標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 35910-2018 豬圓環(huán)病毒2型阻斷ELISA抗體檢測方法》是一項(xiàng)國家標(biāo)準(zhǔn)，主要規(guī)定了用于檢測豬血液中豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）特異性抗體的方法。該標(biāo)準(zhǔn)采用的是酶聯(lián)免疫吸附測定法中的阻斷ELISA技術(shù)，這是一種基于抗原-抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測手段，通過比較樣本與陽性對照之間的信號差異來判斷待測樣品中是否存在針對PCV2的特異性抗體。

按照此標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行時，首先需要準(zhǔn)備一系列試劑和材料，包括但不限于：包被有PCV2重組Cap蛋白或其片段的微孔板、HRP標(biāo)記的單克隆抗體、底物溶液等。實(shí)驗(yàn)流程大致分為以下幾個步驟：

  • 樣品稀釋；
  • 將稀釋后的樣品加入到預(yù)包被好的微孔板中，并進(jìn)行孵育；
  • 清洗去除未結(jié)合物質(zhì)后加入HRP標(biāo)記的單克隆抗體繼續(xù)孵育；
  • 再次清洗并加入底物溶液顯色；
  • 終止反應(yīng)后，在特定波長下測量吸光度值。

根據(jù)樣品與陰性對照相比所顯示出來的抑制率大小，可以判斷出樣品中是否含有能夠識別PCV2 Cap蛋白的抗體。具體來說，如果某個樣品使得標(biāo)記抗體與固相抗原結(jié)合受到明顯抑制，則表明該樣品中含有PCV2特異性抗體；反之則認(rèn)為無相關(guān)抗體存在或者濃度低于檢測限。

該標(biāo)準(zhǔn)還詳細(xì)列出了整個實(shí)驗(yàn)過程中需要注意的操作細(xì)節(jié)以及質(zhì)量控制要求，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠。此外，對于如何計(jì)算S/P比值（樣本/陽性對照）、判定閾值設(shè)定等方面也給出了明確指導(dǎo)。通過遵循這些規(guī)范化的操作指南和技術(shù)參數(shù)，實(shí)驗(yàn)室可以在統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)框架下對豬群進(jìn)行PCV2感染狀態(tài)監(jiān)測，為疾病防控提供科學(xué)依據(jù)。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2018-02-06 頒布
  • 2018-09-01 實(shí)施
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GB/T 35910-2018豬圓環(huán)病毒2型阻斷ELISA抗體檢測方法_第1頁
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T35910—2018

豬圓環(huán)病毒2型阻斷ELISA

抗體檢測方法

Blockingenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetecting

theantibodytoporcinecircovirustype2

2018-02-06發(fā)布2018-09-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T35910—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位南京農(nóng)業(yè)大學(xué)

:。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人姜平王先煒白娟楊香林劉捷

:、、、、。

Ⅰ

GB/T35910—2018

豬圓環(huán)病毒2型阻斷ELISA

抗體檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬圓環(huán)病毒型抗體阻斷的檢測方法

2ELISA。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬圓環(huán)病毒病的抗體檢測疫苗免疫抗體監(jiān)測和血清流行病學(xué)調(diào)查

、。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB19489

獸醫(yī)診斷樣品采集保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范

NY/T541、

檢驗(yàn)檢疫動物病原微生物實(shí)驗(yàn)活動生物安全要求細(xì)則

SN/T2984

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

牛血清白蛋白

BSA:(Bovineserumalbumin)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

ELISA:(Enzyme-linkedimmunosorbentassay)

辣根過氧化物酶

HRP:(Horseradishperoxidase)

豬圓環(huán)病毒型

PCV2:2(Porcinecircovirustype2)

四甲基聯(lián)苯胺

TMB:(Tetramethylbenzidine)

4儀器材料與試劑

、

41試驗(yàn)儀器

.

411酶聯(lián)免疫檢測儀

..。

412高速臺式冷凍離心機(jī)

..。

413微量移液器規(guī)格

..:0.5μL~10μL、20μL~200μL、100μL~1000μL。

414道可調(diào)微量移液器規(guī)格

..12:10μL~100μL。

42試驗(yàn)材料

.

421孔酶標(biāo)反應(yīng)板

..96。

422注射器

..(5mL)。

423微量離心管

..

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