標(biāo)準(zhǔn)解讀

GB/T 19563-2004 是一項(xiàng)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，全稱(chēng)為《大豆種子品種鑒定實(shí)驗(yàn)方法 簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)法》。該標(biāo)準(zhǔn)于2004年發(fā)布，旨在為大豆種子的品種鑒定提供一套科學(xué)、統(tǒng)一的方法，以確保種子質(zhì)量控制和新品種保護(hù)工作的準(zhǔn)確性與規(guī)范性。

標(biāo)準(zhǔn)適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于大豆（Glycine max (L.) Merr.）種子及其實(shí)物樣品的品種真實(shí)性鑒定。通過(guò)應(yīng)用簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)（Simple Sequence Repeats, SSR）分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)大豆品種進(jìn)行遺傳身份驗(yàn)證，幫助區(qū)分不同品種間的遺傳差異，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)大豆種子品種的精確識(shí)別。

技術(shù)原理

SSR是一種基于DNA水平的分子標(biāo)記技術(shù)，它利用存在于基因組中的簡(jiǎn)單重復(fù)核苷酸序列（如CA、AG等）作為標(biāo)記點(diǎn)。這些重復(fù)序列在不同品種間存在長(zhǎng)度多態(tài)性，即重復(fù)次數(shù)的差異，可通過(guò)PCR擴(kuò)增并電泳分離，比較條帶圖譜來(lái)鑒別品種間的遺傳差異。

實(shí)驗(yàn)流程

  1. 樣本采集與保存：按照標(biāo)準(zhǔn)要求采集大豆種子或植株樣本，確保樣本的代表性與完整性。
  2. DNA提取：從樣本中提取高質(zhì)量的總DNA，為后續(xù)的PCR反應(yīng)提供模板。
  3. 選擇引物：根據(jù)已知的大豆SSR位點(diǎn)信息，選擇具有高多態(tài)性的SSR引物對(duì)。
  4. PCR擴(kuò)增：使用選定的引物對(duì)DNA模板進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），擴(kuò)增包含SSR序列的目標(biāo)片段。
  5. 電泳分析：將PCR產(chǎn)物通過(guò)凝膠電泳分離，依據(jù)片段大小的不同形成特定的條帶圖譜。
  6. 數(shù)據(jù)記錄與分析：記錄電泳圖譜，比較不同樣品間的條帶差異，利用專(zhuān)業(yè)的生物信息學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以確定品種間的遺傳相似度和差異。

標(biāo)準(zhǔn)意義

該標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施有助于提高大豆種子質(zhì)量監(jiān)控水平，防止品種混淆和假冒，保護(hù)種植者與育種者的權(quán)益。同時(shí)，也為大豆遺傳資源的管理和新品種的注冊(cè)、保護(hù)提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持，促進(jìn)了大豆品種改良和遺傳多樣性研究的發(fā)展。

注意事項(xiàng)

  • 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
  • 選擇的SSR引物應(yīng)具有良好的特異性和多態(tài)性，以提高鑒定的分辨率。
  • 數(shù)據(jù)分析時(shí)，綜合考慮多個(gè)SSR位點(diǎn)的結(jié)果，以提高鑒定的準(zhǔn)確性。


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  • 廢止
  • 已被廢除、停止使用，并不再更新
  • 2004-06-22 頒布
  • 2004-12-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS65.020.01B21中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19563—2004大豆種子品種鑒定實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)法Experimentalidentifieationmethodforvarietyofsoybeanseed-ISSR2004-06-22發(fā)布2004-12-01實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T19563一2004前本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局提出本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國(guó)家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化監(jiān)測(cè)與研究中心（黑龍江)黑龍江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王慶貴、徐品、姜雯、李光宇、石紹業(yè)、郝兆軍。

GB/T19563—2004目前.我國(guó)農(nóng)作物種子的鑒定多采用種植鑒定、快速測(cè)定法(苯酚染色法、大豆種皮愈創(chuàng)木酚染色法、高梁種子氫氧化鉀-漂白粉測(cè)定法、燕麥種子熒光測(cè)定法、小麥種子氫氧化鉀測(cè)定法)、聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定大麥、小麥種子純度等。這些方法所需的檢驗(yàn)周期較長(zhǎng).雖然電泳法所需時(shí)間短，但不具備分子水平鑒定的諸多優(yōu)點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，特別是20世紀(jì)90年代以來(lái).分子生物學(xué)的相關(guān)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用.其檢測(cè)對(duì)象為DNA大分子——生物的遺傳基礎(chǔ)。以DNA為檢測(cè)對(duì)象,具有許多其他檢測(cè)水平所不具備的優(yōu)點(diǎn)：首先.可供探測(cè)DNA標(biāo)記的數(shù)量是無(wú)限的.這是同工酶技術(shù)所無(wú)法比擬的；其二.DNA分析技術(shù)不像其他技術(shù)那樣隨組織或發(fā)育階段而異，植物體任何部位、任何時(shí)期提供的DNA均可用于分析，其檢測(cè)結(jié)果都是一樣的:第三.DNA分析不受環(huán)境影響,其變異只源干等位基因DNA序列的變異.這和穩(wěn)定性便于揭示品種間的遺傳變異，從而排除了環(huán)境變異所造成的表型變異?；谏鲜鰞?yōu)點(diǎn),DNA分析技術(shù)是農(nóng)、林、牧、漁等品種鑒定的先進(jìn)方法

GB/T19563-2004大豆種子品種鑒定實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了大豆種子品種鑒定的實(shí)驗(yàn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于利用簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)（ISSR)法對(duì)大豆種子品種鑒定的實(shí)驗(yàn)過(guò)程2術(shù)語(yǔ)、定義和縮略語(yǔ)2.1術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)2.1.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainreaction少至一個(gè)拷貝的特定堿基順序的DNA片斷在體外花費(fèi)幾個(gè)小時(shí)即可擴(kuò)增出數(shù)百萬(wàn)個(gè)分子的酶催化反應(yīng)，即DNA合成反應(yīng)2.1.2簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)inter-simplesequencerepeat是在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種分子標(biāo)記和檢測(cè)方法·根據(jù)某個(gè)簡(jiǎn)單重復(fù)序列（微衛(wèi)星位點(diǎn)）設(shè)計(jì)出一系列特異引物，通過(guò)PCR反應(yīng)擴(kuò)增微衛(wèi)星位點(diǎn)間隔的堿基順序,以檢測(cè)其擴(kuò)增片段長(zhǎng)度的多態(tài)性。2.1.3微衛(wèi)星DNAmmicrosatelliteDNA是一類(lèi)由幾個(gè)核苷酸(一般為1個(gè)～5個(gè)）為重復(fù)單位的長(zhǎng)達(dá)幾十至幾百個(gè)核音酸的串聯(lián)重復(fù)慶列。2.1.4核谷酸nuclcotide是構(gòu)成核酸的基本單元，由三部分組成：五碳糖、磷酸和環(huán)狀的含氮堿基2.1.5引物primer一條互補(bǔ)結(jié)合在模板DNA鏈上的短的單鏈,提供3-OH末端作為DNA合成的起點(diǎn)，延伸合成模板DNA的互補(bǔ)鏈。2.1.6引物擴(kuò)增多態(tài)性primeramplifiedpolymorphism-對(duì)引物在兩個(gè)或兩個(gè)以上不同材料基因組DNA之間擴(kuò)增，得到數(shù)目不同或長(zhǎng)度不同的DNA片斷。2.2縮略語(yǔ)下列縮略語(yǔ)適用于本標(biāo)準(zhǔn)ISSR簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)（Inter-SimpleSequence

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