微生物實(shí)驗(yàn)五微生物數(shù)量的測定

關(guān)于微生物實(shí)驗(yàn)五微生物數(shù)量的測定第一頁，共十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)五微生物數(shù)量的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、明確血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理2、掌握測定酵母細(xì)胞總數(shù)、出芽率和死亡率的技術(shù)第二頁，共十五頁，2022年，8月28日二、實(shí)驗(yàn)原理

鏡檢計(jì)數(shù)法適用于各種含單細(xì)胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球計(jì)數(shù)板；一般細(xì)菌則采用彼得羅夫·霍澤(PetroffHausser)細(xì)菌計(jì)數(shù)板。兩種計(jì)數(shù)板的原理和部件相同，只是細(xì)菌計(jì)數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計(jì)數(shù)板較厚，不能使用油鏡，故細(xì)菌不易看清。第三頁，共十五頁，2022年，8月28日二、實(shí)驗(yàn)原理

血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3個(gè)平臺(tái)。中間的平臺(tái)較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個(gè)半邊上面各有一個(gè)方格網(wǎng)。每個(gè)方格網(wǎng)共分9大格，其中間的一大格(又稱為計(jì)數(shù)室)常被用作微生物的計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)室的刻度有兩種：一種是大方格分為16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格；另一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格。但是不管計(jì)數(shù)室是哪一種構(gòu)造，它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即每個(gè)大方格都由400個(gè)小方格組成。第四頁，共十五頁，2022年，8月28日二、實(shí)驗(yàn)原理

每一個(gè)大方格邊長為1mm，每一個(gè)大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1mm，所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1mm3（10-4）16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板1mL菌液中的總菌數(shù)=A/4*16*104*B25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板1mL菌液中的總菌數(shù)=A/5*25*104*B第五頁，共十五頁，2022年，8月28日第六頁，共十五頁，2022年，8月28日三、實(shí)驗(yàn)器材

啤酒酵母菌懸液，顯微鏡，血球計(jì)數(shù)板，載玻片，電吹風(fēng)，蓋玻片，接種環(huán)，0.1%、0.05%呂氏美藍(lán)染色液。第七頁，共十五頁，2022年，8月28日四、實(shí)驗(yàn)方法和步驟1、菌懸液的制備為便于計(jì)數(shù)，對樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋，稀釋程度以每小格內(nèi)含5-10個(gè)酵母宜，可采用10倍系列稀釋法。2、鏡檢計(jì)數(shù)室在加樣前，先對計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。如有污物，則需清洗，用點(diǎn)吹風(fēng)吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。第八頁，共十五頁，2022年，8月28日3、加樣品將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細(xì)滴管將搖勻的菌懸液由蓋玻片邊緣讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，用吸水紙吸去多余菌液。樣品要均勻充滿計(jì)數(shù)室，不可有氣泡。4、顯微鏡計(jì)數(shù)加樣后靜止5min，然后將血球計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍物鏡尋找計(jì)數(shù)室的位置，然后換成高倍物鏡（40倍）進(jìn)行計(jì)數(shù)。顯微鏡視野中的光線要暗一些，否則，不容易看清計(jì)數(shù)室的方格線。計(jì)數(shù)時(shí)，對位于線上的酵母菌，可采取只計(jì)數(shù)兩條邊的辦法，即遵循查上不查下，查左不查右的原則。當(dāng)酵母菌芽體達(dá)到母細(xì)胞大小1/2時(shí)，即可計(jì)作兩個(gè)細(xì)胞。第九頁，共十五頁，2022年，8月28日5、出芽率的測定按前法，測定出酵母菌芽體數(shù)（小于母細(xì)胞1/2的），計(jì)算出單位體積內(nèi)測得酵母菌細(xì)胞的芽體占總數(shù)的百分率，即為酵母菌的出芽率。第十頁，共十五頁，2022年，8月28日6、酵母死亡率的測定滴一滴0.1%、0.05%呂氏美藍(lán)液于載玻片中央，再用接種環(huán)取酵母菌液少許，與染液混勻，染色2–3min，加蓋玻片，立即鏡檢，計(jì)數(shù)在一個(gè)視野中，以變藍(lán)（死）和未變藍(lán)（活）的細(xì)胞數(shù)。依法再計(jì)數(shù)2-3個(gè)視野中的細(xì)胞數(shù)。死細(xì)胞數(shù)死亡率= ×100%

細(xì)胞總數(shù)死亡率是單位體積內(nèi)死亡的細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分率。第十一頁，共十五頁，2022年，8月28日7、計(jì)數(shù)完畢，將計(jì)數(shù)板在水龍頭下沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或電吹風(fēng)吹干。第十二頁，共十五頁，2022年，8月28日五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果次數(shù)12平均值中方格序號細(xì)胞數(shù)芽體數(shù)細(xì)胞數(shù)/ml芽體數(shù)/ml出芽率第十三頁，共十五頁，2022年，8月28日