試驗(yàn)四人毛囊DNA的快速提取及PCR檢測性別M_第1頁
試驗(yàn)四人毛囊DNA的快速提取及PCR檢測性別M_第2頁
試驗(yàn)四人毛囊DNA的快速提取及PCR檢測性別M_第3頁
試驗(yàn)四人毛囊DNA的快速提取及PCR檢測性別M_第4頁
試驗(yàn)四人毛囊DNA的快速提取及PCR檢測性別M_第5頁
已閱讀5頁,還剩21頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

實(shí)驗(yàn)四人毛囊DNA的快速提取及PCR方法檢測SRY基因判斷性別實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆彰褼NA的快速提取方法及其原理掌握DNA的電泳檢測技術(shù)學(xué)習(xí)PCR擴(kuò)增DNA的原理,掌握PCR操作步驟掌握利用PCR技術(shù)擴(kuò)增SRY基因判斷性別的原理試驗(yàn)內(nèi)容一毛囊DNA的快速提取與檢測二PCR擴(kuò)增進(jìn)行性別鑒定前期準(zhǔn)備前期處理:挑出毛發(fā)10根,盡量剪短至只剩下毛囊,去除毛根,放入干凈的EP管中。加入PH8.0的滅菌水清洗1-2次,離心后吸出水PCR擴(kuò)增進(jìn)行性別鑒定PCR試驗(yàn)原理聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)是當(dāng)今現(xiàn)代分子生物學(xué)的三大主流技術(shù)之一。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物檢測用濃度為1-2%的瓊脂糖凝膠對PCR產(chǎn)物(DNA)進(jìn)行電泳分離。

瓊脂糖凝膠中有很多小孔隙,起一個分子篩的作用,DNA在電場的作用下由負(fù)極往正極移動穿過這些孔隙,DNA遷移速率與電場強(qiáng)度成正比,與DNA分子量大小成反比。從而將大小不同的DNA片段分離開來。SRYPCR產(chǎn)物大?。?01bpGAPDHPCR產(chǎn)物大?。?65bpPCR擴(kuò)增體系10ul總體系:H2O7×10=70Buffer1.010Primer-F0.33Primer-R0.33dNTP0.33Taq0.11Template(毛囊DNA)1.0ul

PCR擴(kuò)增程序95℃,4min;94℃,30s;60℃,30s;72℃,30s;Goto230循環(huán)72℃,5min;4℃,5min.方法一酚仿抽提法試劑:10%SDS、蛋白酶K(20mg/ml)、苯酚、氯仿、異戊醇、乙醇TE10mmol/LTris-Hcl,PH=8.0;1mmol/LEDTA,PH=8.0步驟酚仿抽提法優(yōu)缺點(diǎn):該方法提取的DNA濃度不是很高,中間步驟過多會損失大量的DNA,所以如果是很細(xì)小的毛,并且量不多,不建議使用此方法。但是此方法提取的DNA質(zhì)量較好,擴(kuò)增效果好。

酚仿抽提法圖1.酚仿抽提法檢測結(jié)果方法二、堿裂解法于裝有毛囊的EP管中加入0.2mol/L的NaOH溶液50μL,煮沸15min后,瞬時離心,吸取上清液至另外一只干凈的離心管中加入PH=6左右的Tris–HCl50μL,13000r離心2min將上清液轉(zhuǎn)移到另外一只EP管中即可。方法二、堿裂解法優(yōu)缺點(diǎn):該方法提取步驟較簡單,提取周期短,并且DNA損失量較少,提取效率高。但PH值不容易調(diào)節(jié)以至于會影響到后續(xù)PCR擴(kuò)增。因此如果PCR擴(kuò)增效率不高的引物,不建議用該方法提取。方法三、PCR擴(kuò)增法

試劑:10×PCR緩沖液、Mg2+、蛋白酶K(20mg/ml)實(shí)驗(yàn)步驟:按以下體系配制毛囊裂解液:

10×PCR緩沖液100μLMg2+80μL

蛋白酶K(20mg/ml)1μLddH2O819μL方法三、PCR擴(kuò)增法加入上述裂解液15μL于放有毛囊的EP管中在PCR儀上設(shè)置一個單循環(huán)程序:

65℃30min,95℃15min,4℃10min。將上一步驟中的PCR試管放入預(yù)熱好的PCR儀中,運(yùn)行該程序;吸取上清液于干凈的EP管中即可;

方法三、PCR擴(kuò)增法優(yōu)缺點(diǎn):該方法提取DNA的效率較高,可獲得較多的DNA,并且需要的毛囊量較少。較細(xì)且少量的毛囊建議用此方法提取DNA。但是該方法抽提的DNA質(zhì)量不是很好,擴(kuò)增的時候需加大DNA加入量,并且擴(kuò)增的結(jié)果中可能會有大量雜帶。圖2:PCR法抽提檢測結(jié)果

電泳檢測制備1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測DNA具有結(jié)合EB分子的能力,在紫外燈下產(chǎn)生熒光的信號二PCR擴(kuò)增進(jìn)行性別鑒定性別鑒定原理

人類男性的性染色體組成是XY,女性的性染色體組成是XX,因而通過對一些在Y染色體上所特有的基因(如SRY基因)進(jìn)行PCR擴(kuò)增分析,即可對性別進(jìn)行鑒定。

本試驗(yàn)通過對毛囊DN

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論