醫(yī)療廢物微波消毒處理效果檢測布點與評價要求

醫(yī)療廢物微波消毒處理效果檢測布點與評價要求1指示菌的選擇及菌量抗力要求1.1單獨微波消毒工藝選擇枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372）作為生物指示物，微波與高溫蒸汽組合消毒處理工藝選擇嗜熱性脂肪桿菌芽孢（ATCC7953）和枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372）作為生物指示物。1.2細菌芽孢及含量要求：嗜熱脂肪桿菌芽孢載體含量應(yīng)為1×106～5×106CFU/載體，枯草桿菌黑色變種芽孢應(yīng)為1×106～5×106CFU/載體，自含式的生物指示物應(yīng)符合說明書的要求。1.3細菌芽孢抗力的要求：嗜熱脂肪桿菌芽孢，在121℃條件下，D≥1.5min。菌種選擇及菌種抗力參見《消毒技術(shù)規(guī)范》和衛(wèi)生學(xué)評價的有關(guān)要求。2染菌載體選擇要求2.1單獨微波消毒處理工藝載體為輸液管（內(nèi)徑3mm、長度為破碎設(shè)備說明書中規(guī)定的最長破碎長度）。2.2微波與高溫蒸汽組合消毒處理工藝載體為輸液管（內(nèi)徑3mm、長度為破碎設(shè)備說明書中規(guī)定的最長破碎長度）或使用自含式生物指示物。2.3按《消毒技術(shù)規(guī)范》或相應(yīng)的消毒檢測方法制備染菌載體。3染菌載體布點要求3.1單獨微波消毒處理工藝每次試驗應(yīng)在設(shè)備進料口連續(xù)等間距加入至少10個染菌載體。3.2微波與高溫蒸汽組合消毒處理工藝消毒艙（＜5m3）內(nèi)至少放置10個染菌載體于不同的位置。3.3以上情況均應(yīng)包括艙內(nèi)或連續(xù)消毒處理線上最難消毒的位置，該位置應(yīng)由廠商提供，如果廠商不能提供，應(yīng)先進行預(yù)試驗找出艙內(nèi)或連續(xù)消毒處理線上最難消毒的部位。4消毒處理效果檢測要求4.1試驗器材a）試驗菌株：按1.1進行選擇。b）洗脫液：含0.1%吐溫80的磷酸鹽緩沖液（0.03mol/L，pH7.2）。c）培養(yǎng)基：嗜熱脂肪桿菌芽孢可使用嗜熱脂肪桿菌恢復(fù)瓊脂培養(yǎng)基，枯草桿菌黑色變種芽孢可使用胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基。d）載體：單獨微波消毒處理工藝載體為輸液管（內(nèi)徑3mm、長度為破碎設(shè)備說明書中規(guī)定的最長破碎長度）；微波與高溫蒸汽組合消毒處理工藝載體為輸液管（內(nèi)徑3mm、長度為破碎設(shè)備說明書中規(guī)定的最長破碎長度）或使用自含式生物指示物。e）模擬醫(yī)療廢物管腔：一次性使用輸液器去掉針頭部分，直徑為3mm、長度為1.9m。f）刻度吸管：刻度為1.0mL、5.0mL、10.0mL。g）移液器：刻度為10μL、20μL及配套的塑料吸頭。h）無菌平皿：直徑90mm。i）培養(yǎng)箱：枯草桿菌黑色變種芽孢應(yīng)采用37℃恒溫培養(yǎng)箱。嗜熱脂肪桿菌芽孢應(yīng)采用56℃恒溫培養(yǎng)箱。j）模擬醫(yī)療廢物：按廠家說明書的要求，準(zhǔn)備干凈的各種醫(yī)療用品，數(shù)量應(yīng)符合滿載的要求。4.2染菌載體的制備4.2.1芽孢懸液的制備按《消毒技術(shù)規(guī)范》的方法制備枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372）懸液，芽孢含量為108～109CFU/mL。從有資質(zhì)的生產(chǎn)企業(yè)購買或自制嗜熱性脂肪桿菌芽孢（ATCC7953）懸液，芽孢含量為1×108～1×109CFU/mL，在121℃條件下，D≥1.5min。4.2.2輸液管染菌載體的制備用移液器吸取10μL芽孢懸液，置入用作載體的輸液管內(nèi)，輕輕擠壓，使其均勻分布于管腔內(nèi)，將載體放入無菌平皿內(nèi)，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱或56℃恒溫培養(yǎng)箱中干燥，制成染菌載體備用，每個染菌載體的芽孢回收數(shù)量應(yīng)為1×106～5×106CFU/載體。4.2.3不銹鋼針染菌載體的制備用兩個小鐵夾子夾住用作載體的不銹鋼針兩端，將其橫向支撐起來，用10μL移液器吸取芽孢懸液并滴染不銹鋼針，每根不銹鋼針滴染5滴，在室溫自然晾干制成染菌載體，每個染菌載體的芽孢回收數(shù)量應(yīng)為1×106～5×106CFU/載體。將染菌載體放置于1.9m長的模擬醫(yī)療廢物管腔的中間部位，然后盤起該管腔（以防止不銹鋼針染菌載體移動），放入180mm×120mm的無菌布袋內(nèi)備用。4.3消毒處理效果檢測4.3.1將至少10個染菌載體，按3的要求放入消毒處理設(shè)備中，在滿載的條件下，按說明書的消毒處理程序進行消毒處理。4.3.2消毒處理過程結(jié)束后，立即在消毒處理設(shè)備出口處的醫(yī)療廢物中收集輸液管染菌載體或打開消毒艙取出染菌載體，以無菌操作方式獲取至少10個染菌載體，分別用無菌剪刀剪碎后放入含有5mL洗脫液的試管中，將試管在手掌上振打200次，做10倍系列稀釋。選擇適宜稀釋度，分別吸取1mL，以傾注法接種于兩個平皿中，置37℃恒溫培養(yǎng)箱或56℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，計數(shù)存活菌數(shù)，作為實驗組，使用自含式生物指示物按說明書要求培養(yǎng)。4.3.3分別取2個輸液管染菌載體放在室溫下，不經(jīng)消毒處理，待實驗組達到規(guī)定作用時間后，分別用無菌剪刀將該染菌載體剪碎后，放入含5mL洗脫液的試管中，其余試驗步驟與上述實驗組相同，作為陽性對照組。4.3.4分別取洗脫液各1mL，接種至2個無菌平皿，倒入15～20mL同批次的培養(yǎng)基，并與實驗組做同樣培養(yǎng)，作為陰性對照組。4.3.5以上試驗重復(fù)3次。5評價規(guī)定5.1經(jīng)3次重復(fù)試驗，每次試