標(biāo)準(zhǔn)解讀

GB/T 17999.9-1999是一項(xiàng)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，全稱為《SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)》。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用SPF（無(wú)特定病原體）雞進(jìn)行間接免疫熒光試驗(yàn)的方法、要求及判定準(zhǔn)則，旨在為獸醫(yī)學(xué)研究、禽類疾病診斷以及疫苗效果評(píng)估提供統(tǒng)一的操作規(guī)范和技術(shù)指導(dǎo)。

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容概覽：

  1. 范圍：明確了本標(biāo)準(zhǔn)適用的范圍，即適用于利用SPF雞作為模型，通過(guò)間接免疫熒光技術(shù)來(lái)檢測(cè)抗原或抗體的存在，特別是在研究禽類傳染病及其免疫反應(yīng)時(shí)的應(yīng)用。

  2. 規(guī)范性引用文件：列出了實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)時(shí)需要參考的其他相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)，確保試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性和可比性。

  3. 術(shù)語(yǔ)和定義：對(duì)標(biāo)準(zhǔn)中涉及的專業(yè)術(shù)語(yǔ)進(jìn)行了明確界定，如SPF雞、間接免疫熒光試驗(yàn)等，幫助讀者理解基礎(chǔ)概念。

  4. 試劑與材料：詳細(xì)描述了進(jìn)行試驗(yàn)所需的各種試劑、抗體標(biāo)記物、細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)及其他實(shí)驗(yàn)器材的具體要求和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確保試驗(yàn)的一致性和可靠性。

  5. 試驗(yàn)動(dòng)物與樣本處理：規(guī)定了SPF雞的選擇標(biāo)準(zhǔn)、飼養(yǎng)條件以及樣本（如血清、組織切片）的采集、保存和預(yù)處理方法，確保樣本質(zhì)量符合試驗(yàn)要求。

  6. 試驗(yàn)步驟：詳述了從樣本固定、抗體孵育、熒光標(biāo)記次抗體應(yīng)用到熒光觀察的全過(guò)程操作步驟，每一步都配有具體的操作指導(dǎo)和注意事項(xiàng)，以保證試驗(yàn)的準(zhǔn)確執(zhí)行。

  7. 結(jié)果判定：提供了判斷試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性和陰性的標(biāo)準(zhǔn)，包括熒光信號(hào)的強(qiáng)度、分布模式等判讀依據(jù)，以及如何區(qū)分非特異性反應(yīng)。

  8. 試驗(yàn)報(bào)告：規(guī)定了試驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)記錄和報(bào)告的信息內(nèi)容，如試驗(yàn)條件、所用試劑批號(hào)、觀察結(jié)果及結(jié)論等，確保試驗(yàn)結(jié)果的可追溯性和透明度。

  9. 安全與防護(hù)：強(qiáng)調(diào)了在進(jìn)行間接免疫熒光試驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)采取的安全措施和生物防護(hù)要求，以保護(hù)操作人員和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的安全。

注意事項(xiàng)：

  • 本標(biāo)準(zhǔn)著重于標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，確保不同實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果的可比性。
  • 實(shí)驗(yàn)操作需嚴(yán)格遵守生物安全規(guī)范，防止病原體泄露和交叉污染。
  • 試驗(yàn)結(jié)果的解釋需結(jié)合臨床癥狀和其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果綜合判斷。

此標(biāo)準(zhǔn)為SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)提供了全面的技術(shù)框架，對(duì)于提升我國(guó)在禽病防控和研究領(lǐng)域的技術(shù)水平具有重要意義。


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  • 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替，建議下載現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB/T 17999.10-2008
  • 1999-11-10 頒布
  • 2000-04-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
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TCS.65.020.30B41中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17999.9-1999SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)SPFchicken-Indirectimmunofluorescentassay1999-11-10發(fā)布2000-04-01實(shí)施國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

GB/T17999.9-1-1999雞傳染性貧血(CIA).是近年來(lái)新發(fā)生的雞病，國(guó)外均對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)。CIA在我國(guó)雞群中也有流行，因此·SPF雞微生物學(xué)質(zhì)量控制國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)將其列入監(jiān)測(cè)項(xiàng)目。目前國(guó)內(nèi)已建立了SPF雞監(jiān)測(cè)CIA的通用方法一-間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)該方法已得到應(yīng)用和驗(yàn)證，在此基礎(chǔ)上制定本標(biāo)準(zhǔn)。SPF雞微生物學(xué)質(zhì)量控制國(guó)家系列標(biāo)準(zhǔn).包括SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)總則和9種SPF雞微生物學(xué)檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)為《SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)》。SPF雞微生學(xué)檢測(cè)方法還包括以下部分：GB/T17999.1—1999SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn);GB/T17999.2-1999SPF雞血清中和試驗(yàn)；GB/T17999.3—1999SPF雞血清平板凝集試驗(yàn)；GB/T17999.4—1999SPF雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)；GB/T17999.5—1999SPF雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);GB/T17999.6—1999SPF雞胚敏感試驗(yàn)：GB/T17999.7—1999SPF雞雞白沙門氏菌檢驗(yàn)；GB/T17999.8-1999SPF雞試管凝集試驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部、國(guó)家科學(xué)技術(shù)部提出本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司歸口，本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所、農(nóng)業(yè)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：周文平、趙立紅、陳德威

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)GB/T17999.9-1999SPrchicken-indirectimmunofluorescentassay1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了間接免疫熒光試驗(yàn)試劑、材料、操作程序及結(jié)果判定等本標(biāo)準(zhǔn)適用于SPF雞感染雞傳染性貧血病毒(ChickenInfectiousAnaemiaVirus.CIAV)后的抗體監(jiān)測(cè)2原理間接免疫熒光試驗(yàn)，以病毒感染細(xì)胞作抗原，與待檢血清中的特異抗體結(jié)合，再與熒光色素標(biāo)記的抗抗體結(jié)合.形成抗原-抗體-抗抗體復(fù)合物。熒光色素在紫外光或藍(lán)紫光的作用下，激發(fā)出可見的熒光因此出現(xiàn)熒光就說(shuō)明標(biāo)記物的存在，同時(shí)也反映了特異性抗體的存在。常采用已知抗原及熒光色素標(biāo)記的抗抗體檢測(cè)相應(yīng)的抗體。3試驗(yàn)和器材3.1試劑3.1.1陰性、陽(yáng)性血清。3.1.2被檢血清。3.1.3PBS(O.01M、pH7.2)。3.1.4FITC-免抗雞IgG(按說(shuō)明稀釋使用)3.1.5緩沖廿油。3.2材料3.2.1濕盒。3.2.2培養(yǎng)箱。3.2.3炎光顯微鏡。操作程序4.1感染細(xì)胞的制備用MDCC-MSB-1細(xì)胞制備雞傳染性貧血病毒感染細(xì)胞及未感染細(xì)胞(病毒培養(yǎng)技術(shù)參見有關(guān)文獻(xiàn)）4.2抗原片的制備4.2.1收集培養(yǎng)48h的細(xì)胞培養(yǎng)物,1500r/min離心10min,棄上清液.用PBS洗滌細(xì)胞沉淀物三歡，以少量PBS重懸細(xì)胞。4.2.2取10“L細(xì)胞懸液

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