GB/T 36829-2018甘蔗宿根矮化病菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法

ICS6502001

B16..

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T36829—2018

甘蔗宿根矮化病菌

實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法

DetectionofLeifsoniaxylisubsp.xylibyreal-timePCR

2018-09-17發(fā)布2019-04-01實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

中華人民共和國(guó)

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

甘蔗宿根矮化病菌

實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法

GB/T36829—2018

*

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號(hào)

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號(hào)

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20189

*

書號(hào)

:155066·1-61319

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T36829—2018

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家甘蔗工程技術(shù)研究中心農(nóng)業(yè)部甘蔗及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試

:、

中心農(nóng)業(yè)部福建甘蔗生物學(xué)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人高三基孫生仁王恒波傅華英黃美婷王錦達(dá)張慧麗陳如凱

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T36829—2018

引言

本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)提請(qǐng)注意聲明符合本文件時(shí)可能涉及到與甘蔗宿根矮化病菌實(shí)時(shí)熒光定量

,,

相關(guān)的專利的利用

PCR。

本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)對(duì)于該專利的真實(shí)性有效性和范圍無任何立場(chǎng)

、。

該專利持有人已向本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)保證他愿意同任何申請(qǐng)人在合理且無歧視的條款和條件下

,,

就專利授權(quán)許可進(jìn)行談判該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)備案相關(guān)信息可以通過以下

。。

聯(lián)系方式獲得

:

專利持有人姓名王恒波

:。

地址福建省福州市倉(cāng)山區(qū)上下店路號(hào)

:15。

請(qǐng)注意除上述專利外本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專

,。

利的責(zé)任

。

Ⅱ

GB/T36829—2018

甘蔗宿根矮化病菌

實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了甘蔗宿根矮化病菌Leifsoniaxylixyli實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法的儀器與

(subsp.)PCR

設(shè)備試劑與材料樣品的采集與前處理檢測(cè)以及結(jié)果判斷與表述等

、、、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于可能帶有甘蔗宿根矮化病菌的活體寄主植物的快速檢測(cè)診斷

、。

2縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

十六烷基三甲基溴化銨

CTAB:(CetyltrimethylAmmoniumBromide)

值循環(huán)閾值

Ct:(CycleThreshold)

脫氧核糖核酸酶

DNase:(Deoxyribonuclease)

羧基熒光素

FAM:6-(6-Carboxy-Fluorescein)

甘蔗宿根矮化病菌Leifsoniaxylixyli

Lxx:(subsp.)

Part甘蔗宿根矮化病菌基因組上編碼的一種致病性基因

-1:(PathogenicityGene-1)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(PolymeraseChainReaction)

核糖核酸酶

RNase:(Ribonuclease)

羧基四甲基羅丹明

TAMRA:6-(6-Carboxytetramethylrhodamine)

3甘蔗宿根矮化病菌基本信息

甘蔗宿根矮化病菌屬于微桿菌科Microbacteriaceae雷弗松氏細(xì)菌屬Leisonia成員拉丁文學(xué)名

f,

名稱為L(zhǎng)eifsoniaxylixyli縮寫為甘蔗宿根矮化病菌其他信息參見附錄

subsp.,Lxx。A。

4方法原理

根據(jù)宿根矮化病菌的致病基因Pat-序列設(shè)計(jì)一對(duì)僅在該病菌Pat基因間保守的特異性引物和

1-1

一條特異性的熒光雙標(biāo)記探針在實(shí)時(shí)熒光擴(kuò)增反應(yīng)中探針的熒光信號(hào)強(qiáng)度

TaqMan。PCR,TaqMan

伴隨著目標(biāo)序列擴(kuò)增產(chǎn)物的增加呈正比關(guān)系通過收集擴(kuò)增過程的熒光信號(hào)值即可判斷試

PCR,PCR,

樣是否帶有目標(biāo)序列

。

5儀器與設(shè)備

51實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)儀激發(fā)檢測(cè)波長(zhǎng)范圍可用染料和

.PCR:/350nm~750nm;SYBRGreenⅠ

探針升降溫速度均一性準(zhǔn)確性溫度范圍

Ta