殘留溶劑GC檢查

殘留溶劑GC檢查內(nèi)容提綱一、殘留溶劑簡介二、檢測器三、溶媒四、供試品溶液的配制五、頂空瓶中樣品體積六、色譜柱七、溫度八、進樣方式九、提高靈敏度十、提高分離度十一、未知峰歸屬十二、方法驗證一、殘留溶劑簡介ICH關(guān)于殘留溶劑的定義藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)工藝中，以及在制劑制備過程中使用過或產(chǎn)生的有機揮發(fā)物。它們在實際的生產(chǎn)工藝中未能被完全去除。由于殘留溶劑沒有療效，故所有的殘留溶劑應(yīng)盡可能除去，以符合產(chǎn)品規(guī)范、GMP或其它基本的質(zhì)量要求。一、殘留溶劑簡介分類

第一類溶劑：人體致癌物、疑為人體致癌物或環(huán)境危害物

第二類溶劑

有非遺傳致癌毒性或其他不可逆毒性、或其他嚴重的可逆毒性

第三類溶劑

對人體低毒

第四類溶劑

尚無足夠毒理學(xué)資料

由于殘留溶劑沒有療效，故所有的殘留溶劑應(yīng)盡可能除去，以符合產(chǎn)品規(guī)范、GMP或其它基本的質(zhì)量要求。一、殘留溶劑簡介相關(guān)規(guī)定

ICHQ3C—殘留溶劑指南ChP2010、USP36、BP2009、EP7.0、JP16

二、檢測器FID（火焰電離）——質(zhì)量型檢測器，適用于有機物NPD（熱表面電離）——氮/磷化合物ECD（化學(xué)電離）——半選擇性的檢測器，適用于電負性物質(zhì)（鹵代烴）。多數(shù)情況下，三氯甲烷、DMF、DMSO均用FID檢測，但需采取一些措施提高檢測靈敏度。四氯化碳則必須用ECD檢測器。三、溶媒選擇原則：溶解樣品，并對色譜柱無損壞，不干擾測定。例如：直接進樣不能含GC不能分析的無機鹽

頂空進樣溶媒：首選水，其次DMF、DMSO、不揮發(fā)酸堿溶液，不可使用鹽酸溶液和氨水，可選擇在80～90℃加熱能溶解樣品的試劑。頂空進樣溶媒：如待查成分為苯、甲苯、三氯甲烷等水溶性不好的溶劑，可采用混合液，即先用少量乙醇或甲醇溶解待查溶劑再用水稀釋。頂空進樣溶劑：當待測溶劑在有機相中的分配系數(shù)明顯大于水相（例如三氯甲烷），對頂空進樣來說采用有機相如DMF為溶劑不是很好的選擇；如果樣品也只能在有機相中溶解，建議采用混合液。直接進樣溶媒：水、合適的有機溶媒或混合液。對于非極性色譜柱，水對柱有影響，會縮短柱的使用壽命。四、供試品溶液的配制不可超聲或加熱助溶，以免殘留溶劑揮發(fā)；如果頂空進樣，樣品置頂空瓶封蓋之后可以超聲或加熱溶解。大顆粒樣品不可以研磨取樣，只能取原態(tài)樣品（或冷凍粉碎）。四、供試品溶液的配制頂空進樣方式要求對照品配制與供試品配制方法應(yīng)絕對一致，否則頂空瓶中氣液平衡狀態(tài)有差異（基質(zhì)效應(yīng)）。對照品配制最好采用標準加入法。五、頂空瓶中樣品體積Cg＝Co/（K＋β）其中β＝Vg/Vs，K＝Cs/Cg，當K>>β時，樣品體積改變對靈敏度影響很小。當K<<β時，影響很大。頂空樣品瓶中的樣品體積（Vs）對分析結(jié)果影響很大，因為它直接決定了相比β。五、頂空瓶中樣品體積例如：分析水中的二氧六環(huán)和環(huán)己烷，60oC平衡，兩者的K分別為642、0.04。當樣品體積由1ml增加至5ml，二氧六環(huán)的峰面積只提高了1.3％，而環(huán)己烷卻提高了452％。根據(jù)實際經(jīng)驗來說，20ml頂空瓶樣品裝量為5ml比較適當。六、色譜柱殘留溶劑檢查大多需要較高的分離度和檢測靈敏度，通常采用毛細管色譜柱。填充柱口徑大，造成溶劑峰擴散，檢測靈敏度低＊實踐證明，使用非極性至中等極性色譜柱，配合適當柱溫梯度可分離大部分有機溶劑。通常待查溶劑數(shù)目僅兩、三種時，可用極性較強的色譜柱，出峰快，分析時間短；當溶劑數(shù)目較多時，還是優(yōu)選非極性至中等極性柱，分離較好。非極性柱弱極性柱中低極性柱中等極性柱商品名DM-1,DB-1,HP-1,SPB-1,BP-1,SE-30,Rtx-1,ZB-1,AT-1,CP-Sil5CB等DM-5,DB-5,HP-5,SPB-5,BP-5,SE-52,Rtx-5,ZB-5,PE-5,SE-54,CP-Sil8CB等DM-35,DB-35,HP-35,SPB-35,BP-35,Rtx-35,ZB-35,等DM-1701,HP-1701,SPB-7,ZB-1701,Rtx-1701,CP-Sil19CB等化學(xué)成分100％二甲基聚硅氧烷5%苯基-甲基聚硅氧烷35%苯基65%甲基聚硅氧烷14%氰苯基86%甲基聚硅氧烷六、色譜柱中等/強極性極性柱極性柱商品名DB-225,HP-225,SP-225,BP-225,DB-23，Rtx-225,AT-225,OV－225等DB-WAX,HP-INNOWAX,DB-WAXetr,CP-WAX,ZB-WAXDB-FFAP,HP-FFAP,CP-FFAP，OV-3501等化學(xué)成分50％氰丙基甲基聚硅氧烷聚乙二醇（PEG）硝基對苯二酸改性的聚乙二醇五、色譜柱七、溫度色譜柱：初溫應(yīng)接近樣品中最輕組分的沸點，而終溫則取決于最重組分的沸點，升溫速率則要依樣品的復(fù)雜程度。進樣口：一般接近沸點最高的組分，但要低于易分解組分的分解溫度。常用的條件是200～250oC。檢測器：原則是避免流出色譜柱的組分冷凝。FID檢測器通常設(shè)置為250～300oC。頂空瓶平衡溫度：溫度越高，蒸汽壓越高，頂空氣體的濃度越高，分析靈敏度越高。待測組分的沸點越低，對溫度越敏感。但溫度的改變只影響分配系數(shù)K，并不影響相比β。Cg＝Co/（K＋β）

七、溫度例如：水溶液中的甲醇、甲乙酮、甲苯、正己烷和四氯乙烯，80oC平衡溫度與40oC平衡溫度相比，甲醇在頂空氣體中的濃度增加5.15倍，甲乙酮濃度增加2.61倍，甲苯只增加25%，而正己烷和四氯乙烯，分別增加2.6%和10.4%。

七、溫度實際工作中往往是在滿足靈敏度的條件下，選擇較低的平衡溫度。過高的溫度可能導(dǎo)致某些組分的分解和氧化。一般采用高沸點溶劑時，樣品比較穩(wěn)定的情況下，推薦80oC左右的平衡溫度。注意：平衡溫度過高頂空瓶會爆瓶七、溫度八、進樣方式作為殘留溶劑檢查，頂空進樣有許多優(yōu)越性，不需要對樣品進行特殊處理，不用擔(dān)心樣品中不揮發(fā)組分對GC分析的影響。直接進樣對儀器要求低，由于部分實驗室不具備頂空進樣器，該方法的應(yīng)用也具普遍性。八、進樣方式對于待測溶劑在溶解樣品的溶劑中溶解度?。ǚ峙湎禂?shù)?。┑那闆r下，例如三氯甲烷在水溶液中，采用頂空進樣方式測得的靈敏度將大于直接進樣；反之，例如甲醇與水互溶性好，直接進樣的靈敏度將大于頂空進樣。測定二氯甲烷、三氯甲烷等鹵代烴時，如果溶劑為水，直接進樣容易造成FID檢測器滅火，此時優(yōu)選頂空進樣。八、進樣方式無論是采用細口徑或粗口徑，均可選擇不分流進樣，提高靈敏度。當然，采用不分流進樣也要考慮溶媒性質(zhì)，揮發(fā)性太大的溶媒對色譜柱污染較大。直接進樣要考慮樣品性質(zhì)。頂空進樣體積可達到1ml氣體，而直接進樣只能1至3ul液體。八、進樣方式甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷等一般不宜用頂空進樣方式測定九、提高靈敏度

對于限度要求很嚴格的溶劑，或貴重樣品取樣量有限制時，或檢測器對該溶劑靈敏度低的情況下＊，采取一些措施提高靈敏度是方法成敗的關(guān)鍵。溶劑溫度不分流進樣頂空瓶體積九、提高靈敏度利用鹽析作用，即在水溶液中加入無機鹽來改變揮發(fā)性組分的分配系數(shù)。常用高濃度，甚至用飽和濃度。鹽析作用對極性組分的影響遠大于對非極性組分的影響。

例如：在水溶液樣品溶劑中加入0.01mol/L氯化鈉溶液可使甲醇、乙醇靈敏度提高5倍（這種方法不常用）。九、提高靈敏度在有機溶液中加入水，可以減少有機物在有機相中的溶解度，增大其在頂空氣體中的含量（常用）。例如：采用FID檢測器測定三氯甲烷，DMF為溶媒，頂空進樣1ml氣體，分流比5：1，限度濃度的對照品溶液檢不出峰。

改變條件可檢出很明顯的色譜峰，靈敏度可達到限度的五十分之一。十、改善分離度程序升溫增大分流比使用不同