光學顯微鏡的使用與標本片觀察

實驗一

光學顯微鏡的使用與標本片觀察一、目的要求1、掌握光學顯微鏡的使用方法；重要微生物的典型形態(tài)。2、了解光學顯微鏡的原理。二、光學顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)1.鏡座；2.載物臺；3.鏡臂；4.棱鏡套；5.鏡筒；6.接目鏡；7.轉(zhuǎn)換器；8.接物鏡；9.聚光器；10.虹彩光圈；11.光圈固定器；12.聚光器升降螺旋；13.反光鏡；14.細調(diào)節(jié)器；15.粗調(diào)節(jié)器；16.標本夾光學顯微鏡基本結(jié)構(gòu)：1.

照明燈2.

聚光器3.

載物臺和切片夾4.

推進器5.

物鏡6.

粗細螺旋7.

目鏡8.

照相機等接口1、增加照明亮度油鏡的放大倍數(shù)可達100×，放大倍數(shù)這樣大的鏡頭，焦距很短，直徑很小，但所需要的光照強度卻最大。*油鏡

從承載標本的玻片透過來的光線，因介質(zhì)密度不同（從玻片進入空氣，再進入鏡頭），有些光線會因折射或全反射，不能進入鏡頭，致使在使用油鏡時會因射入的光線較少，物像顯現(xiàn)不清。所以為了不使通過的光線有所損失，在使用油鏡時需在油鏡和玻片之間加入與玻璃的折射率（n=1.55）相仿的鏡油（通常使用香柏油，其折射率n=1.52）。2、增加顯微鏡的分辨率

油鏡的分辨率卻可達到0.2μm左右。三、實驗器材1、微生物標本片

2、香柏油、二甲苯。3、光學顯微鏡、擦鏡紙。四、實驗步驟1、觀察前的準備（1）顯微鏡的安置

置顯微鏡于平整的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊緣約3～4㎝。鏡檢時姿勢要端正。

取、放顯微鏡時應(yīng)一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或記錄。（2）光源調(diào)節(jié)

安裝在鏡座內(nèi)的光源燈可通過調(diào)節(jié)電壓以獲得適當?shù)恼彰髁炼?，而使用反光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時，應(yīng)根據(jù)光源的強度及所用物鏡的放大倍數(shù)選用凹面或凸面反光鏡并調(diào)節(jié)其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。

2、顯微觀察在目鏡保持不變的情況下，使用不同放大倍數(shù)的物鏡所能達到的分辨率及放大率都是不同的。一般情況下，特別是初學者，進行顯微觀察時應(yīng)遵從由低倍鏡到高倍鏡再到油鏡的觀察程序，因為低倍數(shù)物鏡視野相對大，易發(fā)現(xiàn)目標及確定檢查的位置。（1）低倍鏡觀察

將染色標本玻片置于載物臺上，用標本夾夾住，移動推進器使觀察對象處在物鏡的正下方。將10×物鏡置于光路中，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起載物臺，使標本在視野中初步聚焦，再使用細調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)圖像清晰。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片，認真觀察標本各部位，找到合適的目的物，仔細觀察并記錄觀察到的結(jié)果。

（2）高倍鏡觀察

在低倍鏡下找到合適的觀察目標并將其移至視野中心后，輕輕轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將高倍鏡移至工作位置。對聚光器光圈及視野亮度進行適當調(diào)節(jié)后，微調(diào)細調(diào)節(jié)器使物像清晰，利用推進器移動標本仔細觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。

（3）油鏡觀察

在高倍鏡或低倍鏡下找到要觀察的樣品區(qū)域后，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺降低，然后將油鏡轉(zhuǎn)到工作位置。在待觀察的樣品區(qū)域加滴香柏油，從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺小心地上升，使油鏡浸在油鏡中并幾乎與標本相接。調(diào)節(jié)照明使視野的亮度合適，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺徐徐下降，直至視野中出現(xiàn)物像并用細調(diào)節(jié)器使其清晰準焦為止。

3、顯微鏡用畢后的處理（1）下降載物臺，取下載玻片。（2）用擦鏡紙拭去鏡頭上的鏡油，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。切忌用手或其他紙擦拭鏡頭，以免使鏡頭沾上污漬或產(chǎn)生劃痕，影響觀察。

（3）用擦鏡紙清潔其他物鏡及目鏡，用稠布清潔顯微鏡的金屬部件。（4）將各部分還原，將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，再向下旋。

4、微生物