顯微鏡使用基本訓練實驗模塊

實驗室規(guī)則

實驗室規(guī)則是維護正常教學秩序和培養(yǎng)學生嚴謹學風的重要保證，師生都必須嚴格遵守。

1．學生應提前5—10min進入實驗室，做好實驗前的準備工作。

2．按號使用顯微鏡和解剖鏡，使用前要檢查，如果發(fā)現(xiàn)損壞或發(fā)生故障，要及時報告指導教師，不可自行修理或拆卸顯微鏡的任何部件。使用后要擦拭整理，放回原處。

3．愛護儀器、標本及其他公共設施，節(jié)約藥品和水電。損壞物品時應主動向教師報告并及時登記。

4．保持實驗室安靜、整潔。實驗時不得隨意走動和談笑。室內(nèi)禁止吸煙，不準隨地吐痰和亂扔紙屑、雜物。嚴格按規(guī)定使用酸、堿等藥品每次實驗后。各實驗小組輪流打掃實驗室衛(wèi)生。

5．最后離開實驗室的學生要負責檢查水、電、門、窗等是否關(guān)嚴。

實驗課進行方式及對學生要求

1．實驗前必須預習每次實驗課內(nèi)容

2.必須仔細聽取教師對實驗課要求、操作中的重點、難點和應注意問題的講解。

3．實驗時，學生應根據(jù)實驗教材獨立操作，仔細觀察，隨時作好記錄。遇到問題，應積極思考，分析原因，排除障礙。對于經(jīng)自己努力解決不了的問題，應請指導教師幫助。

4．積極開展第二課堂的教學活動。學生除了在實驗室學習外，還應以整個校園或公園、植物園中的植物作為學習的目標，理論聯(lián)系實際進行學習。

5．按時完成實驗作業(yè)。要求實驗報告書寫整齊、清潔、簡明扼要。

學生常用實驗用品：繪圖鉛筆兩支(2H-3H)、實驗報告紙、橡皮、直尺、鑷子、刀片等。顯微鏡使用基本訓練實驗模塊田會玉目的要求：顯微鏡是生物學研究中最為常用的設備，正確而熟練地使用顯微鏡是生物專業(yè)學生必須的基本能力。設計本實驗模塊的目的，就是要求大家能詳細地了解常用顯微鏡的功能，熟練掌握明場光學顯微鏡的使用，以便有效、安全地使用設備，順利地進行實驗觀察和研究。目鏡轉(zhuǎn)換器鏡臂物鏡壓片夾載物臺準焦螺旋聚光器鏡座調(diào)光器顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)正置顯微鏡倒置顯微鏡顯微鏡的機械裝置鏡座：鏡座是顯微鏡的基本支架，由底座和鏡臂兩部分組成。在它上面連接有載物臺和鏡筒，它是用來安裝光學放大系統(tǒng)部件的基礎。鏡座鏡筒：上接接目鏡，下接轉(zhuǎn)換器，形成目鏡與物鏡之間的暗室。鏡筒物鏡轉(zhuǎn)換器：可安裝3-4個物鏡。載物臺：載物臺中央有一孔，為光線通路。在臺上裝有彈簧標本夾和推動器，其作用為固定或移動標本的位置。推動器：移動標本的機械裝置，由一橫一縱推進齒軸的金屬架構(gòu)成?？v橫架桿上標有刻度標尺，構(gòu)成很精密的平面座標系。粗調(diào)旋鈕（低倍鏡使用）：調(diào)節(jié)物鏡和標本間距離的機件

。細調(diào)旋鈕（高倍鏡使用）：細調(diào)焦距。每轉(zhuǎn)一圈移動0.1毫米。粗調(diào)旋鈕和細調(diào)旋鈕是共軸的。粗調(diào)焦螺旋細調(diào)焦螺旋顯微鏡的光學系統(tǒng)反光鏡：較高檔次的顯微鏡鏡座上裝有光源，并有電流調(diào)節(jié)旋鈕，可調(diào)節(jié)光照強度。聚光器：由聚光透鏡、虹彩光圈和升降螺旋組成。聚光器的高度可以調(diào)節(jié)，一般聚光器的焦點在其上方的1.25mm處，而其上升限度為載物臺平面下方0.1mm。因此，要求使用的載玻片厚度在0.8-1.2mm間，否則被檢樣品不在焦點上，影響鏡檢效果。物鏡(4X,10X,40X,100)：物鏡成像的質(zhì)量，對分辨率有著決定性的影響。目鏡（常用10X)：目鏡物鏡顯微鏡的性能顯微鏡分辨能力的高低決定于光學系統(tǒng)的各種條件。物體放大后能否呈現(xiàn)清晰的細微結(jié)構(gòu)，首先決定于物鏡的性能，其次決定于目鏡和聚光鏡的性能。數(shù)值孔徑（鏡口率）：N.A物鏡和聚光鏡的主要參數(shù)。n為介質(zhì)折射率?？諝鉃?.0，水為1.33，甘油為1.47，香柏油為1.52。α為物鏡的鏡口角。分辨力：DD=λ/2N.Aλ為光的波長。D值愈小，分辨力愈高，物象更清楚。提高分辨力的方法減低波長增大折射率加大鏡口角放大率：V=V1（物鏡）×V2（目鏡）焦深：即在使用顯微鏡時，當焦點對準某一物體時，不僅位于該點平面上的各點都可以看清楚，而且在此平面的上下一定厚度內(nèi)，也能看得清楚，這個清楚部分的厚度就是焦深。1）焦深與總放大倍數(shù)及物鏡的數(shù)值孔徑成反比。2）焦深大，分辨率降低。覆蓋差

顯微鏡的光學系統(tǒng)也包括蓋玻片在內(nèi)。由于蓋玻片的厚度不標準，光線從蓋玻片進入空氣產(chǎn)生折射后的光路發(fā)生了改變，從而產(chǎn)生了相差，這就是覆蓋差。覆蓋差的產(chǎn)生影響了顯微鏡的成像質(zhì)量。國際上規(guī)定，蓋玻片的標準厚度為0.17mm，許可范圍在0.16-0.18mm，在物鏡的制造上已將此厚度范圍的相差計算在內(nèi)。物鏡外殼上標的0.17，即表明該物鏡所要求的蓋玻片的厚度。顯微鏡的主要類型及功能特點：體視顯微鏡（解剖鏡）暗視野顯微鏡在普通光學顯微鏡臺下配一個暗視野聚光器,來自下面光源的光線被拋物面聚光器反射，形成了橫過顯微鏡視野而不進入物鏡的強烈光束?？煽吹狡胀饕曇帮@微鏡中看不見的幾個毫微米的微粒。因此在某些細菌、細胞等活體檢查中常常使用。偏光顯微鏡偏光顯微鏡內(nèi)，在物鏡與目鏡間插入一個檢偏鏡片，光源與聚光器間鑲有起偏鏡片，圓形載物臺可以作360°旋轉(zhuǎn)。起偏與檢偏鏡片處于正交檢偏位時，視野完全變黑。將被檢物體放在顯微鏡臺上。若被檢物為單折射體，則旋轉(zhuǎn)鏡臺，視野始終黑暗。若旋轉(zhuǎn)鏡臺一周，視野內(nèi)被檢物時明時暗，則說明被檢物是雙折射體。許多結(jié)晶物質(zhì)，人體組織內(nèi)的彈力纖維、膠原纖維、染色體和淀粉樣原纖維等都是雙折射體，可借偏振光顯微鏡術(shù)檢驗，進行定性和定量分析。相差顯微鏡（相襯顯微鏡或位相顯微鏡）利用樣品中質(zhì)點折射率的不同或質(zhì)點厚度的不等，產(chǎn)生光線的相位差，使新鮮標本不必染色就可以看到，而且能夠觀察到活細胞內(nèi)線粒體及染色體等精細結(jié)構(gòu)，還可以應用于霉菌、細菌、病毒等更微小活體的研究。熒光顯微鏡在短波長光波(紫外光或紫藍色光,波長250～400nm）照射下，某些物質(zhì)吸收光能，受到激發(fā)并釋放出一種能量降級的較長的光波（藍、綠、黃或紅光，波長400～800nm），這種光稱熒光。熒光顯微鏡的光源為高壓汞燈，發(fā)出的紫外光源經(jīng)過激發(fā)濾光片，過濾后射向普勒姆氏分色鏡將激發(fā)光向下反射,通過物鏡投射向經(jīng)熒光染料染色的標本。染料被激發(fā)并釋放出熒光,通過物鏡,穿過分色鏡和目鏡即可進行觀察。目鏡下方安置有屏障濾片(只允許特定波長的熒光通過)以保護眼睛及降低視野暗度。熒光顯微鏡的特點是靈敏度高，在暗視野中低濃度熒光染色即可顯示出標本內(nèi)樣品的存在，其對比約為可見光顯微鏡的100倍。激光共聚焦顯微鏡特點：激光光源，光切片，熒光顯微鏡的使用要領：打開電源；調(diào)節(jié)光源強度，確認聚光鏡上有明顯的照明光；利用粗調(diào)旋鈕使載物臺向下落下；將標本的蓋玻片面朝上，將觀察切片夾到夾子中間，固定標本；調(diào)節(jié)粗調(diào)旋鈕，使載物臺調(diào)到最高；利用縱橫推動器，觀察聚光鏡，將所要觀察的部位移動到聚光鏡上面的照明光部位；旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器，選擇4倍物鏡；觀察目鏡，調(diào)節(jié)照明調(diào)節(jié)開關(guān)，使光線調(diào)到不刺激眼睛的光強；觀察目鏡，利用粗調(diào)旋鈕使載物臺慢慢落下，看到所要觀察的物體后再用細調(diào)旋鈕精確調(diào)整焦距；利用縱橫推動器將所要觀察的部位調(diào)到視野的中心位置；旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器，選擇更高的目鏡；觀察目鏡，利用細調(diào)旋鈕調(diào)整焦距。顯微鏡的復原下降載物臺至最低處；轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡頭轉(zhuǎn)離載物臺孔；取下已觀察的玻片標本；關(guān)閉電源；拔出插銷；放回原處。實驗一植物細胞結(jié)構(gòu)目的和要求：1.了解植物細胞特征性結(jié)構(gòu)（質(zhì)體、液胞、細胞壁）的結(jié)構(gòu)與功能。2.掌握繪制植物結(jié)構(gòu)圖的基本要求。實驗內(nèi)容：1.植物細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)基本特征觀察1.洋蔥鱗莖葉片內(nèi)表皮撕片,用I2-KI染色后觀察：活細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。2.菠菜葉片下表皮撕片觀察：葉肉細胞中的葉綠體。3.芹菜橫切面徒手切片：厚角組織(是植物機械組織的一類，其細胞最明顯的特征是細胞壁具有不均勻的增厚，而且這種增厚是初生壁性質(zhì)的4.土豆切片：淀粉粒2.洋蔥有絲分裂玻片徒手切片法是指用手拿刀片（或剃刀）把新鮮材料切成薄片，徒手切片法所作的切片通常不經(jīng)染色或經(jīng)簡易染色后，封藏于水中即可觀察但也可制成永久制片。優(yōu)點:不需用切片機等貴重儀器有一刀片或剃刀就可以進行切片；制片簡單迅速能及時觀察植物生活組織結(jié)構(gòu)和顏色。缺點:微小、柔嫩、含水過多以及堅硬的材料，很難用此法切成薄片。不經(jīng)過嚴格的操作訓練，易切成薄厚不均或不完整的切片。切出的片子厚于切片機切片，也不適合對植物子房及胚胎等材料做連續(xù)切片。操作步驟:1.取材選取待觀察的植物材料初步切取大約3cm長的小塊，再依切片的具體要求，將組織塊修整為0.5cm的材料塊。2.切片以左手夾住材料，用右手平穩(wěn)地握住刀片。切片時，使刀片與材料的斷面保持平行刀口自左上方斜向，右下方，動作要均勻有力。材料與刀片須常以水濕潤。切下的薄片立即用毛筆蘸水后粘取移入盛有清水的培養(yǎng)內(nèi)皿。3選切片完整，在培養(yǎng)皿中選擇薄而均勻且切面完整的組織切片，撈在載玻片上作臨時水裝片，然后置于顯微鏡下觀察有絲分裂間期：DNA復制前期：染色質(zhì)高度螺旋形成染色體中期：染色體排列到赤道板上后期：兩條姊妹染色單體分開并移向兩極末期：從子染色體到達兩極開始至形成兩個子細胞2.生物繪圖技術(shù)（p183－186）生物繪圖是形象描述生物外部形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)的一種重要的科學記錄方法。在實驗報告和將來科學研究中常用生物給圖法來反映生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征。觀察繪圖前要對被畫的對象(植物細胞、組織、器官以及外形等)做細心觀察，選擇有代表性的、典型的部位起稿。起稿起稿是勾畫輪廓的過程：注意位置、大小，在圖板的中央偏左，其右側(cè)和下方需注解文字。將繪圖紙放在顯微鏡的右方，左眼觀察顯微鏡圖像，右眼看繪圖紙繪圖。繪圖起草時先用較軟的鉛筆(HB)，將所觀察對象的整體和主要部分輕輕描繪在繪圖紙上，下筆要輕．盡量少改不擦。定稿

對照所觀察的實物，全面檢查起稿的草圖，進行修正和補充，再用硬鉛筆(2B）將草圖畫出來，之后可將草圖擦去。線條的要求：線條要均勻、不可時粗時細；線條邊緣要圓潤、光滑，不可有深淺和虛實的區(qū)別。點的要求：“點點襯陰”法可顯示圖像的立體感，更富有形象相生動性。粗密點用來表示背光、凹陷或色彩濃重的部位；細疏點用來表示受光面或色彩淡的部位。點點要圓，用筆尖垂直向下打點，根據(jù)明暗需要掌握點的疏密變化，