植物細(xì)胞工程課件

細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程制藥一概述二動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)和生理特性三生產(chǎn)動(dòng)物細(xì)胞的要求和獲得四動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基五動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法六動(dòng)物細(xì)胞大量培養(yǎng)的方法和操作方式七動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器八動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)品的純化方法和質(zhì)量要求九動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)品的制造實(shí)例十動(dòng)物細(xì)胞制藥的前景與展望植物細(xì)胞工程制藥一基本概念二植物細(xì)胞工程發(fā)展簡(jiǎn)史三植物細(xì)胞的形態(tài)及生理特性四植物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)五影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物積累的因素六植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器七進(jìn)展與展望細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程制藥植物細(xì)胞工程制藥1第五章植物細(xì)胞工程第五章植物細(xì)胞工程2第一節(jié)基本概念1.植物細(xì)胞的全能性2.植物組織和器官培養(yǎng)3.植物的分化4.脫分化5.再分化6.植物無(wú)菌培養(yǎng)7.細(xì)胞培養(yǎng)8.分生組織培養(yǎng)9.外植體10.無(wú)性繁殖系11.突變體12.繼代培養(yǎng)13.次級(jí)代謝作用和次級(jí)代謝產(chǎn)物第一節(jié)基本概念1.植物細(xì)胞的全能性3植物細(xì)胞全能性在離體培養(yǎng)下，植物的體細(xì)胞或性細(xì)胞被誘導(dǎo)產(chǎn)生器官分化和再生，成為具有與母體植株相同遺傳信息的植株的能力。植物細(xì)胞全能性的相對(duì)性不是所有基因型的所有細(xì)胞在任何條件下都具有良好的培養(yǎng)反應(yīng)；動(dòng)、植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度存在明顯差異。細(xì)胞全能性并不意味著任何細(xì)胞均可以直接產(chǎn)生植物個(gè)體。植物細(xì)胞全能性在離體培養(yǎng)下，植物的體細(xì)胞或性細(xì)胞被誘導(dǎo)產(chǎn)生器4植物細(xì)胞分化基因的差異性表達(dá)，即為細(xì)胞分化；具體表現(xiàn)為內(nèi)部生理變化和外部形態(tài)變化。細(xì)胞分化使細(xì)胞功能趨于專門化，更有利于提高生理功能的效率。因此,分化是進(jìn)化的表現(xiàn),越高級(jí)的植物類群,分化水平越高,細(xì)胞分工越細(xì),機(jī)體代謝水平也越高。植物細(xì)胞分化基因的差異性表達(dá)，即為細(xì)胞分化；具體表現(xiàn)為內(nèi)部生5細(xì)胞脫分化（dedifferentiation)是指失去已分化細(xì)胞的典型特征，或消除了細(xì)胞分工，使之回復(fù)到分生組織狀態(tài)，或胚性細(xì)胞狀態(tài)。細(xì)胞脫分化階段 啟動(dòng)階段，表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)增生，并開(kāi)始向細(xì)胞中央伸出細(xì)胞質(zhì)絲，液泡蛋白體出現(xiàn)； 演變階段，此時(shí)細(xì)胞核開(kāi)始向中央移動(dòng)，質(zhì)體演變成原質(zhì)體； 脫分化終結(jié)期，細(xì)胞回復(fù)到分生細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞分裂即將開(kāi)始。一個(gè)植物細(xì)胞向分生狀態(tài)回復(fù)過(guò)程所能進(jìn)行的程度，取決于它在自然部位上所處的位置和生理狀態(tài)。細(xì)胞脫分化（dedifferentiation)6細(xì)胞再分化（redifferentiation)：脫分化后的分生細(xì)胞（愈傷組織）在特定的條件下，重新恢復(fù)細(xì)胞分化能力，并經(jīng)歷器官發(fā)生形成單極性的芽或根，或經(jīng)歷胚胎發(fā)生形成雙極性的胚狀體，進(jìn)一步發(fā)育成完整植物體的過(guò)程。極性：是指植物的器官、組織、甚至單個(gè)細(xì)胞在不同的軸向上存在的某種形態(tài)結(jié)構(gòu)以及生理生化上的梯度差異。

在很多情況下，細(xì)胞的不均等分裂是細(xì)胞極性建立的標(biāo)志。細(xì)胞再分化（redifferentiation)：7愈傷組織(callus)：脫分化后的細(xì)胞，往往經(jīng)過(guò)細(xì)胞分裂形成一團(tuán)無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能的松散的薄壁細(xì)胞團(tuán)。外植體：用于植物組織（細(xì)胞）培養(yǎng)的器官或組織。愈傷組織(callus)：脫分化后的細(xì)胞，往往經(jīng)過(guò)細(xì)胞分裂形8第二節(jié)植物細(xì)胞工程發(fā)展簡(jiǎn)史（了解）第二節(jié)植物細(xì)胞工程發(fā)展簡(jiǎn)史（了解）9第三節(jié)植物細(xì)胞的形態(tài)及生理特性一植物細(xì)胞的形態(tài)二植物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征三植物細(xì)胞的主要生理活性物質(zhì)及其他化學(xué)組分四植物培養(yǎng)細(xì)胞的生理特性第三節(jié)植物細(xì)胞的形態(tài)及生理特性一植物細(xì)胞的形態(tài)10一植物細(xì)胞的形態(tài)一植物細(xì)胞的形態(tài)11植物細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)

（質(zhì)膜）洋蔥表皮細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁細(xì)胞核液泡細(xì)胞質(zhì)二植物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征植物細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)（質(zhì)膜）洋蔥表皮細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁細(xì)胞12模式植物細(xì)胞構(gòu)造

細(xì)胞壁胞間層初生壁次生壁后含物

原生質(zhì)體貯藏物質(zhì)晶體細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞器細(xì)胞核模式植物細(xì)胞模式植物細(xì)胞是由細(xì)胞壁、原生質(zhì)體、后含物三大部分組成質(zhì)體線粒體液泡內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體高爾基體模式植物細(xì)胞構(gòu)造細(xì)胞壁胞間層后含物原生質(zhì)體貯藏物質(zhì)細(xì)胞膜模13動(dòng)植物細(xì)胞區(qū)別細(xì)胞壁、質(zhì)體、液泡三部分是植物細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)，動(dòng)物細(xì)胞沒(méi)有動(dòng)植物細(xì)胞區(qū)別細(xì)胞壁、質(zhì)體、液泡三部分是植物細(xì)胞特14三植物細(xì)胞的主要生理活性物質(zhì)及其他化學(xué)組分1生理活性物質(zhì)A酶B維生素C植物激素D抗生素和植物殺菌素2其他成分A生物堿B糖苷類C揮發(fā)油D有機(jī)酸三植物細(xì)胞的主要生理活性物質(zhì)及其他化學(xué)組分1生理活性物質(zhì)15四植物培養(yǎng)細(xì)胞的生理特性延遲期：細(xì)胞數(shù)量不變，核酸及蛋白合成較快加速期：最大生長(zhǎng)期，最大細(xì)胞濃度對(duì)數(shù)期：細(xì)胞數(shù)呈對(duì)數(shù)增加穩(wěn)定期：細(xì)胞高液泡化，非常脆弱四植物培養(yǎng)細(xì)胞的生理特性延遲期：細(xì)胞數(shù)量不變，核酸及蛋白合16植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基蔗糖植物激素葡萄糖動(dòng)物血清植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系快速繁殖、培育無(wú)病毒植株、制造人工種子獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞17第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)一植物材料的準(zhǔn)備二培養(yǎng)基及其組成三培養(yǎng)方法第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)一植物材料的準(zhǔn)備18最重要的是無(wú)菌。植物組織培養(yǎng)的外植體必須是無(wú)雜菌材料。植物組織培養(yǎng)時(shí)表面處理的常用滅菌劑（表5-5）不同器官的滅菌方式不同（表5-6）一植物材料的準(zhǔn)備最重要的是無(wú)菌。一植物材料的準(zhǔn)備191無(wú)機(jī)鹽：大量元素：N,S,P,K,Mg,Ca,Cl,Na微量元素：Fe,Mn,Zn,Cu,Co,Ni等2碳源：糖類，肌醇等直接通過(guò)光合作用吸收CO2二培養(yǎng)基及其組成1無(wú)機(jī)鹽：二培養(yǎng)基及其組成203.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)

（1）生長(zhǎng)素類:

(例）在離體條件下胡蘿卜體細(xì)胞胚的發(fā)育是一個(gè)包括兩個(gè)步驟的過(guò)程,每個(gè)步驟需要一種不同的培養(yǎng)基。愈傷組織的建立和增殖所需要的是一種含有生長(zhǎng)素的培養(yǎng)，通常所用的生長(zhǎng)素是2,4-D,濃度范圍0.5～1mg/L。在這樣一種培養(yǎng)上,愈傷組織的若干部位分化形成分生細(xì)胞團(tuán),稱作“胚性細(xì)胞團(tuán)”。在增殖培養(yǎng)基上反復(fù)繼代,胚性細(xì)胞團(tuán)的數(shù)量不斷增加,但并不出現(xiàn)成熟的胚。然而,如果把胚性細(xì)胞團(tuán)轉(zhuǎn)移到一種生長(zhǎng)素含量很低或完全沒(méi)有生長(zhǎng)素的培養(yǎng)上,它們就能發(fā)育為成熟的胚。

另：吲哚乙酸3.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)

（1）生長(zhǎng)素類:

(例）在離體條件下胡21(2)細(xì)胞分裂素類:

既或促進(jìn)也可抑制體細(xì)胞胚的發(fā)生,這主要取決于植物的種類及其基因型。一般而言,細(xì)胞分裂素對(duì)于促進(jìn)體細(xì)胞胚的成熟有顯著作用,特別有利于子葉的發(fā)育。另外有研究表明,不同的外植體對(duì)于細(xì)胞分裂素的需要可能具有不同的專一性,如在胡蘿卜的研究中發(fā)現(xiàn),雖然激動(dòng)素對(duì)胚胎發(fā)生過(guò)程表現(xiàn)抑制作用,但濃度為0.1μM的玉米素卻能促進(jìn)這個(gè)過(guò)程,而6-BA對(duì)胡蘿卜則是促進(jìn)其愈傷組織的增殖,但不形成胚性愈傷組織。植物組織的生長(zhǎng)主要取決于生長(zhǎng)素和分裂素。(2)細(xì)胞分裂素類:

既或促進(jìn)也可抑制體細(xì)胞胚的發(fā)生,這主要224.氮源氮源有還原態(tài)氮(NH4+)和氧化態(tài)氮(NO3-)兩種在以KNO3為唯一氮源(如White培養(yǎng)基)的培養(yǎng)上建立起來(lái)的愈傷組織,去掉生長(zhǎng)素以后不能形成胚。5.維生素4.氮源23三培養(yǎng)方法按培養(yǎng)基類型分為：固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)1.分批培養(yǎng)法2.半連續(xù)培養(yǎng)法3.連續(xù)培養(yǎng)法4.固定化培養(yǎng)法三培養(yǎng)方法按培養(yǎng)基類型分為：24植物組織培養(yǎng)技術(shù)的流程植物組織培養(yǎng)技術(shù)的流程25第五節(jié)影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物積累的因素一外植體選擇二培養(yǎng)條件的影響第五節(jié)影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物積累的因素一外植體選擇26一外植體選擇不同外植體的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)物，其最大次級(jí)代謝產(chǎn)物的累積時(shí)間各異。一外植體選擇不同外植體的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)物，其最大次級(jí)代謝產(chǎn)物27二培養(yǎng)條件的影響1.內(nèi)在因素（菌種和營(yíng)養(yǎng)條件）接種和誘導(dǎo)，培養(yǎng)基2.外在因素（環(huán)境條件）溫度，攪拌，容器，光3.兩步法培養(yǎng)二培養(yǎng)條件的影響1.內(nèi)在因素（菌種和營(yíng)養(yǎng)條件）28影響因子外因內(nèi)因遺傳性狀生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)條件環(huán)境條件無(wú)機(jī)鹽有機(jī)物激素天然復(fù)合物滲透壓酸堿度濕度溫度光照影響因子外因內(nèi)因遺傳性狀生理狀態(tài)營(yíng)養(yǎng)條件環(huán)境條件無(wú)機(jī)鹽有機(jī)物29第六節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器一機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器二鼓泡塔生物反應(yīng)器三氣升式生物反應(yīng)器四轉(zhuǎn)鼓式生物反應(yīng)器五固定化細(xì)胞生物反應(yīng)器六各種生物反應(yīng)器性能比較第六節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器一機(jī)械攪拌式生物反應(yīng)器30第七節(jié)進(jìn)展與展望一誘導(dǎo)子在植物細(xì)胞工程研究中的應(yīng)用二前體飼喂三兩相法培養(yǎng)四轉(zhuǎn)基因技術(shù)在次級(jí)代謝產(chǎn)物中的應(yīng)用五植物生物轉(zhuǎn)化技術(shù)與生物制藥第七節(jié)進(jìn)展與展望一誘導(dǎo)子在植物細(xì)胞工程研究中的應(yīng)用31細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程制藥一概述二動(dòng)物細(xì)胞的形態(tài)和生理特性三生產(chǎn)動(dòng)物細(xì)胞的要求和獲得四動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基五動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法六動(dòng)物細(xì)胞大量培養(yǎng)的方法和操作方式七動(dòng)物細(xì)胞生物反應(yīng)器八動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)品的純化方法和質(zhì)量要求九動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)品的制造實(shí)例十動(dòng)物細(xì)胞制藥的前景與展望植物細(xì)胞工程制藥一基本概念二植物細(xì)胞工程發(fā)展簡(jiǎn)史三植物細(xì)胞的形態(tài)及生理特性四植物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)五影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物積累的因素六植物細(xì)胞培養(yǎng)的生物反應(yīng)器七進(jìn)展與展望細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程制藥植物細(xì)胞工程制藥32第五章植物細(xì)胞工程第五章植物細(xì)胞工程33第一節(jié)基本概念1.植物細(xì)胞的全能性2.植物組織和器官培養(yǎng)3.植物的分化4.脫分化5.再分化6.植物無(wú)菌培養(yǎng)7.細(xì)胞培養(yǎng)8.分生組織培養(yǎng)9.外植體10.無(wú)性繁殖系11.突變體12.繼代培養(yǎng)13.次級(jí)代謝作用和次級(jí)代謝產(chǎn)物第一節(jié)基本概念1.植物細(xì)胞的全能性34植物細(xì)胞全能性在離體培養(yǎng)下，植物的體細(xì)胞或性細(xì)胞被誘導(dǎo)產(chǎn)生器官分化和再生，成為具有與母體植株相同遺傳信息的植株的能力。植物細(xì)胞全能性的相對(duì)性不是所有基因型的所有細(xì)胞在任何條件下都具有良好的培養(yǎng)反應(yīng)；動(dòng)、植物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度存在明顯差異。細(xì)胞全能性并不意味著任何細(xì)胞均可以直接產(chǎn)生植物個(gè)體。植物細(xì)胞全能性在離體培養(yǎng)下，植物的體細(xì)胞或性細(xì)胞被誘導(dǎo)產(chǎn)生器35植物細(xì)胞分化基因的差異性表達(dá)，即為細(xì)胞分化；具體表現(xiàn)為內(nèi)部生理變化和外部形態(tài)變化。細(xì)胞分化使細(xì)胞功能趨于專門化，更有利于提高生理功能的效率。因此,分化是進(jìn)化的表現(xiàn),越高級(jí)的植物類群,分化水平越高,細(xì)胞分工越細(xì),機(jī)體代謝水平也越高。植物細(xì)胞分化基因的差異性表達(dá)，即為細(xì)胞分化；具體表現(xiàn)為內(nèi)部生36細(xì)胞脫分化（dedifferentiation)是指失去已分化細(xì)胞的典型特征，或消除了細(xì)胞分工，使之回復(fù)到分生組織狀態(tài)，或胚性細(xì)胞狀態(tài)。細(xì)胞脫分化階段 啟動(dòng)階段，表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)增生，并開(kāi)始向細(xì)胞中央伸出細(xì)胞質(zhì)絲，液泡蛋白體出現(xiàn)； 演變階段，此時(shí)細(xì)胞核開(kāi)始向中央移動(dòng)，質(zhì)體演變成原質(zhì)體； 脫分化終結(jié)期，細(xì)胞回復(fù)到分生細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞分裂即將開(kāi)始。一個(gè)植物細(xì)胞向分生狀態(tài)回復(fù)過(guò)程所能進(jìn)行的程度，取決于它在自然部位上所處的位置和生理狀態(tài)。細(xì)胞脫分化（dedifferentiation)37細(xì)胞再分化（redifferentiation)：脫分化后的分生細(xì)胞（愈傷組織）在特定的條件下，重新恢復(fù)細(xì)胞分化能力，并經(jīng)歷器官發(fā)生形成單極性的芽或根，或經(jīng)歷胚胎發(fā)生形成雙極性的胚狀體，進(jìn)一步發(fā)育成完整植物體的過(guò)程。極性：是指植物的器官、組織、甚至單個(gè)細(xì)胞在不同的軸向上存在的某種形態(tài)結(jié)構(gòu)以及生理生化上的梯度差異。

在很多情況下，細(xì)胞的不均等分裂是細(xì)胞極性建立的標(biāo)志。細(xì)胞再分化（redifferentiation)：38愈傷組織(callus)：脫分化后的細(xì)胞，往往經(jīng)過(guò)細(xì)胞分裂形成一團(tuán)無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能的松散的薄壁細(xì)胞團(tuán)。外植體：用于植物組織（細(xì)胞）培養(yǎng)的器官或組織。愈傷組織(callus)：脫分化后的細(xì)胞，往往經(jīng)過(guò)細(xì)胞分裂形39第二節(jié)植物細(xì)胞工程發(fā)展簡(jiǎn)史（了解）第二節(jié)植物細(xì)胞工程發(fā)展簡(jiǎn)史（了解）40第三節(jié)植物細(xì)胞的形態(tài)及生理特性一植物細(xì)胞的形態(tài)二植物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征三植物細(xì)胞的主要生理活性物質(zhì)及其他化學(xué)組分四植物培養(yǎng)細(xì)胞的生理特性第三節(jié)植物細(xì)胞的形態(tài)及生理特性一植物細(xì)胞的形態(tài)41一植物細(xì)胞的形態(tài)一植物細(xì)胞的形態(tài)42植物細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)

（質(zhì)膜）洋蔥表皮細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁細(xì)胞核液泡細(xì)胞質(zhì)二植物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征植物細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)（質(zhì)膜）洋蔥表皮細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁細(xì)胞43模式植物細(xì)胞構(gòu)造

細(xì)胞壁胞間層初生壁次生壁后含物

原生質(zhì)體貯藏物質(zhì)晶體細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞器細(xì)胞核模式植物細(xì)胞模式植物細(xì)胞是由細(xì)胞壁、原生質(zhì)體、后含物三大部分組成質(zhì)體線粒體液泡內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體高爾基體模式植物細(xì)胞構(gòu)造細(xì)胞壁胞間層后含物原生質(zhì)體貯藏物質(zhì)細(xì)胞膜模44動(dòng)植物細(xì)胞區(qū)別細(xì)胞壁、質(zhì)體、液泡三部分是植物細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)，動(dòng)物細(xì)胞沒(méi)有動(dòng)植物細(xì)胞區(qū)別細(xì)胞壁、質(zhì)體、液泡三部分是植物細(xì)胞特45三植物細(xì)胞的主要生理活性物質(zhì)及其他化學(xué)組分1生理活性物質(zhì)A酶B維生素C植物激素D抗生素和植物殺菌素2其他成分A生物堿B糖苷類C揮發(fā)油D有機(jī)酸三植物細(xì)胞的主要生理活性物質(zhì)及其他化學(xué)組分1生理活性物質(zhì)46四植物培養(yǎng)細(xì)胞的生理特性延遲期：細(xì)胞數(shù)量不變，核酸及蛋白合成較快加速期：最大生長(zhǎng)期，最大細(xì)胞濃度對(duì)數(shù)期：細(xì)胞數(shù)呈對(duì)數(shù)增加穩(wěn)定期：細(xì)胞高液泡化，非常脆弱四植物培養(yǎng)細(xì)胞的生理特性延遲期：細(xì)胞數(shù)量不變，核酸及蛋白合47植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基蔗糖植物激素葡萄糖動(dòng)物血清植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系快速繁殖、培育無(wú)病毒植株、制造人工種子獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞48第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)一植物材料的準(zhǔn)備二培養(yǎng)基及其組成三培養(yǎng)方法第四節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)一植物材料的準(zhǔn)備49最重要的是無(wú)菌。植物組織培養(yǎng)的外植體必須是無(wú)雜菌材料。植物組織培養(yǎng)時(shí)表面處理的常用滅菌劑（表5-5）不同器官的滅菌方式不同（表5-6）一植物材料的準(zhǔn)備最重要的是無(wú)菌。一植物材料的準(zhǔn)備501無(wú)機(jī)鹽：大量元素：N,S,P,K,Mg,Ca,Cl,Na微量元素：Fe,Mn,Zn,Cu,Co,Ni等2碳源：糖類，肌醇等直接通過(guò)光合作用吸收CO2二培養(yǎng)基及其組成1無(wú)機(jī)鹽：二培養(yǎng)基及其組成513.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)

（1）生長(zhǎng)素類:

(例）在離體條件下胡蘿卜體細(xì)胞胚的發(fā)育是一個(gè)包括兩個(gè)步驟的過(guò)程,每個(gè)步驟需要一種不同的培養(yǎng)基。愈傷組織的建立和增殖所需要的是一種含有生長(zhǎng)素的培養(yǎng)，通常所用的生長(zhǎng)素是2,4-D,濃度范圍0.5～1mg/L。在這樣一種培養(yǎng)上,愈傷組織的若干部位分化形成分生細(xì)胞團(tuán),稱作“胚性細(xì)胞團(tuán)”。在增殖培養(yǎng)基上反復(fù)繼代,胚性細(xì)胞團(tuán)的數(shù)量不斷增加,但并不出現(xiàn)成熟的胚。然而,如果把胚性細(xì)胞團(tuán)轉(zhuǎn)移到一種生長(zhǎng)素含量很低或完全沒(méi)有生長(zhǎng)素的培養(yǎng)上,它們就能發(fā)育為成熟的胚。

另：吲哚乙酸3.植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)

（1）生長(zhǎng)素類:

(例）在離體條件下胡52(2)細(xì)胞分裂素類:

既或促進(jìn)也可抑制體細(xì)胞胚的發(fā)生,這主要取決于植物的種類及其基因型。一般而言,細(xì)胞分裂素對(duì)于促進(jìn)體細(xì)胞胚的成熟有顯著作用,特別有利于子葉的發(fā)育。另外有研究表明,不同的外植體對(duì)于細(xì)胞分裂素的需要可能具有不同的專一性,如在胡蘿卜的研究中發(fā)現(xiàn),雖然激動(dòng)素對(duì)胚胎發(fā)生過(guò)程表現(xiàn)抑制作用,但濃度為0.1μM的玉米素卻能促進(jìn)這個(gè)過(guò)程,而6-BA對(duì)胡蘿卜則是促進(jìn)其愈傷組織的增殖,但不形成胚性愈傷組織。植物組織的生長(zhǎng)主要取決于生長(zhǎng)素和分裂素。(2)細(xì)胞分裂素類:

既或促進(jìn)也可抑制體細(xì)胞胚的發(fā)生,這主