《銀耳多糖的檢測》課件

銀耳多糖的檢驗

三組銀耳多糖的檢驗1原理薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在移動相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。薄層層析可根據(jù)作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑）、薄層分配層析（纖維素）、薄層離子交換層析（離子交換劑）、薄層凝膠層析（分子篩凝膠）等。一般實驗中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。吸附是表面的一個重要性質(zhì)。任何兩個相都可以形成表面，吸附就是其中一個相的物質(zhì)或溶解于其中的溶質(zhì)在此表面上的密集現(xiàn)象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發(fā)生吸附現(xiàn)象。物質(zhì)分子之所以能在固體表面停留，這是因為固體表面的分子（離子或原子）和固體內(nèi)部分子所受的吸引力不相等。在固體內(nèi)部，分子之間相互作用的力是對稱的，其力場互相抵消。原理薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它2而處于固體表面的分子所受的力是不對稱的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)部分子的作用力大，而表面層所受的作用力小，因而氣體或溶質(zhì)分子在運動中遇到固體表面時受到這種剩余力的影響，就會被吸引而停留下來。吸附過程是可逆的，被吸附物在一定條件下可以解吸出來。在單位時間內(nèi)被吸附于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時間內(nèi)離開此表面的分子之間可以建立動態(tài)平衡，稱為吸附平衡。吸附層析過程就是不斷地產(chǎn)生平衡與不平衡、吸附與解吸的動態(tài)平衡過程。例如用硅膠和氧化鋁作支持劑，其主要原理是吸附力與分配系數(shù)的不同，使混合物得以分離。當(dāng)溶劑沿著吸附劑移動時，帶著樣品中的各組分一起移動，同時發(fā)生連續(xù)吸附與解吸作用以及反復(fù)分配作用。由于各組分在溶劑中的溶解度不同，以及吸附劑對它們的吸附能力的差異，最終將混合物分離成一系列斑點。如作為標(biāo)準(zhǔn)的化合物在層析薄板上一起展開，則可以根據(jù)這些已知化合物的Rf值（后面介紹Rf值）對各斑點的組分進行鑒定，同時也可以進一步采用某些方法加以定量。而處于固體表面的分子所受的力是不對稱的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)3名稱規(guī)格數(shù)量備注容量瓶1000ml

1燒杯250ml2移液管5ml1玻璃棒-2膠頭滴管-1層析缸2毛細(xì)管1*100一盒烘箱--層析板--吹風(fēng)機--實訓(xùn)儀器名稱規(guī)格數(shù)量備注容量瓶1000ml4名稱規(guī)格數(shù)量備注正丙醇-1濃氨水-1苯甲胺--乙醇--實訓(xùn)藥品名稱規(guī)格數(shù)量備注正丙醇-1濃氨水-1苯甲胺--乙醇--實訓(xùn)藥5檢測1.展開劑為正丙醇：濃氨水：水（40:60:5），配制放過夜。2.層析濾紙烘箱中烘60min。3.將銀耳多糖粗品溶于水中，濃度約2%，1%，0.5%。4.使用毛細(xì)管點樣。5.展開劑倒入層析缸中，展層。6.吹干，使用0.5%甲苯胺乙醇溶液染色，95%乙醇漂洗。檢測6《銀耳多糖的檢測》課件7一、薄層板的制作和活化二、點樣三、展開四、顯色一、薄層板的制作和活化8結(jié)果層析板上沒有顯現(xiàn)的應(yīng)有的色柱，只出現(xiàn)如圖所示的不清晰的痕跡。結(jié)果層析板上沒有顯現(xiàn)的應(yīng)有的色柱，只出現(xiàn)如圖所示的不清晰的痕9結(jié)果分析1、可能由于提取的多糖太少。2、顯色劑配制出現(xiàn)問題。結(jié)果分析1、可能由于提取的多糖太少。10實訓(xùn)報告單實訓(xùn)報告單11點樣注意事項：

1、樣品最好用具有揮發(fā)性的有機溶劑溶解，不應(yīng)用水溶液，因為水分子與吸附劑的相互作用力較弱，當(dāng)水分子占據(jù)了吸附劑表面的活性位置時，會使吸附劑的活性降低，而使斑點擴散。2、點樣量不宜太多，否則會降低遷移率，一般為幾到幾十微克。3、原點直徑要控制在2mm以內(nèi)。為此須分次點樣，邊點樣邊用冷、熱風(fēng)交替吹干。4、薄層板在空氣中不能放置太久，否則會因吸潮而降低活性。點樣注意事項：12

薄層層析分離中的薄層板制作是指將經(jīng)離心處理后的固定相支持劑均勻地涂布在玻璃板上形成薄層。玻璃板要求表面平滑、清潔，大小按需要選定。一、干板制作：

干板是將不加粘合劑的支持劑干粉均勻地涂布在玻璃板上制成的薄層板。干板制作簡單，展開快，但極易吹散。制作方法如下：1、選直徑約為50mm的玻璃管一根，根據(jù)薄層的厚度（一般為0.4～1mm在其兩端繞膠布數(shù)圈。

2、將支持劑干粉倒在玻板一端，固定玻璃板一端以防玻璃管推進時移動。3、把玻璃管壓在玻璃板上，將支持劑干粉由玻璃板一端推向另一端，即形成薄層。薄層層析分離中的薄層板制作

薄層層析分離中的薄層板制作是指將經(jīng)離心處理后13二、濕板制作：

濕板是將支持劑加粘合劑和水或其它液體后均勻地涂布在玻璃板上，經(jīng)烘干而成的薄層板。下面介紹三種制板方法：

1、玻璃棒涂布：

將支持劑用水或適當(dāng)溶劑調(diào)成膠漿，倒在玻璃板一端，然后按干板的制作方法，用玻璃棒將支持劑由玻璃板一端推向另一端，即形成薄層。

2、玻璃片涂布：

將支持劑用水或適當(dāng)溶劑調(diào)成膠漿，倒在玻璃板一端，然后按干板的制作方法，用玻璃片將支持劑由玻璃板一端推向另一端，即形成薄層。

3、傾斜涂布：

將支持劑膠漿倒在玻璃片上，然后將玻璃板傾斜，使膠漿均勻涂布在玻璃板上。

用上述任何一種方法將支持劑均勻涂布在玻璃板上后靜置片刻，待薄層表面無水漬后置烘箱中，溫度升至100℃后持續(xù)1小時，關(guān)閉電源，待溫度降至接近室溫時，取出薄層板放入干燥器，此步驟稱為活化。二、濕板制作：14

謝謝觀賞三組謝謝觀賞三組15銀耳多糖的檢驗

三組銀耳多糖的檢驗16原理薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在移動相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。薄層層析可根據(jù)作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑）、薄層分配層析（纖維素）、薄層離子交換層析（離子交換劑）、薄層凝膠層析（分子篩凝膠）等。一般實驗中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。吸附是表面的一個重要性質(zhì)。任何兩個相都可以形成表面，吸附就是其中一個相的物質(zhì)或溶解于其中的溶質(zhì)在此表面上的密集現(xiàn)象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發(fā)生吸附現(xiàn)象。物質(zhì)分子之所以能在固體表面停留，這是因為固體表面的分子（離子或原子）和固體內(nèi)部分子所受的吸引力不相等。在固體內(nèi)部，分子之間相互作用的力是對稱的，其力場互相抵消。原理薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它17而處于固體表面的分子所受的力是不對稱的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)部分子的作用力大，而表面層所受的作用力小，因而氣體或溶質(zhì)分子在運動中遇到固體表面時受到這種剩余力的影響，就會被吸引而停留下來。吸附過程是可逆的，被吸附物在一定條件下可以解吸出來。在單位時間內(nèi)被吸附于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時間內(nèi)離開此表面的分子之間可以建立動態(tài)平衡，稱為吸附平衡。吸附層析過程就是不斷地產(chǎn)生平衡與不平衡、吸附與解吸的動態(tài)平衡過程。例如用硅膠和氧化鋁作支持劑，其主要原理是吸附力與分配系數(shù)的不同，使混合物得以分離。當(dāng)溶劑沿著吸附劑移動時，帶著樣品中的各組分一起移動，同時發(fā)生連續(xù)吸附與解吸作用以及反復(fù)分配作用。由于各組分在溶劑中的溶解度不同，以及吸附劑對它們的吸附能力的差異，最終將混合物分離成一系列斑點。如作為標(biāo)準(zhǔn)的化合物在層析薄板上一起展開，則可以根據(jù)這些已知化合物的Rf值（后面介紹Rf值）對各斑點的組分進行鑒定，同時也可以進一步采用某些方法加以定量。而處于固體表面的分子所受的力是不對稱的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)18名稱規(guī)格數(shù)量備注容量瓶1000ml

1燒杯250ml2移液管5ml1玻璃棒-2膠頭滴管-1層析缸2毛細(xì)管1*100一盒烘箱--層析板--吹風(fēng)機--實訓(xùn)儀器名稱規(guī)格數(shù)量備注容量瓶1000ml19名稱規(guī)格數(shù)量備注正丙醇-1濃氨水-1苯甲胺--乙醇--實訓(xùn)藥品名稱規(guī)格數(shù)量備注正丙醇-1濃氨水-1苯甲胺--乙醇--實訓(xùn)藥20檢測1.展開劑為正丙醇：濃氨水：水（40:60:5），配制放過夜。2.層析濾紙烘箱中烘60min。3.將銀耳多糖粗品溶于水中，濃度約2%，1%，0.5%。4.使用毛細(xì)管點樣。5.展開劑倒入層析缸中，展層。6.吹干，使用0.5%甲苯胺乙醇溶液染色，95%乙醇漂洗。檢測21《銀耳多糖的檢測》課件22一、薄層板的制作和活化二、點樣三、展開四、顯色一、薄層板的制作和活化23結(jié)果層析板上沒有顯現(xiàn)的應(yīng)有的色柱，只出現(xiàn)如圖所示的不清晰的痕跡。結(jié)果層析板上沒有顯現(xiàn)的應(yīng)有的色柱，只出現(xiàn)如圖所示的不清晰的痕24結(jié)果分析1、可能由于提取的多糖太少。2、顯色劑配制出現(xiàn)問題。結(jié)果分析1、可能由于提取的多糖太少。25實訓(xùn)報告單實訓(xùn)報告單26點樣注意事項：

1、樣品最好用具有揮發(fā)性的有機溶劑溶解，不應(yīng)用水溶液，因為水分子與吸附劑的相互作用力較弱，當(dāng)水分子占據(jù)了吸附劑表面的活性位置時，會使吸附劑的活性降低，而使斑點擴散。2、點樣量不宜太多，否則會降低遷移率，一般為幾到幾十微克。3、原點直徑要控制在2mm以內(nèi)。為此須分次點樣，邊點樣邊用冷、熱風(fēng)交替吹干。4、薄層板在空氣中不能放置太久，否則會因吸潮而降低活性。點樣注意事項：27

薄層層析分離中的薄層板制作是指將經(jīng)離心處理后的固定相支持劑均勻地涂布在玻璃板上形成薄層。玻璃板要求表面平滑、清潔，大小按需要選定。一、干板制作：

干板是將不加粘合劑的支持劑干粉均勻地涂布在玻璃板上制成的薄層板。干板制作簡單，展開快，但極易吹散。制作方法如下：1、選直徑約為50mm的玻璃管一根，根據(jù)薄層的厚度（一般為0.4～1mm在其兩端繞膠布數(shù)圈。

2、將支持劑干粉倒在玻板一端，固定玻璃板一端以防玻璃管推進時移動。3、把玻璃管壓在玻璃板上，將支持劑干粉由玻璃板一端推向另一端，即形成薄層。薄層層析分離中的薄層板制作

薄層層析分離中的薄層板制作是指將經(jīng)離心處理后28二、濕板制作：

濕板是將支持劑加粘合劑和水或其它液體后均勻地涂布在玻璃板上，經(jīng)烘干而成的薄層板。下面介紹三種制板方法：

1、玻璃棒涂布：

將支持劑用水或適當(dāng)溶劑調(diào)成膠漿，倒在玻璃板一端，然后按干板的制作方法，用玻璃棒將支持劑由玻璃板一端推向另一端，即形成薄層。

2、玻璃片涂布