶瓶蓋，將儀器放入一個大的塑料袋中。

把在10%甲醛溶液中浸透的棉球放入塑料袋。

密封塑料袋24小時。

消毒后期處理

從袋中取出儀器。

用中性清洗液清潔儀器。

用70%酒精擦去污染物質(zhì)。

把清洗頭和酶標(biāo)板架從戊二醛溶液中取出并用蒸餾水漂洗，把它們重新安裝在儀器上。

在試劑瓶內(nèi)注入蒸餾水并執(zhí)行預(yù)洗程序，以沖洗系統(tǒng)的液體流動通路。

在儀器上貼上注有消毒日期的已消毒標(biāo)識。

9

注意事項(xiàng)

操作環(huán)境

實(shí)驗(yàn)室中經(jīng)常遇到傳染性標(biāo)本和腐蝕性液體，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室操作時應(yīng)穿戴好防腐實(shí)驗(yàn)服和手套。處理危險樣品時，參考實(shí)驗(yàn)室操作手冊進(jìn)行操作。

操作前

必須嚴(yán)格按照儀器說明書安裝好儀器，保證正確連接管路，以免出現(xiàn)滲漏。

洗板機(jī)長期不用后再度使用時，需預(yù)洗整個系統(tǒng)4次。

操作中

按下【運(yùn)行】鍵前，需確認(rèn)：已裝上正確清洗頭；酶標(biāo)板已正確放置；已選擇適當(dāng)?shù)某绦蚣皡?shù)值。

為防止液體