白細(xì)胞介素-21受體mRNA的表達(dá)與檢測(cè)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床應(yīng)用探討-論著

白細(xì)胞介素-21受體mRNA的表達(dá)與檢測(cè)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床應(yīng)用探討【摘要】目的：探討白細(xì)胞介素-21受體mRNA的表達(dá)與檢測(cè)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床應(yīng)用。方法：總結(jié)80例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者相關(guān)檢驗(yàn)資料，并以30例健康體檢者資料作為對(duì)照，分別采用ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)后通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較組間差異性。結(jié)果：觀察組患者IL-21含量水平均值為（510.4±66.2）pg/mL，明顯高于健康對(duì)照組數(shù)據(jù)結(jié)果（t=13.80，P<0.05）；三級(jí)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)IL-21水平并不相同，其中II級(jí)患者與I級(jí)患者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（z統(tǒng)計(jì)量為1.33，P>0.05），II級(jí)與III級(jí)及以上患者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（z統(tǒng)計(jì)量為8.53，P<0.05）。結(jié)論：IL-21物質(zhì)參與了類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程，故該物質(zhì)的水平可用于疾病的檢測(cè)，具有廣闊的應(yīng)用前景。【關(guān)鍵詞】IL-21，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，ELISAClinicalexpressionanddetectionofIL-21receptoronRA[Abstract]Objective:ToexploretheclinicalapplicationofIL-21receptormRNAexpressionanddetectionofRA.Methods:80casesofRArelatedtestdata,and30healthypersonsascontrolweredetecteddata,usetheELISAmethodbystatisticalmethodstocomparethedifferencebetweengroups.Results:PatientswithIL-21levelwas(510.4±66.2)pg/mL,significantlyhigherthanthatofthehealthycontrolgroup(t=13.80,P<0.05)data;threelevelinpatientswithRAIL-21levelsarenotthesame,therewasnosignificantdifferenceofIIlevelinpatientswithIpatients(Z.1.33,P>0.05),withstatisticalsignificanceIIlevelandIIIlevelandabovedifferencesofpatients(Z.8.53,P<0.05).Conclusion:substanceIL-21wasinvolvedinthepathogenesisofRA,sothelevelofmaterialcanbeusedfordiseasedetection,andhasbroadapplicationprospects.[Keywords]IL-21,RA,ELISA類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種以關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯穆匀碜陨砻庖咝约膊?，具體的發(fā)病機(jī)制還沒有統(tǒng)一的定論（可能與遺傳、感染和體內(nèi)激素的分泌有關(guān)），大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為[1]：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病與患者體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)功能紊亂有密切的聯(lián)系，尤其是細(xì)胞免疫體系的異常在病情的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用，相關(guān)文獻(xiàn)研究[2]指出：白細(xì)胞介素-21（IL-21）是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者發(fā)病過程中多種細(xì)胞因子表達(dá)中最關(guān)鍵的一個(gè)，為了探討IL-21受體mRNA的表達(dá)與檢測(cè)對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的臨床應(yīng)用，筆者回顧性總結(jié)相關(guān)資料110例，現(xiàn)將總結(jié)結(jié)果報(bào)道如下：1資料與方法1.1一般資料對(duì)2012年3月-2014年4月期間在我院進(jìn)行檢驗(yàn)和治療的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者進(jìn)行隨機(jī)抽樣，根據(jù)研究對(duì)象的質(zhì)量控制方法抽取80例（設(shè)為病例觀察組），其中包括男性45例和女性35例，年齡范圍為38歲-65歲，平均年齡為（47.3±10.7）歲，另外根據(jù)一般資料相近原則選擇30例健康志愿者相關(guān)體檢資料作為對(duì)照組，其中包括男性17例和女性13例，年齡范圍為40歲-70歲，平均年齡為（48.2±11.4）歲，兩組受檢者一般資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明具有可比性。1.2質(zhì)量控制方法1.2.1入選標(biāo)準(zhǔn)所有患者臨床診斷結(jié)果符合美國(guó)類風(fēng)濕病學(xué)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，符合以下四條以上者即可確診：一是晨僵至少1小時(shí)（≥6周），二是3個(gè)或3個(gè)以上的關(guān)節(jié)受累（≥6周），三是手關(guān)節(jié)（腕、MCP或PIP關(guān)節(jié)）受累（≥6周），四是對(duì)稱性關(guān)節(jié)炎（≥6周），五是有類風(fēng)濕皮下結(jié)節(jié)，六是X線片改變。七是血清類風(fēng)濕因子陽(yáng)性（滴度>1：32）；根據(jù)患者關(guān)節(jié)功能的分級(jí)情況分為I級(jí)（22例）、II級(jí)（47例）和III級(jí)及以上（11例）三個(gè)等級(jí)；患者均知情并且在知情同意書上簽字。1.2.2排除標(biāo)準(zhǔn)排除同時(shí)合并其他嚴(yán)重的內(nèi)科疾病患者，排除精神病患者及其他原因不能配合調(diào)研工作者，排除合并出血傾向類疾病者或者因過敏等情況不能進(jìn)行體檢者。1.3檢驗(yàn)方法首先是采集樣本：所有受檢者空腹，在上午10點(diǎn)鐘左右采集靜脈血，離心機(jī)離心后將上清液置于PC管中保存（溫度為-20℃），采集到的樣本作為同一批次通過免疫競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)：試劑盒購(gòu)自美國(guó)ADL，由同一操作人員嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，檢測(cè)儀器為BIO-RAD680型酶標(biāo)儀，在450nm處讀取光密度后計(jì)算IL-21濃度水平。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法選擇spss20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行分析，對(duì)完全獨(dú)立樣本IL-21濃度水平（由專業(yè)知識(shí)可知符合正態(tài)資料）的組間檢驗(yàn)方法選擇t檢驗(yàn)，兩組以上患者體內(nèi)IL-21含量的檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)比較方法選擇方差分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，行雙邊檢驗(yàn)。2結(jié)果觀察組患者IL-21含量水平均值為（510.4±66.2）pg/mL，明顯高于健康對(duì)照組數(shù)據(jù)結(jié)果（332.8±30.1）pg/mL，差異具體統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），具體數(shù)據(jù)比較結(jié)果如下表1：表1：觀察組與對(duì)照組IL-21含量比較結(jié)果表組別N（例）IL-21（pg/mL）t統(tǒng)計(jì)量P值觀察組80510.4±66.213.80<0.05對(duì)照組30332.8±30.1I級(jí)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)IL-21平均水平為（510.4±66.2）pg/mL，II級(jí)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)IL-21平均水平為（510.4±66.2）pg/mL，III級(jí)及以上類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)IL-21平均水平為（510.4±66.2）pg/mL，具體數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下表2：表2：觀察組患者中不同RA關(guān)節(jié)的分級(jí)間IL-21含量比較結(jié)果表組別N（例）IL-21（pg/mL）I級(jí)22410.5±57.1II級(jí)47435.8±60.5III級(jí)及以上11600.8±78.9注：F檢驗(yàn)結(jié)果顯示三組數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F統(tǒng)計(jì)量為14.01，P<0.05），LSD兩類檢驗(yàn)結(jié)果顯示：II級(jí)患者與I級(jí)患者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（z統(tǒng)計(jì)量為1.33，P>0.05），II級(jí)與III級(jí)及以上患者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（z統(tǒng)計(jì)量為8.53，P<0.05）。3討論由本研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出：在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)的IL-21水平明顯高于健康成人組，這不是偶然的差異，deToteroD,CapaiaM,FabbiMetal的文獻(xiàn)研究[4]中對(duì)66例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者進(jìn)行了檢測(cè)（與本研究不同的是，其文獻(xiàn)檢測(cè)方法為酶聯(lián)免疫吸附方法），得到了類似的結(jié)論，另外本研究根據(jù)觀察組病情嚴(yán)重程度的不同（隨著分級(jí)的增大，患者病情逐漸加重）進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著病情的增大，患者體內(nèi)IL-21的含量逐漸增大，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果顯示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。3.1IL-21IL-21屬于I型細(xì)胞因子家族成員之一，最初是Senade.hera等從活化的人體CD3+T淋巴細(xì)胞中克隆出來的細(xì)胞因子[5]，主要有CD4+T淋巴細(xì)胞分泌，包含162個(gè)氨基酸，其蛋白質(zhì)分子中包括4個(gè)α螺旋結(jié)構(gòu)，與IL-6和IL-12具有同源性，有文獻(xiàn)報(bào)道[6]稱人體的IL-21基因位置是4q26-q27，經(jīng)過抗CD28和CD3單抗物質(zhì)活化后的CD4+T細(xì)胞會(huì)高度表達(dá)IL-21，而免疫B細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞并不表達(dá)。3.2IL-21受體IL-21受體是一種含有γ-c鏈的復(fù)合物[7]，當(dāng)γ-c鏈與相應(yīng)的IL-21結(jié)合后，會(huì)激活JAK3，同時(shí)將信號(hào)傳導(dǎo)給下游的效應(yīng)器分子，大大促進(jìn)細(xì)胞的增殖（代償性增生）。γ-c鏈復(fù)合物是IL-21受體不可或缺的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)亞單位，在維持淋巴細(xì)胞正常的生理功能方面發(fā)揮著重要的作用。有對(duì)IL-21受體進(jìn)行序列分析的文獻(xiàn)研究[8]發(fā)現(xiàn)IL-21受體的N端含有四個(gè)高度保守的Cys殘基，跨膜區(qū)存在“WSXWS”的序列，膜內(nèi)部包含兩個(gè)信號(hào)的傳導(dǎo)序列，屬于比較典型的I型細(xì)胞因子結(jié)構(gòu)，與IL-2Rβ受體和IL-4Rα受體高度同源。目前，人類現(xiàn)有的基因圖中已經(jīng)確定了IL-21受體的基因位置是16p11（包含9個(gè)外顯子）[9]，能夠?qū)?38個(gè)氨基酸進(jìn)行編碼，IL-21受體R在外周血的淋巴細(xì)胞和淋巴組織上能夠大量表達(dá)，而在其他組織（例如滑膜和上皮細(xì)胞等）上也有不同程度的表達(dá)。3.3IL-21及其受體的作用機(jī)制對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的影響分析IL-21的免疫調(diào)節(jié)作用主要表現(xiàn)在對(duì)淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)周期的調(diào)節(jié)方面，這種調(diào)節(jié)作用的發(fā)揮又需要IL-21受體的協(xié)助，當(dāng)IL-21及其受體相互結(jié)合后，能夠通過細(xì)胞內(nèi)部的JAK/STAT信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)將信號(hào)傳導(dǎo)給效應(yīng)分子，刺激免疫B細(xì)胞的分化和免疫球蛋白的產(chǎn)生[10]。另外，這種結(jié)合作用還能夠通過上調(diào)IFN-γ等細(xì)胞因子的分泌水平來加大免疫細(xì)胞的活性，提供其殺傷能力。IL-21及其受體的結(jié)合在細(xì)胞內(nèi)部的信號(hào)傳導(dǎo)方面發(fā)揮著重要的作用，有對(duì)小鼠的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[11]結(jié)果顯示：在IL-21受體缺乏的小鼠體內(nèi)，免疫B細(xì)胞分泌的lgG2b和lgG3的數(shù)量會(huì)顯著性降低，而當(dāng)IL-21受體與IL-4同時(shí)缺乏時(shí)，B細(xì)胞分泌的lgG的免疫應(yīng)答機(jī)制會(huì)嚴(yán)重受損。PetrelliA,CarvelloM,VerganiAetal在文獻(xiàn)研究中[12]證實(shí)了在含有IL-21R的基因T-83C突變位點(diǎn)的小鼠中，相同的IL-21濃度不但不能抑制外周血lgE的合成，反而能增加其含量。總之，IL-21屬于一種促炎性的細(xì)胞因子物質(zhì)，主要來自于CD4+T淋巴細(xì)胞的分泌，而IL-21受體能夠在CD4+T淋巴細(xì)胞上得到顯著性的表達(dá)，IL-21及其受體的結(jié)合能夠通過自分泌的方式介導(dǎo)其本身的分泌，同時(shí)也能上調(diào)與Th1免疫反應(yīng)相關(guān)因子的表達(dá)效果。參考文獻(xiàn)[1]Hamming,O.J.,Kang,L.,Svensson,A.etal.Crystalstructureofinterleukin-21receptor(IL-21R)boundtoIL-21revealsthatsugarchaininteractingwithWSXWSmotifisintegralpartofIL-21R[J].TheJournalofBiologicalChemistry,2012,287(12):9454-9460.[2]AnjaFroehlich,JanKisielow,IwanaSchmitzetal.IL-21RonTCellsIsCriticalforSustainedFunctionalityandControlofChronicViralInfection[J].Science,2009,324(Jun.19TN.5934):1493-.[3]Liu,W.,Dienz,O.,Roberts,B.etal.IL-21RexpressiononCD8+TcellspromotesCD8+TcellactivationincoxsackievirusB3inducedmyocarditis[J].Experimental&amp;MolecularPathology,2012,92(3):327-333.[4]deToteroD,CapaiaM,FabbiMetal.HeterogeneousexpressionandfunctionofIL-21RandsusceptibilitytoIL-21-mediatedapoptosisinfollicularlymphomacells.[J].ExperimentalHematology,2010,38(5):373-383.[5]Ruffin,N.,Lantto,R.,Pensieroso,S.etal.ImmuneactivationandincreasedIL-21RexpressionareassociatedwiththelossofmemoryBcellsduringHIV-1infection[J].JournalofInternalMedicine,2012,272(5):492-503.[6]Jin,H,Oyoshi,MK,Le,Yetal.IL-21Risessentialforepicutaneoussensitizationandallergicskininflammationinhumansandmice.[J].TheJournalofClinicalInvestigation,2009,119(1):47-60.[7]HabibT,SenadheeraS,WeinbergKetal.Thecommongammachain(gammac)isarequiredsignalingcomponentoftheIL-21receptorandsupportsIL-21-inducedcellproliferationviaJAK3.[J].Biochemistry,2002,41(27):8725-8731.DOI:10.1021/bi0202023.[8]OhI,OzakiK,MeguroAetal.AlteredeffectorCD4+TcellfunctioninIL-21R-/-CD4+Tcell-mediatedgraft-versus-hostdisease.[J].TheJournalofImmunology,2010,185(3):1920-1926.[9]Herber,D,Brown,TP,Liang,Setal.IL-21hasapathogenicroleinalupus-pro