骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件

骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件1骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件2

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骨髓標(biāo)本采集要求[標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)]：①形態(tài)檢查抽吸量不超過(guò)0.2ml；②同時(shí)進(jìn)行多項(xiàng)檢查應(yīng)優(yōu)先抽吸形態(tài)檢查標(biāo)本；③涂片厚薄適宜，不少于4張，并同時(shí)制作配套的血片；④作好標(biāo)記；⑤如干抽，此時(shí)應(yīng)考慮作骨髓活檢；⑥多部位或?qū)τ袎和袋c(diǎn)或根據(jù)X線檢查提示進(jìn)行穿刺，以提高陽(yáng)性率。

骨髓標(biāo)本采集要求4判斷骨髓取材成功的標(biāo)準(zhǔn)①抽吸骨髓液時(shí)，病人有特殊酸痛感；②有骨髓小粒和脂肪滴；③顯微鏡下可見(jiàn)到骨髓特有細(xì)胞，如巨核細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、漿細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞、纖維細(xì)胞和大量紅系、粒系幼稚細(xì)胞等。判斷骨髓取材成功的標(biāo)準(zhǔn)①抽吸骨髓液時(shí)，病人有特殊酸痛感；5骨髓涂片、染色：Wright或Giemsa染色、雙染色法

返回骨髓涂片、染色：Wright或Giemsa染色、雙染色法

返6二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈠、低倍鏡檢查1、確定骨髓標(biāo)本的取材和涂片制作是否滿意骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼觀察，在涂尾部見(jiàn)到散在的約粟粒大小呈淺肉色半透明的骨髓小粒及少量脂肪小滴；在顯微鏡下見(jiàn)到較多骨髓特有的細(xì)胞如各系幼稚細(xì)胞及巨核細(xì)胞等，是穿刺成功的標(biāo)志。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋?zhuān)瑸槿〔牟涣既缰镜卧龆?，則表示紅髓成份減少，反映骨髓增生減低插圖二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈠、低倍鏡檢查插圖7正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周?chē)梢?jiàn)到1~5個(gè)呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。紅細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%c.含有鐵顆粒的幼紅細(xì)胞稱為鐵粒幼細(xì)胞。急性淋巴細(xì)胞白血病則呈陰性反應(yīng)。4、再障時(shí)NAP活性增高；醛基與Schiff液中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。5、其他血液病時(shí)NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。因此，POX染色對(duì)急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價(jià)值。4、用于識(shí)別不同分化階段的細(xì)胞t(6;9)(p21-22;q34)2、種類(lèi)②骨髓增殖性疾病，如CML、真紅、ET、IMF等；根據(jù)不同抗體組合可T、B淋巴細(xì)胞區(qū)分為不同分化階段。CD34,33,13+[結(jié)果]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團(tuán)塊、均勻紅色為陽(yáng)性。②有骨髓小粒和脂肪滴；

2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）骨髓增生程度通常以骨髓中有核細(xì)胞的量來(lái)反映。采用五級(jí)法正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周?chē)梢?jiàn)到1~5個(gè)呈8骨髓增生程度分級(jí)

有核細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞有核細(xì)胞占全部細(xì)胞百分率有核細(xì)胞/1000個(gè)成熟紅細(xì)胞常見(jiàn)原因范圍平均范圍平均極度活躍1:0.5~2.01:1>50238.96~521.07351.96白血病明顯活躍1:5~121:10>1043.78~230.77114.51增生貧血增生活躍1.16~321:201~11021.53~63.6735.34正常骨髓增生減低1:35~701:500.5~17.41~19.6110.53慢性再障明顯減低1:3001:200<0.51.96~7.414.85急性再障下一頁(yè)骨髓增生程度分級(jí)有核細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞有9骨髓增生程度分級(jí)(高倍鏡）明顯減低1~5/HP增生減低5~20/HP增生活躍20~50/HP明顯活躍50~100/HP極度活躍>100/HP返回骨髓增生程度分級(jí)(高倍鏡）明顯減低增生減低增生活躍明顯活躍極103、觀察巨核細(xì)胞需要注意數(shù)量、成熟程度、產(chǎn)血小板功能及其形態(tài)（包括血小板的形態(tài)）等四個(gè)方面。低倍鏡下計(jì)數(shù)全部片膜的巨核細(xì)胞數(shù)。并轉(zhuǎn)換油鏡觀察，進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)，注意巨核細(xì)胞及血小板的形態(tài)有無(wú)異常。4、注意有無(wú)異常細(xì)胞如惡性組織細(xì)胞病的異常組織細(xì)胞、轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞、Gaucher細(xì)胞、Niemann-Pick細(xì)胞等。注意觀察有無(wú)散在或成堆分布的體積較大、形態(tài)特殊的異常細(xì)胞出現(xiàn)，尤其應(yīng)注意涂片尾部、邊緣及骨髓小粒周?chē)?。發(fā)現(xiàn)可疑異常細(xì)胞，應(yīng)在油浸鏡下觀察加以確認(rèn)。

3、觀察巨核細(xì)胞11二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈡、油浸鏡檢查選擇有核細(xì)胞分布均勻、結(jié)構(gòu)清晰、著色良好的涂膜體尾交界處部位作油浸鏡檢查。1、有核細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)在油浸鏡下連續(xù)分?jǐn)?shù)200個(gè)或500個(gè)有核細(xì)胞，按細(xì)胞的不同系列和不同的發(fā)育階段分別計(jì)數(shù)。然后計(jì)算出分別占有核細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)。再累計(jì)粒系和紅系總數(shù)，計(jì)算粒紅比例（G:E）。分類(lèi)計(jì)數(shù)時(shí)，巨核細(xì)胞及分裂、退化細(xì)胞不計(jì)入。2、觀察細(xì)胞形態(tài)仔細(xì)觀察各系列細(xì)胞的形態(tài)有無(wú)異常，包括注意成熟紅細(xì)胞的形態(tài)有無(wú)異常，有無(wú)特殊異常細(xì)胞出現(xiàn)，必要時(shí)還需注意有無(wú)寄生蟲(chóng)。插圖二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈡、油浸鏡檢查插圖12㈢、檢查結(jié)果的臨床意義1、骨髓增生程度，其臨床意義如前表所述。2、骨髓中各系列細(xì)胞及其各發(fā)育階段的比例粒細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的50～60%紅細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%

粒紅比例（G/E）2.76±0.83:1(2-4:1)淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%單核細(xì)胞系統(tǒng)：一般<4%漿細(xì)胞系統(tǒng)：一般<2%巨核細(xì)胞系統(tǒng)：7~35個(gè)為正常值(1.5*3cm涂片）。其他細(xì)胞：可見(jiàn)到極少量的非造血細(xì)胞成分㈢、檢查結(jié)果的臨床意義133、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義⑴、粒細(xì)胞系與紅細(xì)胞系比例（粒/紅比例）1)、粒紅比例正常：見(jiàn)于：①正常骨髓象；②粒、紅兩系平等增多或減少，前者如紅白血病，后者如AA；③粒、紅兩系細(xì)胞基本不變化的造血系統(tǒng)疾病，如MM、骨髓轉(zhuǎn)移癌、ITP等。2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1。可見(jiàn)粒細(xì)胞系增多，或由紅細(xì)胞系減少所致。常見(jiàn)于：①急性或慢性粒白血?。虎诩毙曰撔愿腥?、中性粒細(xì)胞性類(lèi)白血病反應(yīng)；③純紅再障。3)、粒紅比例減低：指粒/紅比例小于2:1?？梢?jiàn)粒細(xì)胞系減少，或由紅細(xì)胞系增多所致。常見(jiàn)于：①粒細(xì)胞減少，如粒缺；②紅細(xì)胞系增多，如各種增生性貧血、真紅或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥等。3、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義14⑵、粒細(xì)胞系統(tǒng)：1)、粒系細(xì)胞增多：見(jiàn)于：①各型粒細(xì)胞白血病，急性粒細(xì)胞白血病以原粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞增多為主，CML以中性晚幼粒及桿狀核粒細(xì)胞增多為主；②大部分急性炎癥和感染性疾病、中性粒細(xì)胞性類(lèi)白反應(yīng)等，以中性晚幼粒及桿狀核粒細(xì)胞增多為主。2)、粒細(xì)胞減少：見(jiàn)于AA、粒細(xì)胞缺乏癥或粒細(xì)胞減少癥。⑶、紅細(xì)胞系統(tǒng)：1)紅系增多：見(jiàn)于：①各類(lèi)增生性貧血如溶血性貧血、失血性貧血、小細(xì)胞低色素性貧血等，以中幼紅及晚幼紅細(xì)胞增多為主；②巨幼細(xì)胞⑵、粒細(xì)胞系統(tǒng)：15貧血，以巨幼紅細(xì)胞增多為主；③急性紅白血病，以原紅及早幼紅細(xì)胞增多為主，并常伴幼紅細(xì)胞巨幼樣變。2)、紅系減少：見(jiàn)于AA（包括PRCA），但部分CAA，骨髓呈灶性增生者，有時(shí)可見(jiàn)紅系細(xì)胞比例增多。⑷、淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：1)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)性增多：見(jiàn)于急淋和慢淋、惡性淋巴瘤、傳淋和傳單、其他病毒性感染、淋巴細(xì)胞類(lèi)白等。2)、淋巴細(xì)胞相對(duì)性增多：見(jiàn)于AA、粒缺或粒細(xì)胞減少癥。⑸、單核細(xì)胞系統(tǒng)：增多見(jiàn)于：①血液系統(tǒng)疾病如急單、急粒-單、MDS、惡組、淋巴瘤等；②某些感染性疾病結(jié)核病、布魯菌病、原蟲(chóng)感染、貧血，以巨幼紅細(xì)胞增多為主；③急性紅白血病，以原紅及早幼紅細(xì)16感染性心內(nèi)膜炎等；③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；④其他如惡性腫瘤、肝硬化、藥物反應(yīng)等。⑹、漿細(xì)胞系統(tǒng)：增多見(jiàn)于：①M(fèi)M、漿細(xì)胞白血病、巨球蛋白血癥、重鏈病等；②反應(yīng)性漿細(xì)胞增多如慢性炎癥及感染性疾病、風(fēng)濕性疾病、惡性腫瘤、過(guò)敏性疾病等；③AA、粒缺等。⑺、巨核細(xì)胞系統(tǒng)：1)、增多：①I(mǎi)TP、Evans綜合征；②骨髓增殖性疾病，如CML、真紅、ET、IMF等；③脾功能亢進(jìn)；④巨核細(xì)胞白血病。2)、巨核細(xì)胞減少：見(jiàn)于AA、AL及其他骨髓浸潤(rùn)或破壞的疾病，以及急性感染、化學(xué)物或藥物中毒、放射病等。感染性心內(nèi)膜炎等；③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)17二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察在檢查骨髓時(shí)，需同時(shí)進(jìn)行血涂片的觀察1、應(yīng)注意WBC分類(lèi)計(jì)數(shù)及形態(tài)觀察；2、注意成熟RBC的形態(tài)有無(wú)異常。有核紅。3、估計(jì)PLt數(shù)量及注意其形態(tài)有無(wú)異常；4、觀察寄生蟲(chóng)有無(wú)（如瘧原蟲(chóng)）。㈤、填寫(xiě)檢查報(bào)告單根據(jù)骨髓象和血象檢查結(jié)果，按檢查報(bào)告單的要求，逐項(xiàng)詳細(xì)填寫(xiě)及描述骨髓象、血象表現(xiàn)的特征，結(jié)合臨床資料提出形態(tài)學(xué)診斷意見(jiàn)。二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察18低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)胞）油鏡觀察骨髓有核細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)200－500個(gè)細(xì)胞系形態(tài)學(xué)觀察粒系紅系單核系淋巴系漿系其他細(xì)胞計(jì)算結(jié)果（各細(xì)胞系百分比粒紅比值）觀察血片組織化學(xué)染色填寫(xiě)骨髓圖文結(jié)果報(bào)告單（骨髓細(xì)胞特征血片細(xì)胞特征組化特征）骨髓片存檔保存骨髓象分析步驟示意圖低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)19返回返回20三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色[意義]：1、有助于了解各種血細(xì)胞的化學(xué)組成及病理生理改變。2、可用作血細(xì)胞類(lèi)型的鑒別。3、以及對(duì)某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機(jī)制探討等均有一定價(jià)值。三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色[意義]：214、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。t(11;14)(p13;q11)有CD19、CD20、CD22等。2)、粒細(xì)胞減少：見(jiàn)于AA、粒細(xì)胞缺乏癥或粒細(xì)胞減少癥。t/del(11)(q23)t(8;14)(q24;q11)①抽吸骨髓液時(shí)，病人有特殊酸痛感；5、其他血液病時(shí)NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。3、急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，NAP積分值減低；正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周?chē)梢?jiàn)到1~5個(gè)呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。3、以及對(duì)某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機(jī)制探討等均有一定價(jià)值。1、應(yīng)注意WBC分類(lèi)計(jì)數(shù)及形態(tài)觀察；醛基與Schiff液中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。2、注意成熟RBC的形態(tài)有無(wú)異常。AML-M2（CD33陽(yáng)性，呈棕黃色沉淀）1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義見(jiàn)第十章分子生物學(xué)檢查中第三節(jié)染色體檢查。低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)胞）M5b伴吞噬細(xì)胞增多2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1。（一）過(guò)氧化物酶染色（POX）【原理】

血細(xì)胞中的過(guò)氧化物酶（peroxidase，POX）能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無(wú)色聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中?！窘Y(jié)果】胞質(zhì)中無(wú)藍(lán)黑色顆粒者為陰性反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)小顆粒、分布稀疏者為弱陽(yáng)性反應(yīng)，顆粒粗大而密集者為強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)?！九R床意義】過(guò)氧化物酶染色主要用于急性白血病類(lèi)型的鑒別。急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病細(xì)胞多呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)呈弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)；急性淋巴細(xì)胞白血病則呈陰性反應(yīng)。因此，POX染色對(duì)急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價(jià)值。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。（一）22骨髓片POX染色骨髓片POX染色23骨髓片POX染色APL：呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)AML-M4：部分呈陽(yáng)性反應(yīng)，部分成弱陽(yáng)性反應(yīng)AML-M5：呈弱陽(yáng)性ALL：呈陰性，<3%骨髓片POX染色APL：呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)AML-M4：部分呈陽(yáng)性24（二）蘇丹黑B染色

[原理]：是一種脂溶性的染料，可溶于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的含脂物質(zhì)，使胞漿中的脂類(lèi)物質(zhì)呈棕黑色或深黑色顆粒。[結(jié)果和意義]：與POX染色大致相同。（二）蘇丹黑B染色

[原理]：是一種脂溶性的染料，可溶于細(xì)胞25

（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）（NeutrophilalkalinePhosphatase，NAP）【原理】偶氮偶聯(lián)法。是血細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成灰黑色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶活性所在之處。（另有鈣-鈷法略）【結(jié)果】堿性磷酸酶主要存在于成熟階段的中性粒細(xì)胞（分葉核及桿狀核），其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)?！緟⒖贾怠砍扇薔AP陽(yáng)性率10%~40%；積分值40~80（分）。（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）26臨床意義1、感染性疾?。杭?xì)菌感染與病毒感染的鑒別2、慢性粒細(xì)胞白血病的NAP活性明顯減低，積分值常為0，類(lèi)白血病反應(yīng)的NAP活性極度增高。3、急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，NAP積分值減低；急性淋巴細(xì)胞白血病的NAP積分值多增高；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)一般正常或減低。臨床意義274、再障時(shí)NAP活性增高；PNH時(shí)活性減低。5、其他血液病時(shí)NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件28系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。根據(jù)顯帶特點(diǎn)，將染色體劃區(qū)分布，一般用4個(gè)符號(hào)表示特定區(qū)帶，如“8q22”則代表8號(hào)染色體長(zhǎng)臂2區(qū)2帶。系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋?zhuān)瑸槿〔牟涣糓2/t(8;21)4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋?zhuān)瑸槿〔牟涣甲屑?xì)觀察各系列細(xì)胞的形態(tài)有無(wú)異常，包括注意成熟紅細(xì)胞的形態(tài)有無(wú)異常，有無(wú)特殊異常細(xì)胞出現(xiàn)，必要時(shí)還需注意有無(wú)寄生蟲(chóng)。2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）AML-M4：部分呈陽(yáng)性反應(yīng)，t(8;21)(q22;q22)包括數(shù)目畸變和結(jié)構(gòu)畸變二類(lèi)。2、注意成熟RBC的形態(tài)有無(wú)異常。③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；四、骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型3、急性粒-單核細(xì)胞白血病時(shí)，可見(jiàn)陰性和陽(yáng)性二種細(xì)胞。氯乙酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE,為特異性酯酶）：粒系紅系單核系淋巴系漿系其他細(xì)胞CD34,33,13+核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）+++++++++++++-嗜酸粒細(xì)胞-系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD329（四）酸性磷酸酶染色（ACP）[原理]：（硫化鉛法）血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性條件下（PH5.0)將基質(zhì)中的?-甘油磷酸鈉水解,產(chǎn)生磷酸鈉,然后與硝酸鉛反應(yīng),生成磷酸鉛沉淀,再與硫化銨反應(yīng)形成硫化鉛沉淀,定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果]：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)；否則陰性(另有偶氮偶聯(lián)法略）。（四）酸性磷酸酶染色（ACP）[原理]：（硫化鉛法）血細(xì)胞內(nèi)30臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病2、幫助鑒別T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞：TL（+），BL（-）3、幫助鑒別Gaucher病與Niemanm-Pick病。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病31酸性磷酸酶染色（ACP）FAB：ALL-L2ACP染色呈陽(yáng)性反應(yīng)（桔紅色粗大顆粒）提示為T(mén)淋巴細(xì)胞白血病酸性磷酸酶染色（ACP）FAB：ALL-L2ACP染色呈陽(yáng)性32（五）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

粒細(xì)胞酯酶

氯乙酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE,為特異性酯酶）：

1、急性粒細(xì)胞白血病呈強(qiáng)陽(yáng)性，不被氟化鈉抑制。

2、急性單核細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病呈陰性。

3、急性粒-單核細(xì)胞白血病時(shí)，可見(jiàn)陰性和陽(yáng)性二種細(xì)胞。（五）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

粒細(xì)胞酯酶氯乙酸A33（六）α-醋酸萘酚酯酶染色α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE，NSE為非特異性酯酶)：

1、急性單核細(xì)胞白血病、急性粒-單核細(xì)胞白血病的單核系細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)，可被氟化鈉抑制(抑制率＞50%)；

2、急性粒細(xì)胞白血病一般為陰性或呈弱陽(yáng)性反應(yīng)，不被氟化鈉抑制。（六）α-醋酸萘酚酯酶染色α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE，N34CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；1、數(shù)量2、注意成熟RBC的形態(tài)有無(wú)異常。【參考值】成人NAP陽(yáng)性率10%~40%；M5a/t(11q)重視組化染色和其他實(shí)驗(yàn)檢查表示47條染色體，增加了一條8號(hào)染色體，第9號(hào)與第22號(hào)染色體之間易位，斷裂點(diǎn)分別在第9號(hào)染色體長(zhǎng)臂3區(qū)4帶和第22號(hào)染色體長(zhǎng)臂1區(qū)1帶。粒系中原粒cell(-)，早幼粒cell強(qiáng)陽(yáng)性，中性粒細(xì)胞（+++），單核（±），淋巴（-），少數(shù)（±），紅細(xì)胞（-）；2、種類(lèi)多讀書(shū)（細(xì)胞形態(tài)、發(fā)病情況）①抽吸骨髓液時(shí)，病人有特殊酸痛感；2、細(xì)胞內(nèi)鐵觀察幼紅細(xì)胞內(nèi)的鐵。[意義]：紅血病、紅白血病陽(yáng)性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽(yáng)性。d.AML-M2（CD33陽(yáng)性，呈棕黃色沉淀）核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。常見(jiàn)于：①急性或慢性粒白血??；活化T細(xì)胞不表達(dá)CD45RA，而CD25、CD2、CD45RO、CD54、CD58等均強(qiáng)表達(dá)。1、細(xì)胞少時(shí)（TB、R-S細(xì)胞）2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）α－醋酸萘酚酯染色（α－NAE，NSE）急單呈陽(yáng)性反應(yīng)。CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；α－醋酸35（七）糖原染色(periodicacid–Schiff‘sreactionPAS)

[原理]：過(guò)碘酸能將血細(xì)胞內(nèi)的糖元氧化，生成醛基。醛基與Schiff液中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果

]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團(tuán)塊、均勻紅色為陽(yáng)性。[意義]：紅血病、紅白血病陽(yáng)性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽(yáng)性。（七）糖原染色(periodicacid–Schiff36臨床意義粒系中原粒cell(-)，早幼粒cell強(qiáng)陽(yáng)性，中性粒細(xì)胞（+++），單核（±），淋巴（-），少數(shù)（±），紅細(xì)胞（-）；巨核、Plt均呈陽(yáng)性反應(yīng)。骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件37PASAML-M6幼紅細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)MA幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)PASAML-M6MA38

（八）鐵染色（普魯氏藍(lán)反應(yīng)）【原理】人體內(nèi)的總鐵有一定量以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存在骨髓中的單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，幼紅細(xì)胞胞質(zhì)的線粒體中也含有含鐵血黃素。這些鐵在酸化的亞鐵氰化鉀溶液中反應(yīng)，生成藍(lán)色的鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位?！窘Y(jié)果】1、細(xì)胞外鐵觀察骨髓小粒中貯存在單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)的鐵。陽(yáng)性反應(yīng)為在骨髓小粒上見(jiàn)到呈淺藍(lán)綠色均勻的無(wú)形物質(zhì)，或呈藍(lán)色或深藍(lán)色的小珠狀、粗顆粒狀或藍(lán)黑色的小塊狀物質(zhì)。2、細(xì)胞內(nèi)鐵觀察幼紅細(xì)胞內(nèi)的鐵。正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周?chē)梢?jiàn)到1~5個(gè)呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。含有鐵顆粒的幼紅細(xì)胞稱為鐵粒幼細(xì)胞。如含粗大深染的鐵粒在10個(gè)以上，并環(huán)繞細(xì)胞核排列超過(guò)核周徑2/3以上者，稱環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞。（八）鐵染色（普魯氏藍(lán)反應(yīng)）39

【參考值】1、細(xì)胞外鐵

1+~2+，大多為2+。2、細(xì)胞內(nèi)鐵

20%~90%，平均值為65%。【臨床意義】1、缺鐵性貧血時(shí)，早期骨髓中貯存鐵就已耗盡，細(xì)胞外鐵呈“－”。因此，鐵染色是目前診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的一項(xiàng)可靠和切合臨床實(shí)用的檢驗(yàn)方法。2、非缺鐵性貧血如球蛋白生成障礙性貧血，細(xì)胞外鐵多增加，常>3+~4+。3、鐵粒幼細(xì)胞性貧血時(shí)，鐵粒幼細(xì)胞增多，并可見(jiàn)到環(huán)狀鐵粒幼細(xì)胞?！緟⒖贾怠?0細(xì)胞外鐵觀察陽(yáng)性為藍(lán)綠色沉淀++++血色病+++AA、鐵粒幼貧血++感染+++AA、鐵粒幼貧血+NBM正常骨髓—IDA細(xì)胞外鐵觀察陽(yáng)性為藍(lán)綠色沉淀+++++++++++++—41骨髓鐵染色（Fe）MDS-RAS鐵染色，圖中所指為環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞

骨髓鐵染色（Fe）MDS-RAS鐵染色，圖中所指為環(huán)形鐵粒幼42表4-2-10幾種常見(jiàn)急性白血病的細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果急淋急粒急單紅白血病POX－+~+++－~+視合并的白細(xì)胞類(lèi)型而定SB－++~+++－~+同上AS-DNCE－－~+++－~+同上α-NAE－~++++~+++同上α-NAE-NaF不被NaF抑制被NaF抑制同上NAP增加減少正?；蛟黾油螾AS+++——+++表4-2-10幾種常見(jiàn)急性白血病的細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果急淋急粒急43四、骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型

細(xì)胞免疫分型也稱細(xì)胞免疫標(biāo)記（表型）檢測(cè)，它是用單克隆抗體及免疫學(xué)技術(shù)對(duì)細(xì)胞膜表面和/或細(xì)胞質(zhì)存在的特異性抗原進(jìn)行檢測(cè)，借以分析細(xì)胞所屬系列，分化程度和功能狀態(tài)的一種方法。四、骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型細(xì)胞免疫分型也稱細(xì)胞免疫標(biāo)記44人體正常細(xì)胞有46條染色體，根據(jù)人類(lèi)細(xì)胞遺傳學(xué)命名的國(guó)際體制（ISCN），按其長(zhǎng)短和著絲粒的位置編為A～G7組，包括1～22號(hào)常染色體及X和Y性染色體；【原理】血細(xì)胞中的過(guò)氧化物酶（peroxidase，POX）能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無(wú)色聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中。t/del(11)(q23)醛基與Schiff液中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。M5a/t(11q)2、溶血檢查。②紅細(xì)胞系增多，如各種增生性貧血、真紅或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥等。CD34+、CD90+、Lin-被認(rèn)為是造血干細(xì)胞的主要標(biāo)志；②某些感染性疾病結(jié)核病、布魯菌病、原蟲(chóng)感染、②反應(yīng)性漿細(xì)胞增多如慢性炎癥及感染性疾病、風(fēng)濕性疾病、惡性腫瘤、過(guò)敏性疾病等；二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義2、細(xì)胞內(nèi)鐵20%~90%，平均值為65%。2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1。重視組化染色和其他實(shí)驗(yàn)檢查表示47條染色體，增加了一條8號(hào)染色體，第9號(hào)與第22號(hào)染色體之間易位，斷裂點(diǎn)分別在第9號(hào)染色體長(zhǎng)臂3區(qū)4帶和第22號(hào)染色體長(zhǎng)臂1區(qū)1帶。敏感性可高達(dá)10-4水平。3、以及對(duì)某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機(jī)制探討等均有一定價(jià)值。因此，POX染色對(duì)急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價(jià)值。二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義1、教師骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型（一）檢測(cè)方法1、免疫熒光法(immunofluoresencetechnigue)2、免疫酶染色法（1）APAAP法（2）PAP法（3）ABC法（二）細(xì)胞免疫分型的臨床應(yīng)用1、有助于識(shí)別不同系列的細(xì)胞。如識(shí)別髓人體正常細(xì)胞有46條染色體，根據(jù)人類(lèi)細(xì)胞遺傳學(xué)命名的國(guó)際體制45骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型

系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。識(shí)別淋巴細(xì)胞系列的抗體有：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD19、CD20、CD52、CD77等。識(shí)別巨核細(xì)胞和血小板的抗體有CD41、CD42、CD61等。識(shí)別紅細(xì)胞系列的抗體常用血型糖蛋白A或B。2、識(shí)別不同的淋巴細(xì)胞識(shí)別成熟T淋巴細(xì)胞的抗體有CD2、CD3、CD7、CD8等。識(shí)別成熟B淋巴細(xì)胞的抗體骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD146骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型有CD19、CD20、CD22等。識(shí)別NK細(xì)胞的抗體有CD16、CD56等。識(shí)別不同的淋巴細(xì)胞除檢測(cè)細(xì)胞表面的抗原外，還可以檢測(cè)細(xì)胞表面的受體及細(xì)胞表面其他分子，如TCR、MHC等。3、用于檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群臨床上常用CD3、CD4和CD8單抗檢測(cè)全T（CD3）細(xì)胞，并可將外周淋巴器官和血液中T細(xì)胞分為T(mén)H（CD4+，CD8-）和TS（CD4-、CD8+）兩個(gè)主要亞群，計(jì)算TH/TS比值作為骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型有CD19、CD20、CD22等。識(shí)別NK47骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型機(jī)體免疫狀態(tài)、某些疾病診斷、病期分析、監(jiān)測(cè)治療和判斷預(yù)后的參數(shù)。4、用于識(shí)別不同分化階段的細(xì)胞CD34+、CD90+、Lin-被認(rèn)為是造血干細(xì)胞的主要標(biāo)志；CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；CD34+、TDT+、CD10+、CD7+為T(mén)淋巴細(xì)胞系祖細(xì)胞標(biāo)志；CD34+、CD19+為B淋巴細(xì)胞系祖細(xì)胞標(biāo)志。根據(jù)不同抗體組合可T、B淋巴細(xì)胞區(qū)分為不同分化階段。（參照表）骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型機(jī)體免疫狀態(tài)、某些疾病診斷、病期分析、監(jiān)測(cè)48骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型5、有助于識(shí)別不同功能狀態(tài)的細(xì)胞，如記憶T細(xì)胞高表達(dá)CD45RO、不表達(dá)CD45RA?；罨疶細(xì)胞不表達(dá)CD45RA，而CD25、CD2、CD45RO、CD54、CD58等均強(qiáng)表達(dá)。6、有助于對(duì)不同系列和不同分化階段的細(xì)胞進(jìn)行分離和研究。用免疫熒光法標(biāo)記和活細(xì)胞可經(jīng)流式細(xì)胞儀或免疫磁珠法將其分離出來(lái)，并使對(duì)他們的研究成為可能。骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型5、有助于識(shí)別不同功能狀態(tài)的細(xì)胞，如記憶T49骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型7、可用于各種白血病細(xì)胞的免疫表型分析（見(jiàn)“急性白血病免疫表型特點(diǎn)”一節(jié)）。8、可用于白血病微小殘留病的檢查一個(gè)完全緩解的白血病病人骨髓細(xì)胞中，若出現(xiàn)CD19、CD22、CD10、CD7、CD5、CD13、CD37、CD34等任何一種抗原陽(yáng)性同時(shí)伴有TdT+則診斷微小殘留病存在。敏感性可高達(dá)10-4水平。（三）急性白血病細(xì)胞免疫表型特點(diǎn)1、ALL與AML細(xì)胞免疫表型特點(diǎn)骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型7、可用于各種白血病細(xì)胞的免疫表型分析（見(jiàn)50骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型2、急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）免疫表型特點(diǎn)3、急性髓細(xì)胞白血病免疫表型特點(diǎn)4、免疫學(xué)分類(lèi)對(duì)于雙表型白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）、毛細(xì)胞白血病、慢性粒細(xì)胞白血病急變期細(xì)胞的分類(lèi)和診斷也具有重要作用。骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型2、急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）免疫表型特51ALL和AML的免疫表型CD7CD13CD19CD33HLA-DRTdTMPOe

AML-/+a

+-++-c

+B-ALL--+-++d

-T-ALL+----b

+-注：a.CD7對(duì)少部分（10%）AML可陽(yáng)性

b.<10%T-ALL病例HLA-DR可陽(yáng)性表達(dá)

c.TdT在少數(shù)（20%）AML（M1）陽(yáng)性

d.TdT對(duì)大多數(shù)成熟B-ALL是陰性ALL和AML的免疫表型CD7CD13CD19CD3352急性淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型特點(diǎn)系列亞型主要的抗原標(biāo)記系列亞型主要的抗原標(biāo)記B系列早期B型CD19+,CD10－T系列前T型CD7+,CD2－普通型CD19+,CD10+T細(xì)胞型CD7+,CD2+前B型CD19+,胞質(zhì)μ鏈+B細(xì)胞型CD19+,胞膜Ig+急性淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型特點(diǎn)系列亞型主要的抗原標(biāo)記系列亞53急性非淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型特點(diǎn)亞型典型的抗原標(biāo)記亞型典型的抗原標(biāo)記M0CD34,33,13+M4CD34,33,15,14,13+M1同上M5CD33,15,14,13+M2CD34,33,15,13+M6CD33,血型糖蛋白AM3CD33,13+（HLA-DR陰性）M7CD33,41,42,61+急性非淋巴細(xì)胞白血病的免疫表型特點(diǎn)亞型典型的抗原標(biāo)記亞型典型54免疫組織化學(xué)染色AML-M2（CD33陽(yáng)性，呈棕黃色沉淀）免疫組織化學(xué)染色AML-M2（CD33陽(yáng)性，呈棕黃色55免疫分型（流式細(xì)胞儀）AML-M0（CD5、7、10、19、14、36、GlyA陰性）（CD13、34、38、33、MPO、HLA-DR陽(yáng)性）免疫分型（流式細(xì)胞儀）AML-M0（CD5、7、10、19、56五、細(xì)胞遺傳學(xué)分析五、細(xì)胞遺傳學(xué)分析57細(xì)胞遺傳學(xué)分析

自從20世紀(jì)70年代以來(lái)由于染色體分帶技術(shù)的出現(xiàn)，尤其是高分辨顯帶技術(shù)的應(yīng)用，細(xì)胞遺傳學(xué)研究在血液學(xué)領(lǐng)域內(nèi)才得以迅速發(fā)展，特別是在惡性血液病的研究中不但確定了某些染色體異常與疾病發(fā)生、發(fā)展、診斷、治療及預(yù)后有密切關(guān)系，而且染色斷裂點(diǎn)也往往成為尋找癌基因或抑癌基因的標(biāo)志。因此血細(xì)胞染色體的檢查與分析對(duì)遺傳性血液病和惡性血液病的診斷、分型及病因和發(fā)病機(jī)制的研究有重要價(jià)值，也為遺傳咨詢、優(yōu)生優(yōu)育提供依據(jù)。細(xì)胞遺傳學(xué)分析自從20世紀(jì)70年代以來(lái)由于染色體分帶58（一）染色體檢查方法

見(jiàn)第十章分子生物學(xué)檢查中第三節(jié)染色體檢查。（一）染色體檢查方法見(jiàn)第十章分子生物學(xué)檢59（二）染色體分析通常有兩個(gè)或兩以上的細(xì)胞分裂相中檢出同一條染色體增加或結(jié)構(gòu)異常；有三個(gè)或三個(gè)以上細(xì)胞分裂相中有同一條染色體丟失才能作為一個(gè)染色體異常克隆。1、染色體命名人體正常細(xì)胞有46條染色體，根據(jù)人類(lèi)細(xì)胞遺傳學(xué)命名的國(guó)際體制（ISCN），按其長(zhǎng)短和著絲粒的位置編為A～G7組，包括1～22號(hào)常染色體及X和Y性染色體；根據(jù)顯帶特點(diǎn)，將染色體劃區(qū)分布，一般用4個(gè)符號(hào)表示特定區(qū)帶，如“8q22”則代表8號(hào)染色體長(zhǎng)臂2區(qū)2帶。（二）染色體分析通常有兩個(gè)或兩以上的細(xì)胞分裂相中檢出同一條染60（二）染色體分析2、核型分析及書(shū)寫(xiě)核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。其格式書(shū)寫(xiě)順序是：染色體數(shù)目、性染色體、染色體異常。各項(xiàng)之間以逗號(hào)隔開(kāi)，性染色體以大寫(xiě)的X與Y表示，各染色變異以小寫(xiě)字母表示，見(jiàn)表5-1。一個(gè)完整核型書(shū)寫(xiě)方法如下：47，XY，+8，t(9;22)(q34;q11)。表示47條染色體，增加了一條8號(hào)染色體，第9號(hào)與第22號(hào)染色體之間易位，斷裂點(diǎn)分別在第9號(hào)染色體長(zhǎng)臂3區(qū)4帶和第22號(hào)染色體長(zhǎng)臂1區(qū)1帶。（二）染色體分析2、核型分析及書(shū)寫(xiě)61（二）染色體分析3、染色體畸變包括數(shù)目畸變和結(jié)構(gòu)畸變二類(lèi)。正常人體細(xì)胞有23對(duì)染色體，其中23條來(lái)自父方，另23條來(lái)自母方，即含有兩個(gè)染色體組或稱為二倍體（2n）。（三）臨床常見(jiàn)白血病的染色體改變臨床常見(jiàn)白血病的染色體改變見(jiàn)表。（二）染色體分析3、染色體畸變（三）臨床常見(jiàn)白血病的染色體改621、數(shù)量<10%T-ALL病例HLA-DR可陽(yáng)性表達(dá)【原理】人體內(nèi)的總鐵有一定量以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存在骨髓中的單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，幼紅細(xì)胞胞質(zhì)的線粒體中也含有含鐵血黃素。因此血細(xì)胞染色體的檢查與分析對(duì)遺傳性血液病和惡性血液病的診斷、分型及病因和發(fā)病機(jī)制的研究有重要價(jià)值，也為遺傳咨詢、優(yōu)生優(yōu)育提供依據(jù)。醛基與Schiff液中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。t(8;21)(q22;q22)因此，鐵染色是目前診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的一項(xiàng)可靠和切合臨床實(shí)用的檢驗(yàn)方法。AML-M2（CD33陽(yáng)性，呈棕黃色沉淀）（CD13、34、38、33、MPO、HLA-DR陽(yáng)性）（二）細(xì)胞免疫分型的臨床應(yīng)用急性淋巴細(xì)胞白血病的NAP積分值多增高；1、應(yīng)注意WBC分類(lèi)計(jì)數(shù)及形態(tài)觀察；陽(yáng)性反應(yīng)為在骨髓小粒上見(jiàn)到呈淺藍(lán)綠色均勻的無(wú)形物質(zhì)，或呈藍(lán)色或深藍(lán)色的小珠狀、粗顆粒狀或藍(lán)黑色的小塊狀物質(zhì)。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。48,XY,+4,t(9;22),+Ph3、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義急性單核細(xì)胞白血病時(shí)一般正?；驕p低。（另有鈣-鈷法略）【參考值】成人NAP陽(yáng)性率10%~40%；②紅細(xì)胞系增多，如各種增生性貧血、真紅或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥等。ALL：呈陰性，<3%急性髓細(xì)胞白血病的MIC分型

核型FAB形態(tài)MIC建議分型t(8;21)(q22;q22)M2M2/t(8;21)t(15:17)(q22;q11-12)M3，M3vM3/t(15:17)t/del(11)(q23)M5a（M5b,M4）M5a/t(11q)Inv/del(16)(q22)M4EoM4Eo/inv(16)t(9;22)(q34;q11)M1（M2）M1/t(9;22)t(6;9)(p21-22;q34)M2或M4伴嗜堿粒細(xì)胞增多M2/t(6;9)inv(3)(q21q26)M1(M2、M4、M7)伴血小板增多M1/inv(3)t(8;16)(p11;p13)M5b伴吞噬細(xì)胞增多M5b/t(8;16)t/del(12)(p12-13)M2伴嗜堿粒細(xì)胞增多M2Baso/t(12p)1、數(shù)量急性髓細(xì)胞白血病的MIC分型核型FAB形態(tài)MI63Ph染色體

是CML的特征性異常染色體，檢出率為90-95%，其中絕大多數(shù)為t(9;22)(q34;q11),稱為典型易位。Ph染色體是CML的特征性異常染色體，檢出率為906448,XY,+4,t(9;22),+Ph48,XY,+4,t(9;22),+Ph65急性淋巴細(xì)胞白血病的MIC分型

ALL亞型免疫表型細(xì)胞遺傳學(xué)預(yù)后早B-ALLTdT+、CD19+、CD10+t(9;22)(q34;q11)預(yù)后較好前前B-ALLTdT+、CD19+、CD10-11q23預(yù)后較好B-ALLTdT+、CD20+、SIg+t(8;14)(q24;q11)預(yù)后不良T-ALLt(11;14)(p13;q11)預(yù)后較好T-ALLt(1;14)(p32;q11)同上T-ALLt(10;14)(q24;q11)同上T-ALLt(8;14)(q24;q11)預(yù)后不良急性淋巴細(xì)胞白血病的MIC分型ALL亞型免疫表型細(xì)胞遺66多看

1、數(shù)量

2、種類(lèi)六、如何學(xué)好血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)多看六、如何學(xué)好血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)67多討論

1、同事

2、老師多討論68多讀書(shū)（細(xì)胞形態(tài)、發(fā)病情況）

1、常見(jiàn)病

2、罕見(jiàn)病多讀書(shū)（細(xì)胞形態(tài)、發(fā)病情況）69多請(qǐng)教

1、教師

2、圖譜多請(qǐng)教70多會(huì)診

1、同級(jí)醫(yī)院

2、上級(jí)醫(yī)院多會(huì)診71多溝通

1、臨床

2、病人多溝通72多觀察

1、細(xì)胞少時(shí)（TB、R-S細(xì)胞）

2、細(xì)胞多時(shí)（特殊類(lèi)型：如紅細(xì)胞樣瘤細(xì)胞）多觀察73重視組化染色和其他實(shí)驗(yàn)檢查

1、常規(guī)（POX或SBB、NAP、PAS、Fe)；少見(jiàn)(NSE—中性、酸性、堿性，ACP）；

2、溶血檢查。重視組化染色和其他實(shí)驗(yàn)檢查74二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察在檢查骨髓時(shí)，需同時(shí)進(jìn)行血涂片的觀察1、應(yīng)注意WBC分類(lèi)計(jì)數(shù)及形態(tài)觀察；2、注意成熟RBC的形態(tài)有無(wú)異常。有核紅。3、估計(jì)PLt數(shù)量及注意其形態(tài)有無(wú)異常；4、觀察寄生蟲(chóng)有無(wú)（如瘧原蟲(chóng)）。㈤、填寫(xiě)檢查報(bào)告單根據(jù)骨髓象和血象檢查結(jié)果，按檢查報(bào)告單的要求，逐項(xiàng)詳細(xì)填寫(xiě)及描述骨髓象、血象表現(xiàn)的特征，結(jié)合臨床資料提出形態(tài)學(xué)診斷意見(jiàn)。二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察75

（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）（NeutrophilalkalinePhosphatase，NAP）【原理】偶氮偶聯(lián)法。是血細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成灰黑色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶活性所在之處。（另有鈣-鈷法略）【結(jié)果】堿性磷酸酶主要存在于成熟階段的中性粒細(xì)胞（分葉核及桿狀核），其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)?！緟⒖贾怠砍扇薔AP陽(yáng)性率10%~40%；積分值40~80（分）。（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）76臨床意義1、感染性疾?。杭?xì)菌感染與病毒感染的鑒別2、慢性粒細(xì)胞白血病的NAP活性明顯減低，積分值常為0，類(lèi)白血病反應(yīng)的NAP活性極度增高。3、急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，NAP積分值減低；急性淋巴細(xì)胞白血病的NAP積分值多增高；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)一般正?；驕p低。臨床意義77臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病2、幫助鑒別T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞：TL（+），BL（-）3、幫助鑒別Gaucher病與Niemanm-Pick病。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病78（七）糖原染色(periodicacid–Schiff‘sreactionPAS)

[原理]：過(guò)碘酸能將血細(xì)胞內(nèi)的糖元氧化，生成醛基。醛基與Schiff液中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果

]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團(tuán)塊、均勻紅色為陽(yáng)性。[意義]：紅血病、紅白血病陽(yáng)性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽(yáng)性。（七）糖原染色(periodicacid–Schiff79骨髓鐵染色（Fe）MDS-RAS鐵染色，圖中所指為環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞

骨髓鐵染色（Fe）MDS-RAS鐵染色，圖中所指為環(huán)形鐵粒幼80骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型機(jī)體免疫狀態(tài)、某些疾病診斷、病期分析、監(jiān)測(cè)治療和判斷預(yù)后的參數(shù)。4、用于識(shí)別不同分化階段的細(xì)胞CD34+、CD90+、Lin-被認(rèn)為是造血干細(xì)胞的主要標(biāo)志；CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；CD34+、TDT+、CD10+、CD7+為T(mén)淋巴細(xì)胞系祖細(xì)胞標(biāo)志；CD34+、CD19+為B淋巴細(xì)胞系祖細(xì)胞標(biāo)志。根據(jù)不同抗體組合可T、B淋巴細(xì)胞區(qū)分為不同分化階段。（參照表）骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型機(jī)體免疫狀態(tài)、某些疾病診斷、病期分析、監(jiān)測(cè)81多觀察

1、細(xì)胞少時(shí)（TB、R-S細(xì)胞）

2、細(xì)胞多時(shí)（特殊類(lèi)型：如紅細(xì)胞樣瘤細(xì)胞）多觀察82骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件83骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件84

85

骨髓標(biāo)本采集要求[標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)]：①形態(tài)檢查抽吸量不超過(guò)0.2ml；②同時(shí)進(jìn)行多項(xiàng)檢查應(yīng)優(yōu)先抽吸形態(tài)檢查標(biāo)本；③涂片厚薄適宜，不少于4張，并同時(shí)制作配套的血片；④作好標(biāo)記；⑤如干抽，此時(shí)應(yīng)考慮作骨髓活檢；⑥多部位或?qū)τ袎和袋c(diǎn)或根據(jù)X線檢查提示進(jìn)行穿刺，以提高陽(yáng)性率。

骨髓標(biāo)本采集要求86判斷骨髓取材成功的標(biāo)準(zhǔn)①抽吸骨髓液時(shí)，病人有特殊酸痛感；②有骨髓小粒和脂肪滴；③顯微鏡下可見(jiàn)到骨髓特有細(xì)胞，如巨核細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞、漿細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞、纖維細(xì)胞和大量紅系、粒系幼稚細(xì)胞等。判斷骨髓取材成功的標(biāo)準(zhǔn)①抽吸骨髓液時(shí)，病人有特殊酸痛感；87骨髓涂片、染色：Wright或Giemsa染色、雙染色法

返回骨髓涂片、染色：Wright或Giemsa染色、雙染色法

返88二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈠、低倍鏡檢查1、確定骨髓標(biāo)本的取材和涂片制作是否滿意骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼觀察，在涂尾部見(jiàn)到散在的約粟粒大小呈淺肉色半透明的骨髓小粒及少量脂肪小滴；在顯微鏡下見(jiàn)到較多骨髓特有的細(xì)胞如各系幼稚細(xì)胞及巨核細(xì)胞等，是穿刺成功的標(biāo)志。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋?zhuān)瑸槿〔牟涣既缰镜卧龆啵瑒t表示紅髓成份減少，反映骨髓增生減低插圖二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈠、低倍鏡檢查插圖89正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周?chē)梢?jiàn)到1~5個(gè)呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。紅細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%c.含有鐵顆粒的幼紅細(xì)胞稱為鐵粒幼細(xì)胞。急性淋巴細(xì)胞白血病則呈陰性反應(yīng)。4、再障時(shí)NAP活性增高；醛基與Schiff液中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。5、其他血液病時(shí)NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。因此，POX染色對(duì)急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價(jià)值。4、用于識(shí)別不同分化階段的細(xì)胞t(6;9)(p21-22;q34)2、種類(lèi)②骨髓增殖性疾病，如CML、真紅、ET、IMF等；根據(jù)不同抗體組合可T、B淋巴細(xì)胞區(qū)分為不同分化階段。CD34,33,13+[結(jié)果]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團(tuán)塊、均勻紅色為陽(yáng)性。②有骨髓小粒和脂肪滴；

2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）骨髓增生程度通常以骨髓中有核細(xì)胞的量來(lái)反映。采用五級(jí)法正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周?chē)梢?jiàn)到1~5個(gè)呈90骨髓增生程度分級(jí)

有核細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞有核細(xì)胞占全部細(xì)胞百分率有核細(xì)胞/1000個(gè)成熟紅細(xì)胞常見(jiàn)原因范圍平均范圍平均極度活躍1:0.5~2.01:1>50238.96~521.07351.96白血病明顯活躍1:5~121:10>1043.78~230.77114.51增生貧血增生活躍1.16~321:201~11021.53~63.6735.34正常骨髓增生減低1:35~701:500.5~17.41~19.6110.53慢性再障明顯減低1:3001:200<0.51.96~7.414.85急性再障下一頁(yè)骨髓增生程度分級(jí)有核細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞有91骨髓增生程度分級(jí)(高倍鏡）明顯減低1~5/HP增生減低5~20/HP增生活躍20~50/HP明顯活躍50~100/HP極度活躍>100/HP返回骨髓增生程度分級(jí)(高倍鏡）明顯減低增生減低增生活躍明顯活躍極923、觀察巨核細(xì)胞需要注意數(shù)量、成熟程度、產(chǎn)血小板功能及其形態(tài)（包括血小板的形態(tài)）等四個(gè)方面。低倍鏡下計(jì)數(shù)全部片膜的巨核細(xì)胞數(shù)。并轉(zhuǎn)換油鏡觀察，進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)，注意巨核細(xì)胞及血小板的形態(tài)有無(wú)異常。4、注意有無(wú)異常細(xì)胞如惡性組織細(xì)胞病的異常組織細(xì)胞、轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞、Gaucher細(xì)胞、Niemann-Pick細(xì)胞等。注意觀察有無(wú)散在或成堆分布的體積較大、形態(tài)特殊的異常細(xì)胞出現(xiàn)，尤其應(yīng)注意涂片尾部、邊緣及骨髓小粒周?chē)０l(fā)現(xiàn)可疑異常細(xì)胞，應(yīng)在油浸鏡下觀察加以確認(rèn)。

3、觀察巨核細(xì)胞93二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈡、油浸鏡檢查選擇有核細(xì)胞分布均勻、結(jié)構(gòu)清晰、著色良好的涂膜體尾交界處部位作油浸鏡檢查。1、有核細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)在油浸鏡下連續(xù)分?jǐn)?shù)200個(gè)或500個(gè)有核細(xì)胞，按細(xì)胞的不同系列和不同的發(fā)育階段分別計(jì)數(shù)。然后計(jì)算出分別占有核細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)。再累計(jì)粒系和紅系總數(shù)，計(jì)算粒紅比例（G:E）。分類(lèi)計(jì)數(shù)時(shí)，巨核細(xì)胞及分裂、退化細(xì)胞不計(jì)入。2、觀察細(xì)胞形態(tài)仔細(xì)觀察各系列細(xì)胞的形態(tài)有無(wú)異常，包括注意成熟紅細(xì)胞的形態(tài)有無(wú)異常，有無(wú)特殊異常細(xì)胞出現(xiàn)，必要時(shí)還需注意有無(wú)寄生蟲(chóng)。插圖二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈡、油浸鏡檢查插圖94㈢、檢查結(jié)果的臨床意義1、骨髓增生程度，其臨床意義如前表所述。2、骨髓中各系列細(xì)胞及其各發(fā)育階段的比例粒細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的50～60%紅細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%

粒紅比例（G/E）2.76±0.83:1(2-4:1)淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：約占有核細(xì)胞的20%單核細(xì)胞系統(tǒng)：一般<4%漿細(xì)胞系統(tǒng)：一般<2%巨核細(xì)胞系統(tǒng)：7~35個(gè)為正常值(1.5*3cm涂片）。其他細(xì)胞：可見(jiàn)到極少量的非造血細(xì)胞成分㈢、檢查結(jié)果的臨床意義953、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義⑴、粒細(xì)胞系與紅細(xì)胞系比例（粒/紅比例）1)、粒紅比例正常：見(jiàn)于：①正常骨髓象；②粒、紅兩系平等增多或減少，前者如紅白血病，后者如AA；③粒、紅兩系細(xì)胞基本不變化的造血系統(tǒng)疾病，如MM、骨髓轉(zhuǎn)移癌、ITP等。2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1?？梢?jiàn)粒細(xì)胞系增多，或由紅細(xì)胞系減少所致。常見(jiàn)于：①急性或慢性粒白血病；②急性化膿性感染、中性粒細(xì)胞性類(lèi)白血病反應(yīng)；③純紅再障。3)、粒紅比例減低：指粒/紅比例小于2:1?？梢?jiàn)粒細(xì)胞系減少，或由紅細(xì)胞系增多所致。常見(jiàn)于：①粒細(xì)胞減少，如粒缺；②紅細(xì)胞系增多，如各種增生性貧血、真紅或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥等。3、各系列細(xì)胞比例改變的臨床意義96⑵、粒細(xì)胞系統(tǒng)：1)、粒系細(xì)胞增多：見(jiàn)于：①各型粒細(xì)胞白血病，急性粒細(xì)胞白血病以原粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞增多為主，CML以中性晚幼粒及桿狀核粒細(xì)胞增多為主；②大部分急性炎癥和感染性疾病、中性粒細(xì)胞性類(lèi)白反應(yīng)等，以中性晚幼粒及桿狀核粒細(xì)胞增多為主。2)、粒細(xì)胞減少：見(jiàn)于AA、粒細(xì)胞缺乏癥或粒細(xì)胞減少癥。⑶、紅細(xì)胞系統(tǒng)：1)紅系增多：見(jiàn)于：①各類(lèi)增生性貧血如溶血性貧血、失血性貧血、小細(xì)胞低色素性貧血等，以中幼紅及晚幼紅細(xì)胞增多為主；②巨幼細(xì)胞⑵、粒細(xì)胞系統(tǒng)：97貧血，以巨幼紅細(xì)胞增多為主；③急性紅白血病，以原紅及早幼紅細(xì)胞增多為主，并常伴幼紅細(xì)胞巨幼樣變。2)、紅系減少：見(jiàn)于AA（包括PRCA），但部分CAA，骨髓呈灶性增生者，有時(shí)可見(jiàn)紅系細(xì)胞比例增多。⑷、淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：1)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)性增多：見(jiàn)于急淋和慢淋、惡性淋巴瘤、傳淋和傳單、其他病毒性感染、淋巴細(xì)胞類(lèi)白等。2)、淋巴細(xì)胞相對(duì)性增多：見(jiàn)于AA、粒缺或粒細(xì)胞減少癥。⑸、單核細(xì)胞系統(tǒng)：增多見(jiàn)于：①血液系統(tǒng)疾病如急單、急粒-單、MDS、惡組、淋巴瘤等；②某些感染性疾病結(jié)核病、布魯菌病、原蟲(chóng)感染、貧血，以巨幼紅細(xì)胞增多為主；③急性紅白血病，以原紅及早幼紅細(xì)98感染性心內(nèi)膜炎等；③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；④其他如惡性腫瘤、肝硬化、藥物反應(yīng)等。⑹、漿細(xì)胞系統(tǒng)：增多見(jiàn)于：①M(fèi)M、漿細(xì)胞白血病、巨球蛋白血癥、重鏈病等；②反應(yīng)性漿細(xì)胞增多如慢性炎癥及感染性疾病、風(fēng)濕性疾病、惡性腫瘤、過(guò)敏性疾病等；③AA、粒缺等。⑺、巨核細(xì)胞系統(tǒng)：1)、增多：①I(mǎi)TP、Evans綜合征；②骨髓增殖性疾病，如CML、真紅、ET、IMF等；③脾功能亢進(jìn)；④巨核細(xì)胞白血病。2)、巨核細(xì)胞減少：見(jiàn)于AA、AL及其他骨髓浸潤(rùn)或破壞的疾病，以及急性感染、化學(xué)物或藥物中毒、放射病等。感染性心內(nèi)膜炎等；③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)99二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察在檢查骨髓時(shí)，需同時(shí)進(jìn)行血涂片的觀察1、應(yīng)注意WBC分類(lèi)計(jì)數(shù)及形態(tài)觀察；2、注意成熟RBC的形態(tài)有無(wú)異常。有核紅。3、估計(jì)PLt數(shù)量及注意其形態(tài)有無(wú)異常；4、觀察寄生蟲(chóng)有無(wú)（如瘧原蟲(chóng)）。㈤、填寫(xiě)檢查報(bào)告單根據(jù)骨髓象和血象檢查結(jié)果，按檢查報(bào)告單的要求，逐項(xiàng)詳細(xì)填寫(xiě)及描述骨髓象、血象表現(xiàn)的特征，結(jié)合臨床資料提出形態(tài)學(xué)診斷意見(jiàn)。二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義㈣、血涂片的觀察100低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)胞）油鏡觀察骨髓有核細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)200－500個(gè)細(xì)胞系形態(tài)學(xué)觀察粒系紅系單核系淋巴系漿系其他細(xì)胞計(jì)算結(jié)果（各細(xì)胞系百分比粒紅比值）觀察血片組織化學(xué)染色填寫(xiě)骨髓圖文結(jié)果報(bào)告單（骨髓細(xì)胞特征血片細(xì)胞特征組化特征）骨髓片存檔保存骨髓象分析步驟示意圖低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)101返回返回102三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色[意義]：1、有助于了解各種血細(xì)胞的化學(xué)組成及病理生理改變。2、可用作血細(xì)胞類(lèi)型的鑒別。3、以及對(duì)某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機(jī)制探討等均有一定價(jià)值。三、血細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)染色[意義]：1034、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。t(11;14)(p13;q11)有CD19、CD20、CD22等。2)、粒細(xì)胞減少：見(jiàn)于AA、粒細(xì)胞缺乏癥或粒細(xì)胞減少癥。t/del(11)(q23)t(8;14)(q24;q11)①抽吸骨髓液時(shí)，病人有特殊酸痛感；5、其他血液病時(shí)NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。3、急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，NAP積分值減低；正常幼紅細(xì)胞（主要是晚幼紅細(xì)胞）的細(xì)胞核周?chē)梢?jiàn)到1~5個(gè)呈藍(lán)色細(xì)小的鐵顆粒。3、以及對(duì)某些血液病的診斷和鑒別診斷，療效觀察、發(fā)病機(jī)制探討等均有一定價(jià)值。1、應(yīng)注意WBC分類(lèi)計(jì)數(shù)及形態(tài)觀察；醛基與Schiff液中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。2、注意成熟RBC的形態(tài)有無(wú)異常。AML-M2（CD33陽(yáng)性，呈棕黃色沉淀）1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病二、骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的

內(nèi)容、方法和臨床意義見(jiàn)第十章分子生物學(xué)檢查中第三節(jié)染色體檢查。低倍鏡觀察（取材涂片有核細(xì)胞增生巨核細(xì)胞病理細(xì)胞）M5b伴吞噬細(xì)胞增多2)、粒紅比例增高：指粒/紅比例大于5:1。（一）過(guò)氧化物酶染色（POX）【原理】

血細(xì)胞中的過(guò)氧化物酶（peroxidase，POX）能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無(wú)色聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中。【結(jié)果】胞質(zhì)中無(wú)藍(lán)黑色顆粒者為陰性反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)小顆粒、分布稀疏者為弱陽(yáng)性反應(yīng)，顆粒粗大而密集者為強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)?！九R床意義】過(guò)氧化物酶染色主要用于急性白血病類(lèi)型的鑒別。急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，白血病細(xì)胞多呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)呈弱陽(yáng)性或陰性反應(yīng)；急性淋巴細(xì)胞白血病則呈陰性反應(yīng)。因此，POX染色對(duì)急性粒細(xì)胞白血病與急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別最有價(jià)值。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。（一）104骨髓片POX染色骨髓片POX染色105骨髓片POX染色APL：呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)AML-M4：部分呈陽(yáng)性反應(yīng)，部分成弱陽(yáng)性反應(yīng)AML-M5：呈弱陽(yáng)性ALL：呈陰性，<3%骨髓片POX染色APL：呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)AML-M4：部分呈陽(yáng)性106（二）蘇丹黑B染色

[原理]：是一種脂溶性的染料，可溶于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的含脂物質(zhì)，使胞漿中的脂類(lèi)物質(zhì)呈棕黑色或深黑色顆粒。[結(jié)果和意義]：與POX染色大致相同。（二）蘇丹黑B染色

[原理]：是一種脂溶性的染料，可溶于細(xì)胞107

（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）（NeutrophilalkalinePhosphatase，NAP）【原理】偶氮偶聯(lián)法。是血細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成灰黑色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶活性所在之處。（另有鈣-鈷法略）【結(jié)果】堿性磷酸酶主要存在于成熟階段的中性粒細(xì)胞（分葉核及桿狀核），其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。【參考值】成人NAP陽(yáng)性率10%~40%；積分值40~80（分）。（三）中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）108臨床意義1、感染性疾?。杭?xì)菌感染與病毒感染的鑒別2、慢性粒細(xì)胞白血病的NAP活性明顯減低，積分值常為0，類(lèi)白血病反應(yīng)的NAP活性極度增高。3、急性粒細(xì)胞白血病時(shí)，NAP積分值減低；急性淋巴細(xì)胞白血病的NAP積分值多增高；急性單核細(xì)胞白血病時(shí)一般正?；驕p低。臨床意義1094、再障時(shí)NAP活性增高；PNH時(shí)活性減低。5、其他血液病時(shí)NAP活性中度增高，惡組NAP活性降低。骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件110系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。根據(jù)顯帶特點(diǎn)，將染色體劃區(qū)分布，一般用4個(gè)符號(hào)表示特定區(qū)帶，如“8q22”則代表8號(hào)染色體長(zhǎng)臂2區(qū)2帶。系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋?zhuān)瑸槿〔牟涣糓2/t(8;21)4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。如骨髓小粒較少或缺如，骨髓特有成份減少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀釋?zhuān)瑸槿〔牟涣甲屑?xì)觀察各系列細(xì)胞的形態(tài)有無(wú)異常，包括注意成熟紅細(xì)胞的形態(tài)有無(wú)異常，有無(wú)特殊異常細(xì)胞出現(xiàn)，必要時(shí)還需注意有無(wú)寄生蟲(chóng)。2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）AML-M4：部分呈陽(yáng)性反應(yīng)，t(8;21)(q22;q22)包括數(shù)目畸變和結(jié)構(gòu)畸變二類(lèi)。2、注意成熟RBC的形態(tài)有無(wú)異常。③風(fēng)濕性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；四、骨髓細(xì)胞免疫學(xué)分型3、急性粒-單核細(xì)胞白血病時(shí)，可見(jiàn)陰性和陽(yáng)性二種細(xì)胞。氯乙酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE,為特異性酯酶）：粒系紅系單核系淋巴系漿系其他細(xì)胞CD34,33,13+核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）+++++++++++++-嗜酸粒細(xì)胞-系細(xì)胞的抗體有CD13、CD14、CD15、CD32、CD3111（四）酸性磷酸酶染色（ACP）[原理]：（硫化鉛法）血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性條件下（PH5.0)將基質(zhì)中的?-甘油磷酸鈉水解,產(chǎn)生磷酸鈉,然后與硝酸鉛反應(yīng),生成磷酸鉛沉淀,再與硫化銨反應(yīng)形成硫化鉛沉淀,定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果]：細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黑色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)；否則陰性(另有偶氮偶聯(lián)法略）。（四）酸性磷酸酶染色（ACP）[原理]：（硫化鉛法）血細(xì)胞內(nèi)112臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病2、幫助鑒別T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞：TL（+），BL（-）3、幫助鑒別Gaucher病與Niemanm-Pick病。4、單核、組織、網(wǎng)狀、巨核細(xì)胞ACP染色均呈陰性反應(yīng)。臨床意義1、幫助診斷多毛細(xì)胞白血病113酸性磷酸酶染色（ACP）FAB：ALL-L2ACP染色呈陽(yáng)性反應(yīng)（桔紅色粗大顆粒）提示為T(mén)淋巴細(xì)胞白血病酸性磷酸酶染色（ACP）FAB：ALL-L2ACP染色呈陽(yáng)性114（五）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

粒細(xì)胞酯酶

氯乙酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE,為特異性酯酶）：

1、急性粒細(xì)胞白血病呈強(qiáng)陽(yáng)性，不被氟化鈉抑制。

2、急性單核細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病呈陰性。

3、急性粒-單核細(xì)胞白血病時(shí)，可見(jiàn)陰性和陽(yáng)性二種細(xì)胞。（五）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

粒細(xì)胞酯酶氯乙酸A115（六）α-醋酸萘酚酯酶染色α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE，NSE為非特異性酯酶)：

1、急性單核細(xì)胞白血病、急性粒-單核細(xì)胞白血病的單核系細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)，可被氟化鈉抑制(抑制率＞50%)；

2、急性粒細(xì)胞白血病一般為陰性或呈弱陽(yáng)性反應(yīng)，不被氟化鈉抑制。（六）α-醋酸萘酚酯酶染色α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE，N116CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；1、數(shù)量2、注意成熟RBC的形態(tài)有無(wú)異常?！緟⒖贾怠砍扇薔AP陽(yáng)性率10%~40%；M5a/t(11q)重視組化染色和其他實(shí)驗(yàn)檢查表示47條染色體，增加了一條8號(hào)染色體，第9號(hào)與第22號(hào)染色體之間易位，斷裂點(diǎn)分別在第9號(hào)染色體長(zhǎng)臂3區(qū)4帶和第22號(hào)染色體長(zhǎng)臂1區(qū)1帶。粒系中原粒cell(-)，早幼粒cell強(qiáng)陽(yáng)性，中性粒細(xì)胞（+++），單核（±），淋巴（-），少數(shù)（±），紅細(xì)胞（-）；2、種類(lèi)多讀書(shū)（細(xì)胞形態(tài)、發(fā)病情況）①抽吸骨髓液時(shí)，病人有特殊酸痛感；2、細(xì)胞內(nèi)鐵觀察幼紅細(xì)胞內(nèi)的鐵。[意義]：紅血病、紅白血病陽(yáng)性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽(yáng)性。d.AML-M2（CD33陽(yáng)性，呈棕黃色沉淀）核型是指中期分裂相的全部染色體按Danvers體制排列而成。常見(jiàn)于：①急性或慢性粒白血病；活化T細(xì)胞不表達(dá)CD45RA，而CD25、CD2、CD45RO、CD54、CD58等均強(qiáng)表達(dá)。1、細(xì)胞少時(shí)（TB、R-S細(xì)胞）2、判斷骨髓增生程度（表4-2-7）α－醋酸萘酚酯染色（α－NAE，NSE）急單呈陽(yáng)性反應(yīng)。CD34+、CD33+為造血干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；α－醋酸117（七）糖原染色(periodicacid–Schiff‘sreactionPAS)

[原理]：過(guò)碘酸能將血細(xì)胞內(nèi)的糖元氧化，生成醛基。醛基與Schiff液中的無(wú)色品紅結(jié)合，形成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。[結(jié)果

]：胞質(zhì)中有紅色顆粒、團(tuán)塊、均勻紅色為陽(yáng)性。[意義]：紅血病、紅白血病陽(yáng)性，其他紅細(xì)胞貧血陰性，巨核細(xì)胞陽(yáng)性。（七）糖原染色(periodicacid–Schiff118臨床意義粒系中原粒cell(-)，早幼粒cell強(qiáng)陽(yáng)性，中性粒細(xì)胞（+++），單核（±），淋巴（-），少數(shù)（±），紅細(xì)胞（-）；巨核、Plt均呈陽(yáng)性反應(yīng)。骨髓檢查組化免疫分型遺傳學(xué)培訓(xùn)課件119PASAML-M6幼紅細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng)MA幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)PASAML-M6MA120

（八）鐵染色（普魯氏藍(lán)反應(yīng)）【原理】人體內(nèi)的總鐵有一定量以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存在骨髓中的單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，幼紅細(xì)胞胞質(zhì)的線粒體中也含有含鐵血黃素。這些鐵在酸化的亞鐵氰化鉀溶液中反應(yīng)，生成藍(lán)色的鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位?！窘Y(jié)果】