微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-1培養(yǎng)基的制備與高壓蒸汽滅菌課件

微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-1實(shí)驗(yàn)一培養(yǎng)基的制備

實(shí)驗(yàn)二高壓蒸汽滅菌實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教師：魏靜徐耀波何穎鞠靜麗實(shí)驗(yàn)一

培養(yǎng)基的制備

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

實(shí)驗(yàn)器材

實(shí)驗(yàn)方法

注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)報(bào)告

思考題明確培養(yǎng)基的配置原理。通過(guò)對(duì)基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)內(nèi)容1.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備2.高氏一號(hào)培養(yǎng)基的制備3.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）的制備牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂15.0~20.0g水1000mlpH7.4～7.6牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方可溶性淀粉20.0gKNO31.0gNaCl0.5gK2HPO4·3H2O0.5gMgSO4·7H2O0.5gFeSO4·7H2O0.01g瓊脂15.0~20.0g水1000mlpH7.4～7.6高氏一號(hào)培養(yǎng)基配方馬鈴薯（去皮）200g葡萄糖20g瓊脂15~20g水1000mlpH自然PDA培養(yǎng)基的配方制法：先將新鮮無(wú)病害的馬鈴薯洗凈，去皮后切成小薄片，稱200克，加水1000毫升，煮沸20分鐘后過(guò)濾，其濾汁為馬鈴薯煮汁，然后加瓊脂和葡萄糖煮溶，后補(bǔ)足水分至1000毫升，裝管（瓶）滅菌備用。

1.稱量在上述燒杯中先加人少于所需要的水量，按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取放入燒杯中用玻棒攪勻。

2.溶化在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解，并加水補(bǔ)足體積。3.調(diào)pH在未調(diào)pH前，先用pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入lmol／LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH，直至pH達(dá)7.6。反之，用lmol／LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。實(shí)驗(yàn)方法

6.加塞在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)人培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能。

7.包扎在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞，其外再用繩子扎好。注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。8.滅菌將上述培養(yǎng)基以0.103MPa121℃，20min高壓蒸汽滅菌。1．培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？2．如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無(wú)菌的？3．在配制培養(yǎng)基的操作過(guò)程中應(yīng)注意些什么問(wèn)題？為什么？思考題實(shí)驗(yàn)二

高壓蒸汽滅菌

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

實(shí)驗(yàn)原理

實(shí)驗(yàn)器材

實(shí)驗(yàn)方法

注意事項(xiàng)思考題了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應(yīng)用范圍。學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌的操作方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康母邏赫羝麥缇菍⒋郎缇奈锲贩旁谝粋€(gè)密閉的加熱滅菌鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒羝呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸汽中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。實(shí)驗(yàn)原理滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時(shí)，壓力與溫度的關(guān)系壓力數(shù)全部空氣排出時(shí)的溫度(℃)2/3空氣排出時(shí)的溫度(℃)l/2空氣排出時(shí)的溫度(℃)1/3空氣排出時(shí)的溫度(℃)空氣全不排出時(shí)的溫度(℃)MPakg/cm21b/in20.030.070.100.140.170.210.350.701.051.401.752.1051015202530108.8115.6121.3126.2130.0134.6100109115121126130941051121181241289010010911512112672901001091151211.加水：將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水使水面與三角擱架相平為宜。實(shí)驗(yàn)方法2.放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌物品。

4.通電加熱，待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用0.1Mpa，121.5℃，20min滅菌。

5.滅菌所需的時(shí)間到后，關(guān)閉電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表降至“0”時(shí)，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。

6.將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24h，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(zhǎng)，即可待用。每組準(zhǔn)備下列物品（滅菌）1.培養(yǎng)基2瓶（500ml培養(yǎng)基用250ml三角瓶分裝）2.試管10支（內(nèi)裝3ml培養(yǎng)基）

3.無(wú)菌水