植物蛋白質提取方法總匯

1植物組織蛋白質提取方法1、根據樣品重量（1g樣品加進3.5ml提取液，可根據材料不同適當加進）,預備提取液放在冰上。2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加進提取液中在冰上靜置（3-4小時）。3、用離心機離心8000rpm40min4°C或11100rpm20min4°C4、提取上清液，樣品制備完成。蛋白質提取液：300ml1、1Mtris-HCl(PH8)45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g這種方法針對SDS，垂直板電泳！植物組織蛋白質提取方法氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨葉片2、加進樣品體積3倍的提取液在-20€的條件下過夜，然后離心（4€8000rpm以上1小時）棄上清。3、加進等體積的冰浴丙酮（含0.07%的0-巰基乙醇），搖勻后離心（4€8000rpm以上1小時），然后真空干燥沉淀，備用。4、上樣前加進裂解液，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心（15°C8000rpm以上1小時或更長時間以沒有沉淀為標準），可臨時保存在4°C待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后可分裝放進-80°C備用。藥品：提取液：含10%TCA和0.07%的0-巰基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的往離子水中（終體積為5ml）使用前再加進1M的DTT65ul/ml。這種方法針對雙向電泳，雜質少，離子濃度小的特點！當然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會減少！3組織：腸黏膜目的：WESTERNBLOT檢測凋亡相關蛋白的表達應用TRIPURE提取蛋白質步驟：含蛋白質上清液中加進異丙醇：（1.5ml每ImITRIPURE用量）倒轉混勻，置室溫10min離心：12000g，10min，4度，棄上清加進0.3M鹽酸胍/95%乙醇：（2ml每ImITRIPURE用量）振蕩，置室溫20min離心：7500g，5min，4度，棄上清重復0.3M鹽酸胍/95%乙醇步2次沉淀中加進100%乙醇2ml充分振蕩混勻，置室溫20min離心：7500g，5min，4度，棄上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀離心：10000g,10min,4度取上清-20度保存（或可直接用于WESTERNBLOT）存在的題目：加進1%SDS后沉淀不溶解，還是很大的一塊，4度離心后又多了白色沉定，SDS結晶？測濃度，含量才1mg/ml左右。解決：提蛋白試劑盒，另外組織大小適中，要碎，立即加2XBUFFER，然后煮5－10分鐘，效果很好的。植物材料：水稻苗，葉鞘，根1、200毫克樣品置于冰上磨碎2、加lysisbuffer，離心，10000rpm，4度，5min取上清3、重復離心5minlysisbuffer：ureanp-40ampholine2-mepvp-40蛋白質樣品制備秧苗蛋白質樣品的提取按Davermal等（1986）的方法進行。100mg材料剪碎后加進10mgPVP-40（聚乙烯吡咯烷酮）及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加進1.5ml10%三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%0-巰基乙醇），混勻，-20°C沉淀1小時，4°C，15000r/min離心15min，棄上清，沉淀復溶于1.5ml冷丙酮（含1OmM0-巰基乙醇），再于-20°C沉淀1小時，同上離心棄上清，（有必要再用80%丙酮（含1OmM0-巰基乙醇所得沉淀低溫冷凍真空抽干。按每mg干粉加進20叫可調）UKS液[9.5M尿素,mM碳酸鉀,.25%SDS,0.5%DTT（二硫蘇糖醇）,2%Ampholine（AmershamPharmaciaBiotechlnc,pH3.5-10）,6%TritonX-100],37C溫育30min,期間攪動幾次，28度（溫度低，高濃度的尿素會讓溶液結冰）16000r/min離心15min，離心力越大時間長一點越好！上清即可上樣電泳?；蛘?70度保存6植物根中蛋白質的抽?。?