標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 25168-2010 畜禽cDNA文庫(kù)構(gòu)建與保存技術(shù)規(guī)程》是由中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)發(fā)布的一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，旨在規(guī)范畜禽來(lái)源的cDNA（互補(bǔ)DNA）文庫(kù)構(gòu)建及保存過(guò)程中所采用的技術(shù)方法和操作流程。該標(biāo)準(zhǔn)適用于以畜禽為材料進(jìn)行基因表達(dá)研究時(shí)所需建立的cDNA文庫(kù)工作。

根據(jù)文檔內(nèi)容，首先明確了術(shù)語(yǔ)定義，包括但不限于cDNA文庫(kù)、載體等關(guān)鍵概念，為后續(xù)章節(jié)的理解奠定基礎(chǔ)。接著詳細(xì)描述了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段的要求，比如試劑的選擇與配置、實(shí)驗(yàn)器材的清潔消毒以及樣本采集處理的具體步驟。對(duì)于cDNA合成部分，則具體介紹了從總RNA提取到第一鏈cDNA合成直至雙鏈cDNA制備完成整個(gè)過(guò)程的操作細(xì)節(jié)，并對(duì)每一步驟中可能遇到的問(wèn)題給出了相應(yīng)解決策略。此外，還特別強(qiáng)調(diào)了在構(gòu)建cDNA文庫(kù)時(shí)選擇合適載體的重要性，并列舉了幾種常用的克隆載體類型及其特點(diǎn)。

針對(duì)文庫(kù)篩選與鑒定環(huán)節(jié)，《GB/T 25168-2010》提供了多種檢測(cè)手段，如PCR擴(kuò)增法、限制性內(nèi)切酶酶切分析等，用以評(píng)估文庫(kù)質(zhì)量。同時(shí)，也指出了如何通過(guò)測(cè)序或雜交實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證目標(biāo)序列的存在與否。

最后，在保存方面，該標(biāo)準(zhǔn)提出了兩種主要方式：短期保存可采用-20℃條件下；長(zhǎng)期保存則建議使用液氮罐（-196℃）。并且對(duì)于不同類型的cDNA文庫(kù)給出了具體的保存條件建議，確保其穩(wěn)定性和可用性。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2010-09-26 頒布
  • 2011-03-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS6502030

B40..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T25168—2010

畜禽cDNA文庫(kù)構(gòu)建與保存技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationoffarmanimalscDNAlibraryconstructionandpreservation

2010-09-26發(fā)布2011-03-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T25168—2010

前言

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC274)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所

:。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人馬月輝關(guān)偉軍陸濤峰李向臣佟春玲余露露劉鵬

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T25168—2010

畜禽cDNA文庫(kù)構(gòu)建與保存技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了畜禽文庫(kù)構(gòu)建方法

cDNA。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬牛羊馬驢雞鴨鵝等畜禽文庫(kù)構(gòu)建與保存

、、、、、、、cDNA。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款凡是注日期的引用文件其隨后所有

。,

的修改單不包括勘誤的內(nèi)容或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)然而鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究

(),,

是否可使用這些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。,。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)

。

31

.

cDNAcomplementarydeoxyribonucleicacid

以成熟為模板在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成的鏈

mRNA,cDNA。

32

.

cDNA文庫(kù)cDNAlibrary

將處于特定發(fā)育階段真核生物體的特定器官或組織中提取的總經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄等一系列的生化

RNA,

反應(yīng)合成雙鏈群體后再插入到適當(dāng)?shù)妮d體上經(jīng)轉(zhuǎn)化寄主菌株構(gòu)成特定的克隆群體

cDNA,,cDNA。

33

.

寡核苷酸oligonucleotide

一類只有個(gè)以下堿基對(duì)的短鏈核苷酸的總稱常用作探針確定或的結(jié)構(gòu)

20,DNARNA。

34

.

噬菌斑plaque

被噬菌體感染的細(xì)菌所釋放的子代噬菌體會(huì)繼續(xù)感染周圍的細(xì)胞致使在瓊脂平板上生長(zhǎng)的菌苔

,,

中有大量的細(xì)胞發(fā)生裂解形成的透明區(qū)域

,。

4試劑及溶液配制

除另有規(guī)定外試劑為分析純或生化試劑實(shí)驗(yàn)用水符合一級(jí)用水的要求

,。GB/T6682。

41焦碳酸二乙酯diethypyrocarbonateDEPC處理水

.(,)

在去離子水中加入靜置高壓滅菌

1000mL1mLDEPC,37℃12h,(120℃30min)。

422mol/LMgSO4

.

稱取加雙蒸水溶解后定容到

246.50gMgSO4·H2O,400mL(doubledistilledH2O,ddH2O),

高壓滅菌

500mL,。

4310mmol/LMgSO4

.

量取加定容到高壓滅菌

1mL2mol/LMgSO4ddH2O200mL,,30min。

441mol/LTris-ClpH75

.(.)

稱取堿溶于中調(diào)至定容到高壓滅菌

121.14gTris,800mLddH2O,pH7.5,1L,。

45SM緩沖液

.

稱取量取

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