文稿教案講稿

項(xiàng)目主要結(jié) 字體說(shuō) 參考文 項(xiàng)目主要結(jié)果Intens.Intens.0

11m/zm/z（質(zhì)荷比Intens（峰度I1.1符號(hào)名 符號(hào)說(shuō) 小四字 五號(hào)字 正字 1蛋白分子量測(cè)定工作流程蛋白分子量測(cè)定原理基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)是一種新型的軟電離生物質(zhì)譜，尤其適用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分子量測(cè)定。其分子量測(cè)定原理如圖2.1所示。圖 基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜測(cè)定蛋白分子量原基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀器主要由兩部分組成：基質(zhì)附助激光解析電離離子源（MALDI）和飛行時(shí)間質(zhì)量分析器（TOF。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜，基質(zhì)從激光中吸收能量傳遞給蛋白分子，而電離過(guò)程中將質(zhì)子轉(zhuǎn)移到蛋白分子或從蛋白分子得到質(zhì)子，而使蛋白分子電離的過(guò)程。因此它是一種軟電離技術(shù)，適用于混合物及生物大分子的測(cè)定。TOF的原理是離子在電場(chǎng)作用2下加速飛過(guò)飛行管道，根據(jù)到達(dá)檢測(cè)器的飛行時(shí)間不同而被檢測(cè)，即測(cè)定離子的質(zhì)荷比（M/Z）與離子的飛行時(shí)間成正比，從而可以檢測(cè)離子，測(cè)定其分子量?，F(xiàn)階段MLD-O-S測(cè)定蛋白分子量有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)（1對(duì)樣品的消耗很少，特別適合于貴重蛋白的分子量測(cè)定；（2）對(duì)樣品的保護(hù)作用好，基質(zhì)可以保護(hù)樣品的化合物不被破壞；（3）隨著質(zhì)量分析器的不斷改進(jìn)、新的基質(zhì)的不斷發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用以及延遲萃取技術(shù)的使用，使得MAD-TO-S的最高分辨率不斷提高，現(xiàn)已達(dá)到5000；（）MALD-TO-S檢測(cè)到的單電荷峰占主要部分，碎片峰少，非常有利于對(duì)復(fù)雜混合物的分析，并且能忍受較高濃度的鹽、緩沖劑和其他難揮發(fā)成分，降低了對(duì)樣品預(yù)處理的要求（5MALDI-TOMS質(zhì)譜對(duì)分子量的測(cè)定范圍是所有測(cè)試技術(shù)中最廣的。數(shù)處理過(guò)2.2該圖顯示蛋白質(zhì)分子測(cè)定的實(shí)驗(yàn)基本流程：第一步，對(duì)客戶所提供的樣品（一般為已經(jīng)提激光解析飛行時(shí)間質(zhì)譜（ultrafleXtremeMALDITOF/TOF）性模式下對(duì)1K~20KD、20K~200KD、200K~1000KD三個(gè)區(qū)間進(jìn)行質(zhì)譜掃描（只提供掃到信號(hào)峰的區(qū)間譜圖。3生物信息分析流Raw數(shù)Raw處理過(guò)件，應(yīng)用Flexysis分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，通過(guò)峰識(shí)別，得到峰列表，分析判斷得到相應(yīng)蛋白質(zhì)的4標(biāo)準(zhǔn)生物信息分析結(jié)果單一蛋白樣品進(jìn)行分子量測(cè)定，也可對(duì)多種蛋白的混合樣中各蛋白分子量進(jìn)定。所用軟件：exyss3.3版。質(zhì)譜下機(jī)數(shù)據(jù)經(jīng)該軟件處理后得到質(zhì)譜峰圖，圖中橫坐標(biāo)為帶電荷蛋白樣質(zhì)荷比（m/z，縱坐標(biāo)為峰強(qiáng)度（Intense，單位為[a.u]埃單位。對(duì)軟件的信噪比和峰寬進(jìn)行設(shè)置，一般情況下，軟件默認(rèn)的信噪比參數(shù)為6寬沒(méi)有特定值，視所測(cè)蛋白具體情況自行設(shè)置，如設(shè)置為10，則表明10以下為噪聲，將被篩選掉，軟件的默認(rèn)峰寬參數(shù)為0.75m/z。軟件自動(dòng)標(biāo)注選取得到峰單一蛋白樣品分子量測(cè)定ultrafleXtr（Bruker50000，質(zhì)量準(zhǔn)確度為25ppm，蛋白樣品的基本信息如表3.1所示：3.1 5000000Intens. 3.13.2

m/z（質(zhì)荷比Intens（峰度綜合圖表分析，該樣品中質(zhì)譜檢測(cè)到三種不同質(zhì)荷比的離子峰：33162.1，66135.6，132788.2。飛行時(shí)間質(zhì)譜儀中出現(xiàn)最多的一般為單電荷，由此可以判斷分子量為66135.6，多種蛋白樣品分子量測(cè)定基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜可以對(duì)多種蛋白樣品的混合樣進(jìn)定，得到各蛋白的分子量，測(cè)定中所使用ultrafleXtre（Bruker）質(zhì)譜儀，分辨率50000，質(zhì)量準(zhǔn)確度為25ppm，蛋白樣品的基本信息如表3.3所示：3.3樣品名 樣品編 靶點(diǎn)編 6Intens.Intens.3.23.4m/z（質(zhì)荷比Intens（峰強(qiáng)度 7[1]譚和平,王彧婕,等.蛋白質(zhì)分子量測(cè)試方法概述[J].中國(guó)測(cè)試[2],