實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用操作規(guī)程

四、動(dòng)物試驗(yàn)及設(shè)施設(shè)備操作規(guī)程1、屏障設(shè)施使用操作規(guī)程人員進(jìn)出試驗(yàn)人員進(jìn)入動(dòng)物試驗(yàn)室，更換各自試驗(yàn)室的拖鞋。的拖鞋拿到內(nèi)側(cè)門(mén)邊擺放整齊，人員即可離開(kāi)，離開(kāi)前將拖鞋在消毒液中浸泡5開(kāi)一更、二更紫外燈消毒。每次進(jìn)出動(dòng)物試驗(yàn)室須填寫(xiě)記錄表。物品進(jìn)出放，不能超過(guò)兩周。夏季留意防霉防潮。墊料經(jīng)雙扉高壓蒸汽滅菌柜滅菌后傳入內(nèi)儲(chǔ)存室。泡后，再?lài)婌F消毒三遍方可進(jìn)入。傳遞窗進(jìn)入飼養(yǎng)室預(yù)備間。20—30待洗刷物品經(jīng)內(nèi)儲(chǔ)存室傳入消毒室。試驗(yàn)完畢后，試驗(yàn)用品通過(guò)內(nèi)儲(chǔ)存室傳遞窗傳出。動(dòng)物治理動(dòng)物進(jìn)入：動(dòng)物引進(jìn)應(yīng)先放入隔離檢疫室，待隔離檢疫合格后移入飼養(yǎng)室。10min。翻開(kāi)運(yùn)輸箱，取出動(dòng)物置于隔離檢疫室飼養(yǎng)盒內(nèi)。檢疫合格后進(jìn)入試驗(yàn)區(qū)。飲水：每天供給滅菌水。留意檢查瓶塞是否漏水或堵塞。壓過(guò)度的飼料，準(zhǔn)時(shí)移出，不再用于飼喂。更換墊料：每周一、四，更換墊料。周一用消毒液清洗飼養(yǎng)盒、蓋。將飼養(yǎng)10集中送相關(guān)單位做無(wú)害化處理。每次試驗(yàn)完畢后，動(dòng)物尸體及試驗(yàn)廢棄物處理時(shí)須填寫(xiě)記錄。物品消毒飼養(yǎng)室預(yù)備間。方法：將分裝好的飼料、墊料、水等物品，由外門(mén)放入真空滅菌器內(nèi)，關(guān)好直接移入飼養(yǎng)室，關(guān)好內(nèi)門(mén)。①籠具架3132℃42不能高壓蒸汽滅菌的籠具架擦拭干凈、消毒液外表消毒三遍后進(jìn)入。②飼養(yǎng)盒和墊料先去除盒內(nèi)的污物，用水將盒的內(nèi)外壁沖洗干凈，晾干。3，132℃4min，2min。7d。③墊料墊料應(yīng)選擇無(wú)毒性、無(wú)異味、無(wú)油脂、吸濕性好、粉塵少的材料。2-3cm6子不裝墊料。置于高壓蒸汽滅菌器滅菌室中。關(guān)閉高壓鍋門(mén)，滅菌參數(shù)為脈動(dòng)3次、132℃滅菌5min、枯燥3min。滅菌后的墊料貼上標(biāo)簽，標(biāo)明滅菌日期。存放7d。④飲水瓶3132℃3min2min。7d。⑤飲水20min、125℃30min。7d。⑥飼料首先檢查飼料是否腐敗、變質(zhì)，確認(rèn)質(zhì)量合格后，將飼料分裝成小袋，隨機(jī)袋與袋之間要有充分的空隙。關(guān)閉滅菌器門(mén)，滅菌參數(shù)為脈動(dòng)3次、132℃滅菌5min7d。⑦無(wú)菌水的使用僅限于飼養(yǎng)室的消毒用水。⑧衣服、毛巾用中性洗滌劑洗凈衣服、毛巾，清水沖洗干凈，晾干，疊整齊。3，132℃4min，4min。檢查指示卡顏色，確認(rèn)滅菌效果到達(dá)要求，置于其次更衣室衣柜中。⑨購(gòu)置的物品區(qū)域，進(jìn)展安裝、消毒。處進(jìn)展第三次噴霧消毒。其它物品進(jìn)入均按相應(yīng)操作規(guī)程。⑩物品的定期消毒0.5%百毒殺消毒液擦拭。b.手消毒液定期更換。IVC傳遞窗每次使用后用消毒液擦拭，紫外燈照耀15min。飲水瓶、飼養(yǎng)盒每周高壓滅菌1次，飼養(yǎng)盒蓋每月高壓滅菌一次。清潔衛(wèi)生①環(huán)境清潔消毒周四用1％甲酚皂消毒液或0.1％潔爾滅溶液擦拭或0.5％過(guò)氧乙酸噴霧消毒每周至少消毒兩次。紫外燈每天早晚開(kāi)啟兩次，每次15分，不能與日光燈同時(shí)開(kāi)啟。②試驗(yàn)用儀器設(shè)備的清洗消毒試驗(yàn)用的器和設(shè)備使用完畢后，用綢布擦拭后再用棉球蘸取75％酒精擦拭一次。掛水珠。試驗(yàn)中的燒杯、錐形瓶、量杯等一般的玻璃器皿在試驗(yàn)完畢后，用2％洗1％2～342～3③清潔液的配制(220ml1000(1％)303000ml，做為洗滌用。洗液的配制：稱(chēng)取重鉻酸鉀801001000ml導(dǎo)致爆炸事故。④消毒液的配制20ml10001％的溶液，作為室內(nèi)噴霧消毒用。40m12023m1，0.1％的溶液，作為器械等浸泡消毒用。24890.2%的消毒液。75％95％78.95m121.05m1100ml⑤每次洗刷消毒須填寫(xiě)記錄表。⑥環(huán)境掌握試驗(yàn)期間每天記錄環(huán)境溫濕度狀況。屏障環(huán)境要求：溫度20℃～26℃范圍；相對(duì)濕度40％～70％。14ppm，硫化氫含量應(yīng)低于0.0001％。準(zhǔn)時(shí)更換過(guò)濾介質(zhì)，初效每周更換二次，中效每月更換一次。⑦設(shè)備治理轉(zhuǎn)。水管、暖氣管道應(yīng)每周檢查一次，覺(jué)察問(wèn)題準(zhǔn)時(shí)解決。⑧操作失誤及補(bǔ)救措施飼料高壓過(guò)度，發(fā)黑炭化，或有發(fā)霉時(shí)，應(yīng)廢棄不用。⑨工作日程安排時(shí)間上午下午周一消毒籠具、更換墊料加水加料周二更換墊料、消毒加水加料周三高壓消毒加水加料周四消毒籠具、更換墊料加水加料周五更換墊料、消毒加水加料周六高壓消毒加水加料周日高壓消毒加水加料2過(guò)濾層清洗要求①初效箱內(nèi)初效濾層清洗要求：必需在系統(tǒng)待機(jī)狀態(tài)時(shí)更換初效3天一次，同時(shí)清理箱內(nèi)塵土。主要是依據(jù)實(shí)際狀況，見(jiàn)臟時(shí)準(zhǔn)時(shí)取下沖洗干凈后即可裝上。中效過(guò)濾袋更換要求1動(dòng)物試驗(yàn)室內(nèi)各高效過(guò)濾器更換要求33系統(tǒng)開(kāi)啟操作步驟：冬天：依次開(kāi)啟總電源、開(kāi)水泵、開(kāi)啟風(fēng)機(jī)、開(kāi)啟電加濕?？s機(jī)。系統(tǒng)關(guān)閉操作步驟：4、一般設(shè)施日常維護(hù)規(guī)程環(huán)境指標(biāo)的掌握與監(jiān)測(cè)。兔飼養(yǎng)室、兔試驗(yàn)室為開(kāi)放式，定期消毒。測(cè)記錄。各房間均安裝有紫外燈，用于環(huán)境消毒。動(dòng)物尸體裝袋放專(zhuān)用冰柜，由石家莊市醫(yī)療廢棄物處置中心負(fù)責(zé)燃燒。5操作程序滅菌前預(yù)備：0.15～0.30MPa1/3～2/3③翻開(kāi)蒸汽鍋電源進(jìn)展預(yù)熱；貼于器壁和門(mén)板，并放入化學(xué)指示卡，填寫(xiě)脈動(dòng)真空滅菌器使用登記表；⑤檢查密封圈、前封板和門(mén)板有無(wú)雜質(zhì)和損壞，用干凈的棉布進(jìn)展搽洗；滅菌操作：0.4MPa正確，啟動(dòng)運(yùn)行程序；有特別，準(zhǔn)時(shí)處理，防止意外事故發(fā)生；③做好滅菌效果的監(jiān)測(cè)，記錄存檔，便于追蹤調(diào)查；出物品；⑤滅菌物品從滅菌器中取出后，存放在指定位置，防止二次污染；滅菌后工作：①翻開(kāi)前門(mén)，關(guān)閉總電源，切斷設(shè)備掌握電源和空氣壓縮機(jī)電源；②關(guān)閉供水閥門(mén)和冷卻水閥門(mén)；維護(hù)與治理①脈動(dòng)真空滅菌器由動(dòng)物室專(zhuān)人負(fù)責(zé)治理；②蒸汽鍋進(jìn)水壓力，水位必需到達(dá)規(guī)定值時(shí)才能翻開(kāi)蒸汽鍋爐電源；用具，以免燙傷；⑤當(dāng)化學(xué)指示卡指示滅菌不合格時(shí)，應(yīng)從滅菌處理；⑥非經(jīng)培訓(xùn)過(guò)的工作人員，其他人不得亂碰和操作滅菌設(shè)備；人員聯(lián)系進(jìn)展修理，不得擅自拆卸進(jìn)展修理，并做好相應(yīng)記錄。6、熱原測(cè)溫儀操作規(guī)程熱原探頭標(biāo)定儀啟動(dòng)熱原儀標(biāo)定程序，進(jìn)入恒溫槽溫度讀數(shù)狀態(tài)。四周插入測(cè)溫探頭。37℃〔37.2℃〕即是熱原測(cè)溫儀標(biāo)定程序的第一個(gè)溫度讀數(shù)。④溫度預(yù)置開(kāi)關(guān)右旋一檔〔38℃，恒溫槽加熱，當(dāng)指示燈再次閃耀時(shí)〔37.9℃，溫度計(jì)讀數(shù)即是熱原測(cè)溫儀標(biāo)定程序的其次個(gè)溫度讀數(shù)。置可由低到高，也可由高到低。補(bǔ)償凹凸的旋鈕。WRY-2023①在啟動(dòng)計(jì)算機(jī)后，翻開(kāi)微機(jī)熱原測(cè)溫儀電源；②點(diǎn)擊Windows桌面上的pyrogen2023圖表或[開(kāi)頭/程序/熱原測(cè)定程序2023]菜單項(xiàng)，啟動(dòng)熱原測(cè)定程序；〔必需對(duì)更換探頭標(biāo)定后再測(cè)溫〕或臨時(shí)拔掉不窗口；用的家兔體重輸入表格中，按[返回]按鈕回到主窗口。的藥品的名稱(chēng)、批號(hào)、劑量、規(guī)格、初試升溫總和〔對(duì)于初試請(qǐng)輸入0，對(duì)于復(fù)3〕輸入表格中，按[關(guān)閉]按鈕返回到主窗口。⑥點(diǎn)擊工作欄上溫度測(cè)定按鈕，翻開(kāi)測(cè)溫窗口，按[預(yù)覽]后半小時(shí)，按[開(kāi)頭點(diǎn)擊[完畢]按鈕，將終止測(cè)溫。移入選上兔表中；通過(guò)點(diǎn)擊[排序]按鈕，客隊(duì)選上圖及落選圖表中的家兔排序；15時(shí)使用。注射完畢后輸入室溫，按[連續(xù)]按鈕，將翻開(kāi)測(cè)溫窗口。30分鐘記錄一次體溫，共6210口。⑨點(diǎn)擊工具欄上記錄按鈕，翻開(kāi)查詢(xún)、追加、打印記錄窗口，在窗口中可通過(guò)輸入查詢(xún)、打印條件〔試驗(yàn)日期、藥品名稱(chēng)、批號(hào)可選任一項(xiàng)，假設(shè)有試驗(yàn)日〕然后輸入欄被清空，這時(shí)可輸入試驗(yàn)數(shù)據(jù)，再按[追加]按鈕將輸入的試驗(yàn)結(jié)果保存，按[關(guān)閉]按鈕回到主窗口。7試驗(yàn)設(shè)計(jì)有重復(fù)性、牢靠性、適用性和可控性，另外還要經(jīng)濟(jì)、宜行。動(dòng)物及環(huán)境①環(huán)境的預(yù)備。在引入試驗(yàn)動(dòng)物之前必需嚴(yán)格掌握試驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室及試驗(yàn)及通風(fēng)，防止途中試驗(yàn)動(dòng)物被污染或窒息死亡。料要滿(mǎn)足動(dòng)物的各個(gè)時(shí)期或不同微生物等級(jí)動(dòng)物的不同需要。③動(dòng)物的預(yù)備。在購(gòu)入或領(lǐng)取動(dòng)物時(shí)，應(yīng)留意向供給部門(mén)索取以下資料：合格證書(shū)；e.飼育單位負(fù)責(zé)人簽名。8解剖試驗(yàn)則必需無(wú)痛處死后，固定于蠟盤(pán)再進(jìn)展。大鼠：輕輕抓住大鼠尾巴提起，置于試驗(yàn)臺(tái)上，用玻璃鐘罩扣住或置作時(shí)，試驗(yàn)者應(yīng)戴上棉紗手套〔有閱歷者也可不戴，右手輕輕抓住大鼠的尾巴即可將大鼠固定在左手中，右手進(jìn)展操作。環(huán)握頸部，另一只手托住其臀部，即可輕輕提起、固定。前阻攔它跑動(dòng)。然后一只手抓住兔的頸部皮毛，將兔提起，用另一只手托其臀部，或用一只手抓住背部皮膚提起來(lái)，放在試驗(yàn)臺(tái)上，即可進(jìn)展采血、注射等操作。9試驗(yàn)動(dòng)物給藥①注射給藥法刺入，把針尖輕輕向左右搖擺，簡(jiǎn)潔搖擺則說(shuō)明已刺入皮下，然后注射藥物。棉簽輕按片刻。肌肉注射：注射時(shí)針頭要垂直快速刺入肌肉，如無(wú)回血現(xiàn)象即可注射。0.5cm，再使針頭與皮膚呈45°角方向穿過(guò)腹肌刺入腹腔，此時(shí)有落空感，回抽無(wú)腸液、尿液后，緩緩?fù)迫胨幰?。靜脈注射：小鼠、大鼠的靜脈注射：常承受尾靜脈注射。操作時(shí)，先將動(dòng)物固定在暴露75％酒精棉球反復(fù)擦拭使血管擴(kuò)張，并可使表皮角質(zhì)軟化，注射量為0.1～0.2ml/10g體重。特別留意。兔的靜脈注射：一般承受外耳緣靜脈，因其表淺易固定。注射部位指夾住靜脈的近心端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)心端，無(wú)名指及小指墊在下面，右手持注射器，盡量從靜脈的遠(yuǎn)端刺入血管，移動(dòng)拇指于針頭上以固定，放開(kāi)食、中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻以止血。②經(jīng)口給藥法口服法：把藥物放入飼料或溶于飲水中讓動(dòng)物自動(dòng)攝取。注射器和特別的灌胃針構(gòu)成或直接承受灌胃管。0.2～1ml，1～4ml，1～5ml。③其他途徑給藥方法過(guò)動(dòng)物呼吸道給藥。藥液經(jīng)皮膚吸取。脊髓腔內(nèi)給藥：此法主要用于錐管麻醉或抽取腦脊液。腦內(nèi)給藥：此法常用于微生物學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)，將病原體等接種于被檢動(dòng)物腦內(nèi)，然后觀看接種后的各種變化。直腸內(nèi)給藥：此方法常用于動(dòng)物麻醉。關(guān)節(jié)腔內(nèi)給藥：此法常用于關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型的復(fù)制。人與動(dòng)物的用藥量換算方法比例進(jìn)展換算：人用藥量 1小鼠、大鼠 25～50豚鼠 15～20按動(dòng)物體外表積計(jì)算的方法：量可以通過(guò)體外表積進(jìn)展換算，公式如下：A＝K×〔W2／3／10000〕A＝體外表積，m2W＝體重，ｇK＝常數(shù)：K小鼠、大鼠＝9.1 K豚鼠＝9.8 K人＝10.6試驗(yàn)動(dòng)物采血①大鼠、小鼠的采血方法5mm，從尾部向尾尖部按摩，血即0.4ml。眼眶后靜脈叢采血。左手拇指及食指抓住鼠兩耳之間的皮膚使鼠固定，一次可采血0.2～0.3ml，大鼠一次可采血0.5～1.0ml。〕靜脈或頸〔股〕動(dòng)脈采血。將鼠麻醉，剪去一側(cè)頸部外側(cè)被毛，做剪斷或用注射器采血即可，股動(dòng)脈較深需先剝離，再采血。d.皮針的注射器緩緩抽取血液。一般大鼠可取血10ml左右。e.摘眼球采血。此法常用于鼠類(lèi)大量采血。采血時(shí)，用左手固定動(dòng)物，壓血液。②豚鼠采血方法在切口邊緣涂上20％的檸檬酸鈉溶液，防止血凝，則血可自切口處流出。此法每次可采血0.5ml。背中足靜脈采血。固定豚鼠，將其右或左后肢膝關(guān)節(jié)伸直，腳背消毒，馬上出血。心臟采血。用手指觸摸，選擇心跳最明顯的部位，把注射針刺入心臟，③兔的采血方法手指輕彈兔耳，使靜脈擴(kuò)張，用針頭刺耳緣靜脈末端，或用刀片沿血管方向割破一小切口，血液即流出。本法為兔最常用的采血方法，可屢次重復(fù)使用。動(dòng)脈。用左手固定兔耳，右手持注射器，在中心動(dòng)脈的末端，沿著與動(dòng)脈平行的向心方向刺入動(dòng)脈，即可見(jiàn)血液進(jìn)入針管。由于兔耳中心動(dòng)脈簡(jiǎn)潔痙攣，故抽血前必需讓兔耳充分充血，采血時(shí)動(dòng)作要快速。采血所用針頭不要太細(xì)，一般用6號(hào)針頭，針刺部位從中心動(dòng)脈末端開(kāi)頭，不要在近耳根部采血。頸靜脈采血。方法同小鼠、大鼠的頸靜脈采血。心臟采血。使家兔仰臥，穿刺部位在第三肋間胸骨左緣 頭刺入心臟后，持針手可感覺(jué)到兔心臟有節(jié)律的跳動(dòng)。此時(shí)如還抽不到，以防弄傷兔的心、肺。試驗(yàn)動(dòng)物的處死物安樂(lè)死方法的選擇取決于動(dòng)物的種類(lèi)與爭(zhēng)論的課題。①大鼠和小鼠按住鼠頭。將脊髓與腦髓拉斷，鼠便馬上死亡。斷頭法。用剪刀在鼠頸部將鼠頭剪掉，鼠馬上死亡?；蛴媚惧N用力擊打鼠頭部也可致死。亡。藥物致死法。吸入肯定量的一氧化碳、乙醚、氯仿等均可使動(dòng)物致死。②豚鼠、家兔空氣栓塞法。向動(dòng)物靜脈內(nèi)注入肯定量的空氣，使之發(fā)生栓塞而死。10cm的橫切口，把股動(dòng)、靜脈全切斷，馬上噴出血液。用一塊濕紗使股動(dòng)脈切口保持暢通，動(dòng)物在3～5min內(nèi)即可致死。承受此種方法，動(dòng)物格外安靜，對(duì)臟器無(wú)損傷，對(duì)活殺采集病理切片標(biāo)本是一種較好的方法。10倫理學(xué)原則3R”原則，并遵循本國(guó)的法律和指導(dǎo)方針。試驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，要重視動(dòng)物的社會(huì)性及行為需求?！?R”原則法以削減動(dòng)物苦痛和擔(dān)憂(yōu)。①替代 主要包括用體外培育器官組織細(xì)胞等代替試驗(yàn)動(dòng)物用低等物代替高等動(dòng)物，用物理或化學(xué)方法代替動(dòng)物試驗(yàn)，或電腦模擬動(dòng)物試驗(yàn)。②削減 盡可能地削減使用試驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量。③優(yōu)化 指技術(shù)路線(xiàn)和手段的精細(xì)設(shè)計(jì)與選擇使動(dòng)物試驗(yàn)得到良好的結(jié)果并削減試驗(yàn)動(dòng)物的苦痛。依據(jù)國(guó)家科技部2023年9月30日頒發(fā)的“關(guān)于善待試驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性〔國(guó)科發(fā)財(cái)字[2023]398號(hào)〕的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。11依據(jù)中國(guó)獸藥典2023版〔一部〕附錄1141原理本法系指將肯定劑量的供試品溶液注入小鼠體內(nèi),在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀看小鼠死亡狀況，判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。試驗(yàn)方法尾靜脈注射〔5〕供試品溶液應(yīng)平衡至室溫。設(shè)備用具電熱枯燥箱、鼠盒、時(shí)鐘、鑷子、注射器(1ml)針頭(7#、4#)75%〔5〕供試品溶液應(yīng)平衡至室溫。試驗(yàn)動(dòng)物預(yù)備試驗(yàn)用小鼠應(yīng)安康合格,在試驗(yàn)前及試驗(yàn)觀看期內(nèi)，均應(yīng)按正常飼養(yǎng)條件飼養(yǎng),體重在18-22g,將稱(chēng)好體重的小鼠分別平均使用,每批供試品5只,復(fù)試時(shí)用19-21g的小鼠,每批用10只，做過(guò)本試驗(yàn)的小鼠不得重復(fù)使用。操作方法① 將各種試驗(yàn)用具及供試品溶液按肯定位置安排在工作臺(tái)上,鼠盒應(yīng)標(biāo)有②將注射器與注射針頭配套后,用少量供試品溶液洗滌三次,棄去洗液,取供試品溶液后排注射器內(nèi)的氣泡,將準(zhǔn)確調(diào)至所需量。③捉小鼠時(shí)在其身后捏住尾巴,放入固定器內(nèi),將其尾巴露在外,用左手的拇指和中指拉直,食指按在固定器上,使小鼠固定。④用鑷子取75%乙醇棉球擦試小鼠尾巴,使靜脈擴(kuò)張及消毒。⑤在尾長(zhǎng)近尾尖1/4針尖與尾巴成一適當(dāng)角度(小于30°)刺入靜脈內(nèi),平行推入少許供試品溶液。4-5秒鐘內(nèi)勻速注入供試品溶液0.5ml,并記錄時(shí)間。規(guī)定緩慢注射的品種可延長(zhǎng)至30秒。如注射部位皮下發(fā)白,且推入藥0.02ml,應(yīng)另取小鼠注射。⑦注射完畢拔出針頭,隨即左手拇指按住注射部位,并輕輕揉壓,使血液及溶液不致流出。⑧馬上將小鼠放開(kāi),將其在固定器內(nèi)自由活動(dòng),以觀看即時(shí)反響,并作記錄,然后取出小白鼠放入標(biāo)明批號(hào)組別的鼠盒內(nèi)。⑨照上法連續(xù)注射其它各鼠,在每次抽取供試品時(shí)均須將注射器內(nèi)的回血用少量供試品溶液洗滌干凈。留意事項(xiàng)①注射完畢后拔出針頭時(shí),如覺(jué)察藥液外溢較多時(shí),此小鼠應(yīng)廢棄,另取小鼠依法操作。②試驗(yàn)后,待觀看小鼠,喂養(yǎng)方法同試驗(yàn)前。③試驗(yàn)室及飼養(yǎng)室溫,一般掌握在20-26℃。非生物制品試驗(yàn)，除另有規(guī)定外，全部小鼠在給藥后48小時(shí)內(nèi)不得有死亡；非生物制品試驗(yàn)，除另有規(guī)定外，全部小鼠在給藥后48小時(shí)內(nèi)不得有死亡；如有死亡時(shí)，應(yīng)另取體重19～21g的小鼠10只復(fù)試，全部小鼠在48小時(shí)內(nèi)不得有死亡，為符合規(guī)定。生物制品試驗(yàn)要求觀看7天。觀看期內(nèi)，小鼠應(yīng)全部健存，且無(wú)特別反響，體重19～21g的小鼠10只復(fù)試1次，判定標(biāo)準(zhǔn)同前。體重19～21g的小鼠10只復(fù)試1次，判定標(biāo)準(zhǔn)同前。12、生物活性試驗(yàn)操作規(guī)程依據(jù)中國(guó)獸藥典2023版〔二部〕黃芪多糖注射液生物活性測(cè)定原理本法系指將肯定劑量的供試品溶液注入小鼠體內(nèi),在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀看小鼠脾指數(shù)的變化狀況，判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。試驗(yàn)方法腹腔注射〔5〕供試品溶液應(yīng)平衡至室溫。設(shè)備用具電熱枯燥箱、鼠盒、時(shí)鐘、鑷子、注射器(1ml)針頭(7#、4#)75%〔5〕供試品溶液應(yīng)平衡至室溫。試驗(yàn)動(dòng)物預(yù)備試驗(yàn)用小鼠應(yīng)安康合格,在試驗(yàn)前及試驗(yàn)觀看期內(nèi)，均應(yīng)按正常飼養(yǎng)條件飼養(yǎng),體重在18-20g,〔給藥組和比照組8～10只。操作方法①將各種試驗(yàn)用具及供試品溶液按肯定位置安排在工作臺(tái)上,鼠盒應(yīng)標(biāo)有供試品批號(hào),日期的標(biāo)簽。②將注射器與注射針頭配套后,用少量供試品溶液洗滌三次,棄去洗液,取供試品溶液后排注射器內(nèi)的氣泡,將準(zhǔn)確調(diào)至所需量。③用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其他粗糙外表上， 前掙扎爬行時(shí)，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚，將小鼠置于左手掌心，無(wú)名指和小指夾其背部皮膚及尾部，即可將小鼠完全固定。⑤給藥組每鼠腹腔注射供試品0.5ml，比照組每鼠腹腔注射生理鹽水0.5ml，稱(chēng)重，計(jì)算平均脾指數(shù)。④小鼠腹部用酒精棉球擦拭消毒，然后在左或右側(cè)腹部將針頭刺入皮⑤給藥組每鼠腹腔注射供試品0.5ml，比照組每鼠腹腔注射生理鹽水0.5ml，稱(chēng)重，計(jì)算平均脾指數(shù)。留意事項(xiàng)①試驗(yàn)后,待觀看小鼠,喂養(yǎng)方法同試驗(yàn)前。②試驗(yàn)室及飼養(yǎng)室溫,一般掌握在20-26℃。結(jié)果判定≥2。脾指數(shù)＝脾重〔mg〕/體重〔g〕＝組內(nèi)脾指數(shù)總和/組內(nèi)動(dòng)物數(shù)13、過(guò)敏反響試驗(yàn)操作規(guī)程依據(jù) 中國(guó)獸藥典2023版〔一部〕附錄1147原理本法系指將肯定劑量的供試品溶液注入豚鼠體內(nèi),間隔肯定時(shí)否引起動(dòng)物全身過(guò)敏反響。試驗(yàn)方法靜脈/腹腔注射設(shè)備用具及用具洗滌消毒(1ml)頭(7#、4#)、鼠籠、75%乙醇棉球。②用具洗滌消毒熱枯燥箱內(nèi)250℃30分鐘即可。試驗(yàn)動(dòng)物預(yù)備試驗(yàn)用豚鼠為清潔級(jí)DH豚鼠，體重在250-350g,雌鼠應(yīng)無(wú)孕。做過(guò)試驗(yàn)的豚鼠不得重復(fù)使用，每批供試品需6只豚鼠。操作方法① 腹腔注射標(biāo)有供試品批號(hào),日期的標(biāo)簽。將注射器與注射針頭配套后,用少量供試品溶液洗滌三次,棄去洗液,取供試品溶液后排盡注射器內(nèi)的氣泡并準(zhǔn)確調(diào)至所需量。75%乙醇d.連續(xù)3次，隔日腹腔注射供試品溶液d.連續(xù)3次，隔日腹腔注射供試品溶液0.5ml，進(jìn)展致敏。每日觀看每只動(dòng)為2314日和第211ml進(jìn)展激發(fā)。觀看激發(fā)后30分鐘內(nèi)動(dòng)物有無(wú)過(guò)敏反響病癥。②靜脈注射75%輪廓靜脈注射，右手持注射器,針尖與耳朵成一適合角度〔小于30度〕刺入靜脈內(nèi)，平行推注少許供試品溶液。馬上將注射器內(nèi)拴平行推入,在4-5秒鐘內(nèi)勻速注入供試品溶液1ml,并記錄時(shí)間,如注射部位皮下發(fā)白,且推入藥液阻力很大,表示針頭未插入靜脈內(nèi)。假設(shè)三次未注進(jìn)或藥液損失大于0.02ml,應(yīng)另取小豚鼠注射。注射完畢拔出針頭,隨即左手拇指按住注射部位,并輕輕揉壓,使血液及供試品溶液不致流出。,30否合格。3030豎毛、抖動(dòng)、干嘔、連續(xù)噴嚏3聲、連續(xù)咳嗽3聲、紫癜和呼吸困難等現(xiàn)象中的2種或2種以上，或消滅二便失禁、步態(tài)不穩(wěn)或倒地、抽搐、休克、死亡現(xiàn)象之一者，判定供試品不符合規(guī)定。14依據(jù) 中國(guó)獸藥典2023版〔一部〕附錄1142原理本法系指將肯定劑量的供試品溶液注入家兔耳緣靜脈內(nèi),觀看家兔體溫變化的狀況，以判定供試品是否具有熱原。試驗(yàn)方法耳緣靜脈注射試驗(yàn)材料及用具天平0.01mg或0.lmg、0.lmglmg、10g電熱枯燥箱，250℃以上，受熱均勻。恒溫水浴熱原測(cè)溫儀或肛門(mén)體溫計(jì)，精度0.1℃家兔固定盒，盒兩側(cè)有通氣孔。試驗(yàn)用具:注射器、燒杯、三角瓶、大稱(chēng)量瓶、吸管、移液管、外表皿、玻璃棒、廣口、直鑷、金屬制密封器〔、時(shí)鐘、脫脂棉或細(xì)軟衛(wèi)生紙?！矁?nèi)毒素檢查，含細(xì)菌內(nèi)毒素低于0.25EU/ml)、無(wú)熱原氯化鈉〔經(jīng)250℃30分鐘200℃lh或180℃2h。①供試用家兔供試用的家兔應(yīng)安康合格，體重1.7kg①供試用家兔供試用的家兔應(yīng)安康合格，體重1.7kg以上〔用于生物制品檢查用的家兔體重為1.7～3.0kg〕，雌兔應(yīng)無(wú)孕。a.推測(cè)體溫前a.推測(cè)體溫前7日即應(yīng)用同一飼料飼養(yǎng)，在此期間內(nèi)，體重應(yīng)不減輕，精3試品前7日內(nèi)推測(cè)體溫，進(jìn)展選擇。b.測(cè)量體溫時(shí)，測(cè)溫儀探頭或肛門(mén)溫度計(jì)插人肛門(mén)的深度各兔應(yīng)一樣約6cm1.5min。c.每隔30min186℃38.4～39.4℃)的范圍內(nèi)，0.4℃的家兔，可供3周內(nèi)試驗(yàn)用。7供試品名、正常體溫、溫差、結(jié)果。③家兔的重復(fù)使用>0.6℃的家兔，應(yīng)休息2周以上，重測(cè)溫選擇后使用。供試品判定為不符合規(guī)定的家兔，不再使用。51次。④復(fù)試用家兔選擇體重相近、體溫相對(duì)穩(wěn)定、正常體溫溫差小，平均值避開(kāi)使用。試驗(yàn)前的預(yù)備要求者不能使用。②用具的除熱原清洗干凈的玻璃器皿、注射器、針頭、直鑷等放入金屬250℃30min200℃lh以上或1802h以上加熱除熱原?？販貢r(shí)間應(yīng)從到達(dá)規(guī)定溫度時(shí)開(kāi)頭計(jì)時(shí)。去除熱原未曾開(kāi)啟的密封容器內(nèi)用具，可供一周