培養(yǎng)基及其配制學(xué)時

培養(yǎng)基及其配制學(xué)時第一頁，共六十九頁，2022年，8月28日第二頁，共六十九頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基及其作用：是向植物細(xì)胞提供營養(yǎng)的場所。其作用是向植物細(xì)胞提供所需的各種營養(yǎng)；調(diào)節(jié)滲透壓、酸堿度；供給水分。固體培養(yǎng)基還起著支撐作用。第三頁，共六十九頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的成分及作用常用培養(yǎng)基的配方及其特點培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的配制

本章主要內(nèi)容第四頁，共六十九頁，2022年，8月28日◆培養(yǎng)基形態(tài)不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基◆培養(yǎng)過程不同：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基◆其作用不同：誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基

◆營養(yǎng)水平不同：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基的種類第五頁，共六十九頁，2022年，8月28日二、培養(yǎng)基的成分及作用

植物體內(nèi)至少含有幾十種化學(xué)元素，其中大部分元素在植物體內(nèi)起到一定的生理作用：a、組成各種化合物，參與機(jī)體的建造，成為結(jié)構(gòu)物質(zhì)；b、構(gòu)成一些特殊的生理活性物質(zhì)，參與活躍的新陳代謝；c、元素之間相互協(xié)調(diào)，以維持離子濃度平衡、膠體穩(wěn)定、電荷平衡等點化學(xué)方面的作用；d、發(fā)育方面，特定的元素影響植物的形態(tài)發(fā)生和組織、器官建成。第六頁，共六十九頁，2022年，8月28日無機(jī)營養(yǎng)成分+有機(jī)營養(yǎng)成分=基本培養(yǎng)基其它添加物固化劑植物生長調(diào)節(jié)劑有機(jī)營養(yǎng)成分無機(jī)營養(yǎng)成分培養(yǎng)基組成第七頁，共六十九頁，2022年，8月28日Arnon和Stout（1939）提出的確定植物必需營養(yǎng)元素的3個標(biāo)準(zhǔn)A、缺乏該元素，植物生育發(fā)生障礙，不能完成其生活史。B、缺乏該元素，就表現(xiàn)為專一的病癥，且這種缺素癥可以用補(bǔ)充該元素來預(yù)防和恢復(fù)。C、該元素在植物營養(yǎng)生理上表現(xiàn)直接的效果，而不是由于土壤的物理、化學(xué)、微生物條件的改進(jìn)而產(chǎn)生的間接效果。第八頁，共六十九頁，2022年，8月28日國內(nèi)外公認(rèn)的高等植物所必需的營養(yǎng)元素有16（17）種：

C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）在植物中含量差別很大，同一元素在植物不同時期、不同條件下含量也不同。第九頁，共六十九頁，2022年，8月28日根據(jù)植物體內(nèi)含量多少，可把這些元素分為※大量營養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的0.1%以上；

C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S9種※微量營養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的0.1%以下有的只含0.1mg/kg

Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl7種按照國際植物生理協(xié)會的建議：所需濃度>0.5mmol/L的元素為大量元素所需濃度<0.5mmol/L的元素為微量元素第十頁，共六十九頁，2022年，8月28日1、大量元素N是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分，在植物生命活動中占有重要的位置。供應(yīng)的氮化物有硝酸銨、硫酸銨、硝酸鉀等。有時，也添加氨基酸來補(bǔ)充氮素。

P是是生物膜、核苷酸（如ATP）、核酸的重要組成部分。培養(yǎng)基中常用KH2PO4NaH2PO4等。

K對碳水化合物合成，轉(zhuǎn)移，以及氮素代謝等有密切關(guān)系。制備培養(yǎng)基時，常以KCl、KNO3等鹽類提供。第十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日Mg是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化劑，對核蛋白體結(jié)構(gòu)具有穩(wěn)定作用；S是含S氨基酸的蛋白質(zhì)的組成成分。它們常以MgSO4·7H2O提供。Ca是構(gòu)成細(xì)胞壁的成分，對細(xì)胞分裂，穩(wěn)定質(zhì)膜結(jié)構(gòu)有顯著作用，此外，Ca及鈣調(diào)素在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。常以CaCl2·2H2O提供。第十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日2、微量元素

在微量元素中，鐵的作用最大：

◆一些氧化酶、細(xì)胞色素氧化酶、過氧化氫酶等的組成成分。

◆葉綠素形成的必要條件

◆在制做培養(yǎng)基時常用FeSO4·7H2O和Ｎa2-EDTA結(jié)合成螯合物使用。乙二胺四乙酸鐵（EDTA-Fe）鰲合物可防止鐵的沉淀。第十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日

硼與蛋白質(zhì)合成、糖類運輸有著密切的關(guān)系

銅是某些氧化酶的成分，能夠促進(jìn)離體根的生長

錳參與植物的光合、呼吸代謝

鉬參與氮素的代謝

氯是光合作用水光解的活化劑微量元素的主要作用是作為酶的輔助因子或激活劑參與代謝的調(diào)節(jié)。第十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日這些整株植物生長所必需的營養(yǎng)元素，對于植物組織培養(yǎng)來說也是必需的。當(dāng)某些營養(yǎng)元素供應(yīng)不足時，愈傷組織表現(xiàn)出一定的缺素癥狀。如缺氮，會表現(xiàn)出一種花色素苷的顏色，不能形成導(dǎo)管；缺鐵，細(xì)胞停止分裂；缺硫，表現(xiàn)出非常明顯的褪綠；缺錳或鉬，則影響細(xì)胞的伸長。第十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日

缺鐵癥狀：葉面呈綠色網(wǎng)紋狀失綠。隨病勢發(fā)展，葉片失綠程度加重，出現(xiàn)整葉變?yōu)榘咨?，葉緣枯焦，引起落葉。嚴(yán)重缺鐵時，新梢頂端枯死。桃樹第十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日缺銅癥狀：新梢頂端葉片的葉尖失綠變黃，葉片出現(xiàn)褐色斑點至擴(kuò)大變成深褐色，引起落葉。枝頂端生長不良，其下部的芽開始生長，形成叢生的細(xì)枝。菊花第十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日缺錳典型癥狀：葉脈間失綠褪色，但葉脈仍保持綠色，脈間出現(xiàn)壞死斑，缺素癥狀由幼葉開始。菜豆第十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日缺鉬典型癥狀：葉較小，葉脈間失綠,有壞死斑點，且葉邊緣焦枯，向內(nèi)卷曲。十字花科植物缺鉬時葉片卷曲畸形，老葉變厚且枯焦。白菜第十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日缺硼典型癥狀：受精不良,籽粒減少，“花而不實”，“蕾而不花”；根尖、莖尖的生長點停止生長，而形成簇生狀；常引起各種腐爛病。馬鈴薯第二十頁，共六十九頁，2022年，8月28日3、有機(jī)化合物：培養(yǎng)基中若只含有大量元素與微量元素，常稱為基本培養(yǎng)基。為不同的培養(yǎng)目的往往要加入一些有機(jī)物以利于快速生長。常加入的有機(jī)成分主要有以下幾類：

(1)

碳水化合物：碳源物質(zhì)包括糖類物質(zhì)、醇類物質(zhì)和有機(jī)酸，以糖類物質(zhì)最重要。最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是較好的碳源，可支持許多組織很好的生長。糖類物質(zhì)特點：

◆具有熱易變的性質(zhì)◆利于吸收和利用

◆使用濃度一般在2%—5%

◆提供能源和調(diào)節(jié)滲透壓第二十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日（2）維生素類

◆以各種輔酶的形式存在

◆參與多種代謝活動

◆對生長，分化等有很好的促進(jìn)作用

◆主要分為脂溶性維生素和水溶性維生素

◆常用維生素有VB1和VB6

VB1(鹽酸硫胺素)：對愈傷組織的產(chǎn)生和生活力有重要作用。

VB6(鹽酸吡哆醇)：能促進(jìn)根的生長。

VPP(煙酸)：與植物代謝和胚的發(fā)育有一定關(guān)系。

VC(抗壞血酸)：有防止組織變褐的作用。第二十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日（3）肌醇又叫環(huán)己六醇，在糖類的相互轉(zhuǎn)化中起重要作用。用于構(gòu)建細(xì)胞壁。參與碳水化合物、磷脂代謝及離子平衡等生理活動。促進(jìn)活性物質(zhì)發(fā)揮作用。使用肌醇能促進(jìn)愈傷組織的生長以及胚狀體和芽的形成。對組織和細(xì)胞的繁殖、分化有促進(jìn)作用。第二十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日（4）氨基酸

◆蛋白質(zhì)的組成成分

◆有機(jī)氮源

◆可直接被細(xì)胞吸收利用

◆培養(yǎng)基中常用的是甘氨酸。有時用水解乳蛋白或水解酪蛋白，由于它們營養(yǎng)豐富，極易引起污染。如在培養(yǎng)中無特別需要，以不用為宜。第二十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日（5）天然復(fù)合物

◆促進(jìn)某些愈傷組織和器官的生長

◆成分比較復(fù)雜，大多含氨基酸、激素、酶等一些復(fù)雜化合物。

◆天然營養(yǎng)混合物，對細(xì)胞和組織的增殖與分化有明顯的促進(jìn)作用。如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物①椰乳：它在愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中有促進(jìn)作用②香蕉：主要在蘭花的組織培養(yǎng)中應(yīng)用，對發(fā)育有促進(jìn)作用。③馬鈴薯：添加后可得到健壯的植株。④水解酪蛋白：為蛋白質(zhì)的水解物，主要成分為氨基酸。⑤其它：酵母提取液、麥芽提取液等。第二十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日4、培養(yǎng)材料的支持物（1）瓊脂在固體培養(yǎng)時瓊脂是最好的固化劑。固體培養(yǎng)基利于組織置于培養(yǎng)基表面。瓊脂是一種由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不提供任何營養(yǎng)?！羰鞘褂米钇毡榈哪虅粲昧恳话阍?—10g/L之間◆顏色以淺、透明度高好，潔凈為上品除了瓊脂外，在組織培養(yǎng)中還可以使用瓊脂糖、結(jié)冷膠等。第二十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日（2）其它：有玻璃纖維、濾紙橋、海綿等，總的要求是排出的有害物質(zhì)對培養(yǎng)材料沒有影響或影響較小。第二十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日5、活性炭活性炭為木炭粉碎經(jīng)加工形成的粉沫結(jié)構(gòu)，它結(jié)構(gòu)疏松，孔隙大，吸水力強(qiáng)，有很強(qiáng)的吸附作用，它的顆粒大小決定著吸附能力、粒度越小，吸附能力越大。它可以吸附培養(yǎng)基中的有害物質(zhì)，包括瓊脂中所含的雜質(zhì)，培養(yǎng)物在培養(yǎng)過程中分泌的酚、醌類物質(zhì)以及蔗糖在高壓消毒時產(chǎn)生的5－羥甲基糖醛。◆吸附培養(yǎng)基及培養(yǎng)物分泌物中的抑制物質(zhì)

◆抑制外植體褐變

◆防止玻璃苗的產(chǎn)生

◆促進(jìn)培養(yǎng)物生長和分化

◆促進(jìn)生根缺點：

◆沒有選擇性活性炭第二十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日莖尖初代培養(yǎng)，加入適量活性炭，可以吸附外植體產(chǎn)生的致死性褐化物，其效力優(yōu)于VC和半胱氨酸。在新梢增殖階段，活性炭可明顯促進(jìn)新梢的形成和伸長?；钚蕴吭谏鶗r有明顯的促進(jìn)作用，其機(jī)理一般認(rèn)為與活性炭減弱光照有關(guān)。

第二十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日在使用活性炭時，要注意其吸附有害物質(zhì)和吸附生長調(diào)節(jié)物的二重性，尤其是當(dāng)較高的活性炭足以能抵消生長調(diào)節(jié)物的作用時，應(yīng)注意調(diào)整好活性炭與生長調(diào)節(jié)物等培養(yǎng)基成分的用量，使其皆能發(fā)揮作用。在使用時要有其量的意識，使活性炭發(fā)揮其積極作用。

第三十頁，共六十九頁，2022年，8月28日6、抗生素抗生物質(zhì)有青霉素、鏈霉素、慶大霉素等，用量在5～20mg/l之間。添加抗生物質(zhì)可防止外植體內(nèi)生菌造成的污染。第三十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日7、植物激素：在培養(yǎng)基的各成分中，植物激素是培養(yǎng)基的關(guān)鍵物質(zhì)，對植物組織培養(yǎng)起著決定性作用。第三十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日（1）生長素類：◆促進(jìn)細(xì)胞伸長和分裂

◆促進(jìn)生根、抑制器官脫落、性別控制、延長休眠、頂端優(yōu)勢、單性結(jié)實

◆誘導(dǎo)愈傷組織形成

◆溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，后者的溶解效果更好

◆常用的生長素：

IAA(吲哆乙酸)NAA(奈乙酸)2,4-D(二氯苯氧乙酸)IBA(吲哆丁酸)第三十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日IAA(吲哚乙酸)是天然存在的生長素，亦可人工合成，其活力較低,是生長素中活力最弱的激素，對器官形成的副作用小，高溫高壓易被破壞，也易被細(xì)胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。第三十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日NAA(萘乙酸)

在組織培養(yǎng)中的起動能力要比IAA高出3～4倍，且由于可大批量人工合成，耐高溫高壓，不易被分解破壞，所以應(yīng)用較普遍。

IBA(吲哚丁酸)是促進(jìn)發(fā)根能力較強(qiáng)的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。

2,4-D（2,4－二氯苯氧乙酸）起動能力比IAA高10倍，特別在促進(jìn)愈傷組織的形成上活力最高，但它強(qiáng)烈抑制芽的形成，影響器官的發(fā)育。第三十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日生長素作用強(qiáng)弱順序：IAANAAIBA2,4-D強(qiáng)弱2，4-D常用于誘導(dǎo)愈傷組織，IBA和NAA常用于生根第三十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日

生長素配制時可先用少量95％酒精助溶。2,4-D可用0.1mol/l的NaOH或KOH助溶。生長素常配成1mg/ml的溶液貯于冰箱中備用。第三十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日（2）細(xì)胞分裂素類這類激素是腺嘌呤的衍生物，包括6-BA(6－芐基氨基嘌呤)、Kt(激動素)、ZT(玉米素)等。其中ZT活性最強(qiáng)，但非常昂貴。常用的是6-BA。在培養(yǎng)基中添加細(xì)胞分裂素有以下作用：誘導(dǎo)芽的分化促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長。誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大。抑制根的分化。用于離體成花的調(diào)控。延緩組織的衰老并增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成。

因此，細(xì)胞分裂素多用于誘導(dǎo)不定芽的分化、莖、苗的增殖，而避免在生根培養(yǎng)時使用。

溶于0.5—1.0mol/L的鹽酸或稀薄的NaOH中。第三十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日（3）赤霉素類和脫落酸

A、赤霉素類

◆組織培養(yǎng)中不常使用

◆加速細(xì)胞的伸長生長

◆促進(jìn)細(xì)胞的分裂

◆主要是GA3

B、脫落酸

◆抑制細(xì)胞分裂和伸長

◆促進(jìn)脫落和衰老

◆促進(jìn)休眠和提高抗逆能力第三十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日赤霉素(GA)：培養(yǎng)基中添加的是GA3，主要用于刺激在培養(yǎng)中形成的不定胚發(fā)育成小植株，促進(jìn)幼苗莖的伸長生長。一般在器官形成后，添加赤霉素可促進(jìn)器官或胚狀體的生長。

赤霉素溶于酒精，配制時少量可用95％酒精助溶。赤霉素不耐熱，高壓滅菌后將有70～100％失效，應(yīng)當(dāng)采用過濾滅菌法加入。第四十頁，共六十九頁，2022年，8月28日8、抗氧化物：植物組織在切割時會溢泌一些酚類物質(zhì)，接觸空氣中的氧氣后，自動氧化或由酶類催化氧化為相應(yīng)的醌類，產(chǎn)生可見的茶色、褐色以致黑色，這就是酚污染。這些物質(zhì)滲出細(xì)胞外就造成自身中毒，使培養(yǎng)的材料生長停頓，失去分化能力，最終變褐死亡。第四十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日抗酚類氧化常用的藥劑有半胱氨酸及Vc，可用50～200mg/l的濃度洗滌剛切割的外植體傷口表面，或過濾滅菌后加入固體培養(yǎng)基的表層。其它抗氧化劑有二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、抗壞血酸及二乙基二硫氨基甲酸酯等。第四十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日9、水作用：是植物原生質(zhì)體的組成成分，也是一切代謝過程的介質(zhì)和溶媒。注意：用蒸餾水，最好是雙蒸水；以保持培養(yǎng)基成分的精確性。大規(guī)模生產(chǎn)時可用自來水。第四十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日三、常用培養(yǎng)基的配方及其特點（一）幾種常用培養(yǎng)基的配方

組織培養(yǎng)常用的基本培養(yǎng)基有：MS、MT、White、Nitsch、Blaydes、N6、B5、NT、SH、Miller、Heller等。第四十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日1、MS培養(yǎng)基

◆無機(jī)鹽濃度高◆高含量的氮、鉀，尤其是硝酸鹽◆含有一定數(shù)量的銨鹽◆營養(yǎng)豐富◆不需要添加更多的有機(jī)附加物（二）、幾種常見培養(yǎng)基的特點第四十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日2、White培養(yǎng)基

◆1943年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計

◆

1963年作了改良，提高M(jìn)gSO4的濃度和增加硼元素

◆無機(jī)鹽濃度較低◆使用廣泛◆在生根培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)中有良好的效果第四十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日3、B5培養(yǎng)基

◆1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計◆含有較低的銨鹽

◆較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素第四十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日4、N6培養(yǎng)基◆1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)設(shè)計◆成分較簡單，KNO3和（NH4）2SO4含量高。在國內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻及其他禾谷類植物的花粉和花藥培養(yǎng)。第四十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日AgNO3:作用：抑制乙烯活性，防止玻璃化苗的出現(xiàn)濃度：1-10mg/L抗生素：種類：青霉素、鏈霉素、慶大霉素等。作用：可防止外植體內(nèi)生菌污染。濃度：5—20mg/L。第四十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日培養(yǎng)基＝基本培養(yǎng)基＋植物激素

培養(yǎng)基的選擇在實質(zhì)上講就是設(shè)計營養(yǎng)物質(zhì)與激素（種類、用量）的最佳組合。四、培養(yǎng)基的選擇第五十頁，共六十九頁，2022年，8月28日篩選培養(yǎng)基常用的試驗方法：

單因子試驗

多因子試驗

逐步添加和逐步排除試驗第五十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日1、單因子試驗只變動一個因子，通過試驗找出該因子的影響及影響程度。如：

MS+BA2+NAA

（0.1、0.5、1.0mg/L）

MS+BA+NAA0.1（1.0、2.0、3.0mg/L）不能反映各種單因子成分之間的組合效果與相互影響

第五十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日2、多因子試驗對培養(yǎng)基中兩個或兩個以上因素進(jìn)行研究的試驗稱為多因子實驗。

第五十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日2種激素5種濃度的實驗組合（單位：mg/L）

例如研究NAA和BA的最佳濃度組合，每個因子各設(shè)5個濃度水平，這兩種因子各種濃度的所有組合，就構(gòu)成了一個具有25項處理的完全試驗。BA00.52.5510NAA0123450.56789102.511121314155.01617181920102122232425第五十四頁，共六十九頁，2022年，8月28日3、逐步添加和逐步排除的試驗方法：成功前-逐步添加（各種營養(yǎng)成分）實驗成功成功后-逐步排除（減少各種成分）縮小范圍在尋求最佳激素配比時，也經(jīng)常用到這種加加減減的簡單方法。第五十五頁，共六十九頁，2022年，8月28日科學(xué)安排研究順序

１.定基本培養(yǎng)基，激動素２.改良基本培養(yǎng)基３.調(diào)整蔗糖、瓊脂用量４.改變pH值５.探討培養(yǎng)的環(huán)境條件第五十六頁，共六十九頁，2022年，8月28日1、母液(stocksolution)的配制和保存所謂母液是欲配制液的濃縮液。意義:①保證各物質(zhì)成分的準(zhǔn)確性②配制時的快速移?、郾阌诘蜏乇２?。五、

培養(yǎng)基的配制第五十七頁，共六十九頁，2022年，8月28日單配法：將培養(yǎng)基配方中的各種成分分別配成一定濃度的母液。一般用mg/ml。混配法：將幾類營養(yǎng)成分按配方中的用量擴(kuò)大一定倍數(shù)稱量，分別溶解后再混合成母液。母液配制時可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等，一般配成比所需濃度高10～100倍的母液。

母液的配制方法：第五十八頁，共六十九頁，2022年，8月28日配制培養(yǎng)基時，為便于保存，提高效率，通常先配制母液。即配成：大量元素10倍液，定容至1000ml；微量元素100倍液，定容至1000ml；鐵鹽100倍液，定容至1000ml；維生素1mg/l，定容至100ml；激素1mg/l，定容至50～100ml。第五十九頁，共六十九頁，2022年，8月28日

配制時注意一些離子之間易發(fā)生沉淀，如Ｃa2＋和SO42－，Ｃa2＋、Ｍg2＋和PO43－一起溶解后，會產(chǎn)生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液時要用蒸餾水或重蒸餾水。藥品應(yīng)選取等級較高的化學(xué)純或分析純。藥品的稱量及定容都要準(zhǔn)確。各種藥品先以少量水讓其充分溶解，然后依次混合。第六十頁，共六十九頁，2022年，8月28日

一般配成大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素等母液，其中維生素、氨基酸類可以分別配制，也可以混在一起。母液配好后放入冰箱內(nèi)低溫保存，用時再按比例稀釋。第六十一頁，共六十九頁，2022年，8月28日

ＭＳ培養(yǎng)基母液的配制母液名稱藥品名稱

大量元素（MSI）

NH4NO3KNO3CaCl·2H2OMgSO4·7H2OKH2PO4微量元素（MSII）MnSO4·H2OZnSO4·7H2OCoCl·6H2OCuSO4·5H2OH3BO3Na2MO4·2H2OKI鐵鹽（MSIII）FeSO4·7H2ONa2-EDTA·2H2O有機(jī)物（MSIV）煙酸(Vpp)鹽酸吡哆醇鹽酸硫胺素甘氨酸肌醇（MSV）肌醇第六十二頁，共六十九頁，2022年，8月28日MS母液配制：MSI 大量元素20X MSII 微量元素200X MSIII 鐵鹽 200X MSIV 有機(jī)物 200X MSV 肌醇 200X

激素 0.1mg/ml第六十三頁，共六十九頁，2022年，8月28日MSⅠ(大量元素)配方用量mg/L20X（mg）稱量1.NH4NO316503300033g2.KNO319003800038g3.CaCl2·2H2O44088008.8g4.MgSO4

·7H2O37074007.4g5.KH2PO417034003.4g將1、2、4、5稱好放入燒杯分別溶解混合，將3最后混合，再定容到1L，放入試劑瓶貼標(biāo)簽，備用500mL甲1、2、4、5500mL乙3＋

定容貼標(biāo)簽1L

MSIX20HXH注：Ca2+和S042-混合后易沉淀。第六十四頁，共六十