細(xì)胞技術(shù)方法和傳代方法

細(xì)胞培養(yǎng)

精選課件細(xì)胞的傳代方法培養(yǎng)細(xì)胞的方法主要講2方面問題：精選課件細(xì)胞計數(shù)培養(yǎng)的細(xì)胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。計數(shù)結(jié)果以每毫升細(xì)胞數(shù)表示。細(xì)胞計數(shù)的原理和方法與血細(xì)胞計數(shù)相同。血細(xì)胞計數(shù)器：手工計數(shù)細(xì)胞Coulter計數(shù)儀：人工計數(shù)精選課件細(xì)胞計數(shù)：

1、將血球計數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計數(shù)板上。

2、將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數(shù)板之間。

3、靜置3分鐘。

精選課件4、鏡下觀察，計算計數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計左側(cè)和上方的。然后按下式計算：

細(xì)胞數(shù)/ml＝4大格細(xì)胞總數(shù)/4×10000

注意：鏡下偶見由兩個以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團，應(yīng)按單個細(xì)胞計算，若細(xì)胞團占10%以上，說明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液。

精選課件根據(jù)細(xì)胞生長的恃點，傳代方法有3種：1．懸浮生長細(xì)胞傳代離心法傳代：離心（1000轉(zhuǎn)/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時，將上清培養(yǎng)液去除l／2一2／3，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。細(xì)胞傳代方法精選課件2．半懸浮生長細(xì)胞傳代（Hela細(xì)胞）此類細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細(xì)胞從瓶壁脫落下來，進(jìn)行傳代。3．貼壁生長細(xì)胞傳代采用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。精選課件貼壁生長細(xì)胞傳代方法：1吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液2加入1-2ml0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆蓋整個瓶底為準(zhǔn)）靜置2-10min（顯微鏡下動態(tài)監(jiān)測）。3吸去胰蛋白酶液，加入培養(yǎng)液。4用吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液。精選課件5離心，細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)液制成懸液。5吸取1/10—1/40細(xì)胞懸液，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。6加適量新鮮培養(yǎng)液于