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文檔簡介
-PAGE5-中藥制劑分析實驗實驗一中藥制劑的顯微鑒別一、實驗目的二、實驗原理通過用顯微鏡來觀察中藥制劑中保留有原藥材的組織、細胞或內(nèi)含物等顯微特征,從而鑒別制劑的處方組成。三、儀器與試藥1、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、酒精燈、乳缽、镲鏡紙、小鑷子、小刀。2、水合氯醛試液、甘油醋酸試液、稀甘油(AR。3、牛黃解毒片、蛇膽川貝散、銀翹解毒片、六味地黃丸(市售品四、實驗步驟(一)牛黃解毒片顯微鑒別操作方法:取本品片心,研成粉末,取少許,置載玻片上,滴加適量水合氯醛試液,透化后加稀甘油1滴,蓋上蓋玻片,用吸水紙吸干周圍透出液,置顯微鏡下觀察。1、草酸鈣簇晶大,直徑60~140μm;2、不規(guī)則碎塊金黃色或橙黃色,有光澤。(二)銀翹解毒片顯微鑒別操作方法:取本品粉末少許,置載玻片上用水合氯醛試液裝片,透化后加稀甘油1滴,蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察:154~68μm,圓粒狀皺紋。2、草酸鈣簇晶成片,直徑5~17μm,存在于薄壁細胞中。3、聯(lián)結乳管直徑14~25μm,含淡黃色顆粒狀物。(三)六味地黃丸顯微鑒別操作方法:取本品適量,采取適當方法解離后,取少許,觀察淀粉粒和不油,置顯微鏡下觀察。1、淀粉粒三角狀卵形或矩圓形,直徑24~40μm,臍點短縫狀或人字狀。2、不規(guī)則分枝狀團塊無色,遇水合氯醛試液溶化,菌絲無色,直徑4~6μm。3、薄壁組織灰棕色至黑棕色,細胞多皺縮,內(nèi)含棕色核狀物。4、草酸鈣簇晶存在于無色薄壁細胞中,有時數(shù)個排列成行。5、果皮表皮細胞橙黃色,表面觀類多角形,垂周壁略連珠狀增厚。6、薄壁細胞類圓形,有橢圓形紋孔,集成紋孔群。五、實驗結果六、思考題1.2.4注意事項。實驗二更年安片薄層色譜鑒別一、實驗目的掌握薄層熒光法的原理及操作。二、實驗內(nèi)容利用薄層色譜法對更年安片中五味子和制何首烏進行鑒別。三、基本原理更年安片由地黃、澤瀉、五味子、制何首烏等藥味組成,可利用薄層色譜UVGF薄層板上形成暗斑,用對254照藥材和對照品進行對照,可鑒別制劑中五味子;制何首烏中主要有效成分為蒽呈紅色,紫外光(254nm365nm)G何首烏。四、儀器設備及材料雙槽層析缸、玻璃板、三用紫外線分析儀、分析天平、硅膠G、硅膠GF、五味子對照藥材、何首烏對照藥材、對照品、更年安片等五、 操作步驟(一)五味子鑒別薄層板制備0.3GF254
254薄層板(實驗前自制。供試品溶液制備2030mL,901mL作為供試品溶液。對照溶液制備0.5g,同上法制成對照藥材溶液。取1mL1mg薄層層析:將薄層板的邊緣修飾整齊,作好標記。用毛細管吸取上述三種溶液各4μL,分別點于同一硅膠GF薄層板上,以石油醚(30~60℃)25415~3010cm,取出,晾干,置紫外光燈(二)何首烏鑒別薄層板制備0.5G(實驗前自制。供試品溶液制備:取更年安片,除去糖衣,研碎,加甲醇100mL110mL3020mL21mL對照溶液的制備1.5g,同上法制成對照藥材溶液。1mL1mg作為對照品溶液。薄層層析:將薄層板邊緣修飾整齊,作好標記。用毛細管吸取上述三種溶液各2μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(15﹕2﹕1)15~3010cm,取出,晾干,置紫外光燈品色譜相應的位置上,顯相同的橙色熒光斑點;置氨氣中熏后,可見光下檢視,斑點變?yōu)榧t色。六、 實驗結七、思考題硅膠GF、硅膠G、硅膠H有何不同?實驗中如何選擇和使用?254實驗三Ag-DDC法定冰片中砷鹽限量一、目的要求1、掌握砷鹽的測定方法(Ag-DDC。2、了解中藥制劑含砷量的測定步驟及操作。二、基本原理本法為中國藥典規(guī)定砷鹽檢查第一法。鋅和酸作用所產(chǎn)生的初生態(tài)氫與供試品中微量砷鹽化合物反應生成揮發(fā)性砷化產(chǎn)生的砷斑比較,以判定供試品的砷鹽限量。AsO3-+3Zn+9H+→AsH↑+3Zn2++3HO3 3 2產(chǎn)生的砷化氫與溴化汞試紙作用。AsH+2HgBr→2HBr+AsH(HgBr) (黃色)3 2 2AsH+3HgBr→3HBr+As(HgBr) (棕色)3 2 3AsO3-Zn4KISnC1AsO3AsO3,KIISnC12 4 3 2 2來還原,使反應液中維持有KI的還原劑存在。AsO3-+2I-+2H+→AsO3-+I+HO AsO3-+Sn2++2H+→AsO3-+Sn4++HO4 3 2 2 4 3 2I+Sn2+→2I-+Sn4+2應不斷進行。4I-+Zn2+→[ZnI]2-4HS2HS。2HS+Pb(CHCOO)→PbS↓+2CHCOOH2 3 2 31、分光光度計。2、古蔡法測砷裝置(見附圖1、分光光度計。2、古蔡法測砷裝置(見附圖。3、二乙基二硫代氨基甲酸銀(Ag-DDC)試-PAGE8-液、標準砷試液(1μgAs/ml4、冰片(市售品。操作步驟測試前,先于導氣管C60m(80mmAg-DDC5ml。15ml,置A5ml2ml,5ml5102g,立即將導氣管CADA25~40℃45D2、供試品的制備取冰片1g,加氫氧化鈣0.5g2ml,5ml28ml,照5ml”起,依法操作。1A5ml,自“加鹽5ml2ml”起,依法操作。將標準液和樣品液移至1cm510nmAg-DDC四、注意事項1、標準砷斑的制備應與樣品檢查法平行操作。2、制備標準砷斑應與供試品檢查同時進行。因砷斑不穩(wěn)定,反應中應保持干燥及避光,并立即比較。3、浸入乙醇制溴化汞試液的濾紙的質量,對生成砷斑的色澤有影響,因此必須選用質量較好,組織疏松的中速定量濾紙,溴化汞試紙一般宜新鮮制備。五、思考題1、導氣管中加醋酸鉛棉花的目的是什么?2、根據(jù)以上測定結果,附子理中丸樣品砷鹽限量是多少?3.砷鹽檢查第一法和第二法的異同何在?各自的關鍵環(huán)節(jié)是什么?實驗四黃連上清丸重金屬的檢查一、目的要求1、掌握中成藥熾灼的基本方法和操作。2、熟悉中成藥消化后進行重金屬檢查的方法與原理。二、基本原理中藥制劑常含有大量有機化合物,在進行重金屬檢查前必須先進行有機破500~600℃0.5mlpH3.5,依法檢查,重金屬檢查的化學反應原理同實驗六。三、儀器與試藥1、電爐、馬福爐、坩堝、恒溫水浴鍋。2、25ml納氏比色管及比色管架。3、萬分之一分析天平。4、量瓶、刻度吸管、燒杯、量筒、蒸發(fā)皿等。5、其他試劑為AR級。6、黃連上清丸(市售品四、操作步驟51.0g,精密稱定重量,置已熾灼至恒重的坩堝中,精密稱定,緩緩熾灼至完全炭化(或在電爐上緩緩加熱至冒白煙,但0.5~1ml500~600℃熾灼使完全灰化,移置于干燥器內(nèi),放冷至室溫,精500~600℃0.5ml2ml,置水浴上蒸干后,加水15ml,滴加氨試液至對(pH3.5)2ml,25ml;加醋酸鹽緩沖液15ml,微熱溶解后,移至納氏比色管中,加2ml,2五、注意事項:1、對馬福爐的使用要嚴格按操作規(guī)程操作。20.5ml六、思考題1、根據(jù)試驗計算對黃連上清丸的重金屬含量限度。2、配制對照品時,為什么要取配制供試品溶液的試劑?3、本次實驗應注意哪些安全事項?實驗五 中藥制劑中烏頭堿限量檢查一、目的要求1、掌握烏頭堿在中藥制劑中的限量檢查方法。2、熟悉用薄層色譜法進行中藥制劑的限量檢查。二、儀器與試藥1、薄層鋪板儀、分析天平( 1/10萬、水浴鍋、振蕩器。2、乙醚、無水乙醇、苯、醋酸乙酯、二乙胺、羧甲基纖維素鈉 硅膠G(薄層層析用)、其他試劑均為分析純。3、氨試液,稀碘化鉍鉀試液。4、烏頭堿對照品(中國藥品生物制品檢定所) 。5、附子理中丸(市售品)。三、操作步驟取本品水蜜丸25g或大蜜丸36g,切碎,置表面皿中,加氨試液 4ml拌勻,放置2小時,加乙醚60ml,振搖1小時,放置24小時,濾過,濾液蒸干,殘渣加無水乙醇 1ml使溶解,作為供試品溶液。另精密稱取烏頭堿對照品,加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作為對照品溶液精密吸取供試品溶液 12μl、對照品溶液5μl,照薄層色譜法試驗,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠 G薄層板上,以苯-醋酸乙酯-二乙胺(14:4:1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中,在與對照品色譜相應位置上出現(xiàn)的斑點應小于對照品的斑點或不出現(xiàn)斑點。四、思考題1、除薄層色譜法外,還可用什么方法進行酯型生物堿的限量檢查?2、烏頭堿在本品中的限量是多少?--PAGE9-實驗六 甲苯法測定中藥制劑中水分含量中藥制劑水分測定的常用方法有烘干法和甲苯法,烘干法適用于不含或少含揮發(fā)性成分的藥品,甲苯法用于含揮發(fā)性成分的藥品。香砂養(yǎng)胃丸是由木香、砂仁、白術、陳皮、香附、廣藿香、茯苓、半夏等十二味中藥制成的水丸,其中有多味中藥中含揮發(fā)性成分,應選用甲苯法測定該制劑中水分的含量。味中藥制成的水丸,其中有多味中藥中含揮發(fā)性成分,應選用甲苯法測定該制劑中水分的含量。三、儀器與試藥1、甲苯法水分測定裝備(見附圖)(包括500ml短頸圓底燒瓶、水分測定管、直形冷凝管、外管長2、電熱套、分析天平。40cm3、甲苯、亞甲藍(AR。5、香砂養(yǎng)胃丸(市售品)。甲苯法水分測定裝置四、操作步驟將香砂養(yǎng)胃丸研碎,取約 25(約相當于含水量1~4ml,精密稱定置A瓶中,加甲苯約200ml,必要時加入玻璃珠數(shù)粒,將儀器各部分連接,自冷凝管頂端加入甲苯,至充滿 B管的狹細部分。將A瓶置電熱中或用其他適宜方法緩緩加熱,待甲苯開始沸騰時,調節(jié)溫度,使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出,即測定管刻度部分的水量不再增加時,將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_ 洗,再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜的方法將管壁上附著的甲苯推下,繼續(xù)蒸餾 5分鐘,放冷至定溫,拆卸裝置如有水黏附在B管的管壁上,可用蘸甲苯的銅絲推下,放置,使水分與甲苯完全分離(可加亞甲藍粉末少量,使水染成藍色,以便分離觀察) 檢讀水量,并計算供試品中的含水量(%) 。五、注意事項1、用化學純甲苯直接測定,必要時甲苯可先加水少量,充分振搖后,將水層分離棄去,經(jīng)蒸餾后使用。2、樣品應先粉碎成直徑不超過 3mm的顆粒。-六、思考題1、實驗中所用儀器、器皿是否要烘干?為什么?2、為什么說本法適用于含揮發(fā)性成 分的中藥制劑中水分的測定?輸和貯存帶來直接影響,對片劑的崩解,溶出度都有直接影響。用于測定片劑硬度和脆碎度的儀器有:孟ft都硬度計、Roche脆碎儀等。溶出度度。實驗七 可見分光光度法測定大ft楂丸中總黃酮的含一、目的要求1、掌握用分光光度法測定中藥制劑中總黃酮含量。2、掌握可見分光光度計的使用方法。二、基本原理大ft楂丸由ft楂、神曲和麥芽組成,主要功能為開胃消食,其中ft楂主要成分為有機酸、黃酮類及多種維生素。O黃酮類化合物具有OHO 、
OHOH、 OH 結構,可與鋁鹽、鉛鹽、OH鎂鹽等金屬鹽類試劑反應,生成有色配合物,可用可見分光光度法測定其含量。本實驗利用黃酮類化合物在亞硝酸鈉的堿性溶液中,與 產(chǎn)生高靈度的橙紅色配合物(λmax=510nm),從而用可見分光光度法(比色法)測定大ft楂丸中總黃酮的含量。三、儀器與試藥1、 可見分光光度計、分析天平、索氏提取器。2、 乙醇(A.R)、5%亞硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液、1mol/l氫氧鈉溶液。3、 槲皮素(中國藥品生物制品檢定所)。4、 大ft楂丸(市售品)四、操作步驟1、標準液的配制:精密稱取槲皮素對照品20mg100ml9550ml50%乙醇稀釋至刻度,即得0.2mg/ml品溶液。2、標準曲線的制備:精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、ml,分別置于10ml容量瓶中,各加50%乙醇溶液使成5ml,精密加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml6100.3ml61%氫氧化鈉溶液5015510nmA-C(或計算其回歸方程)。3、樣品液的制備:精密稱取120℃干燥2ft楂丸6.5g,置索95125ml1.5250ml瓶中,補加蒸餾水至刻度,搖勻即得。4并由標準曲線或回歸方程計算樣品中總黃酮的含量。五、注意事項1、實驗證明,提取時間為1.5小時,基本能提盡樣品中黃酮。2、實驗證明,樣品顯色后,在30分鐘內(nèi)測定總黃酮含量,無明顯改變,超過30分鐘,含量有所改變。六、思考題1、 比色法操作的注意事項是什么?2、 總黃酮與單體黃酮的測定方法有何不同?實驗八牛黃解毒片中黃芩苷的含量測定一、目的要求掌握中藥制劑中黃芩苷的含量測定方法。二、基本原理利用高效液相色譜法分離牛黃解毒片中黃芩苷,在λ
315nm處進行檢測。man為了減小實驗條件波動對分析結果的影響,采用隨行外標一點法定量。三、儀器與試藥高效液相色譜儀、超聲波提取器、分析天平。甲醇(色譜純、磷酸(AR、雙蒸水、乙醇(AR。黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所。牛黃解毒片(市售品四、操作步驟對照溶液制備精密稱取在60℃減壓干燥4小時的黃芩苷對照品適量加甲醇 制成1mL中含的溶液,即得。供試品溶液制備20(包衣片除去包衣,精密稱定,研細,70%30mL,2050mL70%乙醇分次洗滌容器和殘渣,溶液濾入70%乙醇至刻度,搖勻,即得。測定法色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑甲醇-水-磷為流動 相;檢測波長為315nm。定,即得。五、思考題HPLC牛黃解毒片中黃芩苷的含量測定還可用哪些方法?實驗九 益母草口服液中水蘇堿的含量測定一、目的要求1、掌握雷氏鹽比色法測定中藥制劑中生物堿的含量。2、熟悉標準曲線法在中藥制劑定量分析中的應用。二、基本原理益母草中含有益母草堿、水蘇堿等生物堿,可與雷氏鹽(硫氰酸鉻銨)生成沉淀,雷氏鹽在 520nm處有最大吸收,在益母草口服液中加入過量的雷氏鹽,將生物堿沉淀,濾過,取濾液測定剩余雷氏鹽的吸收度,計算與空白溶液的吸收度差值,間接計算生物堿的含量。三、儀器與試藥1、分光光度計、分析天平、水浴鍋。22%硫氰酸鉻銨溶液、0.1mol/L鹽酸、活性炭。3、水蘇堿對照品(中國藥品生物制品檢定所) 。4、益母草口服液(市售品)。四、操作步驟1、對照品溶液的制備精密稱取在10525mg25ml瓶中,加0.1mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得(每1ml含鹽酸水蘇堿1mg。2、標準曲線的制備精密量取對照品溶液2.0ml4.0ml6.0ml8.0ml25ml燒0.1mol/L鹽酸溶液使成10ml1404~5)25ml量瓶中,用0.1mol/L鹽酸溶液10ml分次洗滌燒杯和濾器,洗液并入同一量瓶中;另取0.1mol/L鹽酸溶液20ml,置另一25ml量瓶中,作為空白溶液;各精密加入新制的 2%硫氰酸鉻銨溶液 3ml,搖勻,用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,置冰水浴中放置 1小時,用干燥濾紙濾過,取續(xù)濾液,以0.1mol/L鹽酸溶液為空白,于分光光度計上520nm波長分別測定吸收度,用空白試劑的吸收度分別減去對照品的吸收度,以吸收度的差值為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。3、測定法精密量取本品10ml,置25ml量瓶中,用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,用干燥濾紙濾過,精密量取續(xù)濾液 10ml,置25ml燒杯中照標準曲線的制備項下的方法,自“加活性炭 0.5g”起,依法測定吸收度,用空白溶液的吸收度減去供試品的吸收度,從標準曲線上讀出供試品溶液中相當于鹽酸水蘇堿的含量,計算,即得。五、思考題1、本法測定的生物堿含量是否為水蘇堿含量?2、是否可用雷氏鹽生物堿沉淀物測定含量,如何操作?實驗十 高效液相色譜法測定三黃片中大黃素和大黃酚含一. 目的要求1、掌握高效液相色譜法原理及高效液相色譜儀的使用。2、掌握高效液相色譜儀在中藥制劑定量分析中的應用二. 基本原理2000(一部)浸膏組成,大黃為君藥,其主要有效成分為大黃素和大黃酚等蒽醌類成分,標準中利用高效液相色譜法測定了該制劑中大黃素和大黃酚的含量。三. 儀器與試藥高效液相色譜儀(紫外檢測器)微量注射器(10μL)分析天平水浴鍋、分液漏斗、蒸發(fā)皿甲醇(色譜純)重蒸餾水(7)C色譜柱18大黃素、大黃酚對照品(中國藥品生物制品檢定所)三黃片(市售品)乙醇、氯仿、醋酸乙酯(A.R)微孔濾膜(0.45μm,有機相四. 操作步驟色譜條件--0.1%為流動相;18檢測波長為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計算不低于2000。對照品溶液的制備:分別精密稱取大黃素和大黃酚對照品適量,加無水乙醇-醋酸乙酯(2﹕1)1mL0.01mg0.025mg合溶液,即得。供試品溶液的制備:取三黃片20(過三號篩(1110mL,30%乙醇-鹽酸(10﹕1)15mL,1415mL,-醋酸乙酯(2﹕1)25mL孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,即得。測定法:分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL,儀,測定,即得。五. 思考題影響理論板數(shù)的因素有哪些?實驗中色譜柱一定時將如何提高理論板數(shù)?實驗十一清開靈注射液中總膽酸的含量測定一、目的要求1、掌握注射劑的含量測定方法。2、熟悉動物藥成分分析方法二、基本原理清開靈注射液主要含有牛黃(用牛膽液、豬去氧膽酸代替母、黃芩、金銀花、梔子等組成。中藥注射劑系指中藥材經(jīng)提取,精制而成的可供注射的無菌溶液(或供臨用配成溶液的無菌粉末,大多數(shù)成分復雜,分析難度較大,對于成分已知,結排除干擾。按投料量每1ml注射液含總膽酸為7mg。膽酸和去氧膽酸與香草醛在硫酸520nm三、儀器與試藥紫外—可見分光光度計、離心機、1ml冰醋酸、濃硫酸、濃鹽酸、香草醛、乙醇(AR。3.8%(W/V)香草醛試液。膽酸與豬去氧膽酸對照品(中國藥品生物制品檢定所。清開靈注射液(市售品四、操作步驟對照品溶液的配制精密稱取膽酸對照品32.5mg,豬去氧膽酸對照品37.5mg,用冰醋酸定容成100ml(0.7mg/ml)的溶液,搖勻,備用。供試品溶液的制備6mol/LHCl10.2mol/LHCl10210ml工作曲線的制備0.1,0.2,0.3,0.4,0.5ml分別置于具塞刻度試管(50ml)0.5ml,0.5ml8%0.5ml,80%6ml,搖70℃101cm520nm。樣品的測定:取樣品溶液0.3ml,于刻度試管(或50ml)中,用冰醋酸稀釋到0.5ml程或用內(nèi)插法即可求得C。樣根據(jù)總膽酸含量(%)=C五、注意事項
×10/標示量×100%計算即得。樣的含量,操作要按規(guī)定仔細操作,以減小誤差。80%六、思考題中藥注射劑需要檢查哪些項目?本實驗中應用酸較多,分別說明它們的作用?實驗十二養(yǎng)胃舒膠囊質量標準實驗設計方案1、處方人參150g 麥冬150g 五味子100g 黃
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