標準解讀

GB/T 28642-2012《飼料中沙門氏菌的快速檢測方法 聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)法》是一項國家標準，旨在通過聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)對飼料中的沙門氏菌進行快速檢測。該標準適用于各種類型的飼料原料及成品中沙門氏菌的定性分析。

根據(jù)標準內(nèi)容，整個檢測過程主要包括樣品準備、DNA提取、引物設(shè)計與選擇、PCR擴增條件設(shè)定、產(chǎn)物分析等幾個關(guān)鍵步驟。首先，在樣品準備階段，需要從待測飼料中取樣，并按照規(guī)定的方法處理以獲取適合后續(xù)操作的樣本。接著是DNA提取環(huán)節(jié)，這里要求使用有效的手段從處理后的樣品中分離出細菌DNA，作為下一步實驗的基礎(chǔ)材料。

對于引物的選擇，標準推薦了幾種針對沙門氏菌特定基因序列設(shè)計的引物組合，這些引物能夠特異性地識別目標微生物，從而保證了檢測結(jié)果的準確性。隨后，在設(shè)定好的條件下進行PCR擴增反應(yīng)，通過控制溫度循環(huán)來復(fù)制目標DNA片段，使得微量存在的病原體DNA得以放大至可被檢測到的程度。

最后一步是對擴增產(chǎn)物進行分析，通常采用凝膠電泳法或其他適當?shù)募夹g(shù)手段，觀察是否存在預(yù)期大小的DNA條帶，以此判斷原始樣品中是否含有沙門氏菌。此外，為了確保實驗的有效性和可靠性，還需要設(shè)立陽性對照和陰性對照實驗。

整個流程強調(diào)了實驗室操作規(guī)范的重要性以及對環(huán)境清潔度的要求，以避免交叉污染導致假陽性或假陰性的發(fā)生。同時，也指出了在實際應(yīng)用過程中可能遇到的問題及其解決辦法，為從事相關(guān)領(lǐng)域工作的人員提供了詳細的指導。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2012-07-31 頒布
  • 2012-11-01 實施
?正版授權(quán)
GB/T 28642-2012飼料中沙門氏菌的快速檢測方法聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)法_第1頁
GB/T 28642-2012飼料中沙門氏菌的快速檢測方法聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)法_第2頁
GB/T 28642-2012飼料中沙門氏菌的快速檢測方法聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)法_第3頁
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文檔簡介

ICS65120

B46.

中華人民共和國國家標準

GB/T28642—2012

飼料中沙門氏菌的快速檢測方法

聚合酶鏈式反應(yīng)PCR法

()

RapiddeterminationofSalmonellasppinanimalfeedingstuffs—

.

PCRmethod

2012-07-31發(fā)布2012-11-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T28642—2012

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC76)。

本標準起草單位農(nóng)業(yè)部飼料質(zhì)量及畜產(chǎn)品安全監(jiān)督檢驗測試中心沈陽

:()。

本標準主要起草人張秀芹張建勛杜柏林李欣南楊希國馬俊馳陳曉月

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T28642—2012

飼料中沙門氏菌的快速檢測方法

聚合酶鏈式反應(yīng)PCR法

()

1范圍

本標準規(guī)定了飼料中沙門氏菌的快速檢測的方法

PCR。

本標準適用于飼料中沙門氏菌的定性篩選

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

飼料中沙門氏菌的檢測方法

GB/T13091

飼料采樣

GB/T14699.1

實驗室生物安全通用要求

GB19489

基因檢驗實驗室技術(shù)要求

SN/T1193

食品中致病菌檢測方法實時法

SN/T1870PCR

3原理

利用沸水浴使菌體細胞破裂釋放基因組離心使細胞壁等有形物沉淀以上清液為模板進行

,DNA,,

擴增瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增產(chǎn)物

,PCR。

4試劑和材料

除另有規(guī)定外試劑為分析純或生化試劑試驗用水符合的要求

,,GB/T6682。

41沙門氏菌檢測用引物對序列為

.():

SalF:5′-TCGCACCGTCAAAGGAACCGTAAAGC-3′

SalR:5′-GCATTATCGATCAGTACCAGCCGTCT-3′

42Taq緩沖液內(nèi)含Taq聚合酶2+

.Premix(2×):DNA1.25U/25μL,4mmolMg,dNTP

各

0.4mmol。

43瓊脂糖電泳級

.:。

44

.Marker2000。

45緩沖蛋白胨水見

.(BPW):A.1。

46大豆蛋白胨肉湯見

.(RVS):A.2。

47亞硒酸鹽胱氨酸增菌液見

.(SC):A.3。

48倍上樣緩沖液的溴酚藍丙三醇溶液的

.10(10×loadingbuffer):0.05%,50%,1%SDS。

49質(zhì)控菌株沙門氏菌陽性標

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