液相色譜故障診斷

HPLC的故障診斷與維護(hù)美國戴安公司1I.常見問題基線噪音可能的原因：流動(dòng)池臟檢測器燈有問題如果是周期性的，電壓或泵的脈沖溫度對檢測器的影響氣泡經(jīng)過檢測器Time(min.)2基線漂移梯度洗脫溫度不穩(wěn)定(示差檢測器）流動(dòng)相中有污染物柱中的流動(dòng)相沒有平衡體系中有污染物流出可能的原因：3鬼峰鬼峰——即使不進(jìn)樣也會(huì)出現(xiàn)的峰20%-100%MeOH沒有進(jìn)樣601530150371517問題1-流動(dòng)相臟問題2-容器污染問題3-柱子污染4峰型雙峰柱塌陷正常峰雙峰柱中有死體積

過濾片部分堵塞只有一個(gè)雙峰——組分的共洗脫可能原因：樣品與溶劑不匹配，溶劑與柱子不匹配5峰型所有的峰都展寬柱效降低——柱死體積大進(jìn)樣量/質(zhì)量高粘度流動(dòng)相部分峰展寬前次進(jìn)樣后流出的組分大分子量樣品——蛋白或聚合物峰展寬樣品與流動(dòng)相不匹配6峰型拖尾峰對稱性>1.2NormalTailingNormalTailing原因：部分峰拖尾二次保留效應(yīng)——?dú)埩艄璐蓟姆磻?yīng)小峰緊跟在大峰的后面流出柱頭有污染金屬所有峰拖尾額外的柱效應(yīng)柱壞/不適當(dāng)?shù)娜軇┎贿m當(dāng)?shù)臉悠妨?峰型正常峰伸舌峰前伸峰不對稱性<0.9可能的原因柱過載在大峰前，有小峰流出樣品溶劑不適當(dāng)柱死體積過濾片部分堵塞8峰型原因樣品的吸收比流動(dòng)相的吸收值低當(dāng)樣品組分通過色譜柱時(shí)打破了原來的平衡用示差檢測器時(shí)是正常的9寬峰柱外體積增加*在進(jìn)樣口到柱或柱到檢測器之間，使用細(xì)的短的連接管*保證所有的管路接頭都使用正確*用小體積檢測池*減少進(jìn)樣量或降低樣品濃度10柱外體積效應(yīng)的影響0

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1011柱外體積10μL20μLTime,min.2.1x150mmF=0.2mL/min.(1ul進(jìn)樣)11I.不進(jìn)樣時(shí)柱壓連續(xù)升高-泵密封墊-流動(dòng)相有顆粒-流動(dòng)相溶解性-流動(dòng)相的不穩(wěn)定性(聚合)-形成柱死體積(與使用條件有關(guān))II.進(jìn)樣時(shí)壓力升高-樣品有顆粒-樣品在流動(dòng)相中不溶-樣品組分與固定相不兼容壓力12I.所有峰都向低保留值方向漂移（酸、堿、中性化合物）-鍵合相流失-流動(dòng)相不穩(wěn)定(可能性較小)-溶劑輸送系統(tǒng)(流速變化)II.所有峰都向高保留值方向漂移-在水/有機(jī)溶劑的混合體系中，有機(jī)溶劑含量減少-柱改變(可能性較小)-溶劑輸送系統(tǒng)(流速變化)III.離子型化合物的色譜峰的保留值漂移-流動(dòng)相中揮發(fā)性組分損失(離子強(qiáng)度,pH漂移)-柱改變(鍵合相或污染)保留值漂移13I.與流動(dòng)相有關(guān)的問題-使用新鮮的流動(dòng)相 ?pH ?電導(dǎo) ?色譜性能測試II.與色譜柱有關(guān)的問題-測試新柱-用標(biāo)準(zhǔn)的測試混合樣測試新柱-“清洗”

色譜柱后再測-考慮樣品基質(zhì)與使用條件對柱穩(wěn)定性的影響保留值漂移14良好的柱使用規(guī)范使用新鮮的水溶液，并考慮使用生物穩(wěn)定劑（如疊氮化鈉）儲(chǔ)存色譜柱時(shí)，應(yīng)沖凈緩沖鹽類，并用有機(jī)溶劑飽和色譜柱（乙腈）避免外力損傷色譜柱：彎曲、跌落或?qū)⒔宇^擰的過緊完全潤濕在運(yùn)輸中變干的色譜柱對含有保留性較強(qiáng)的雜質(zhì)組分的樣品要進(jìn)行預(yù)處理定期用強(qiáng)極性的溶劑清洗色譜柱清除柱填料的局限性了解溶劑對樣品的溶解性及分離的影響pH溫度化學(xué)兼容性在使用前過濾溶劑15預(yù)柱與保護(hù)柱從泵來的流動(dòng)相預(yù)柱進(jìn)樣器保護(hù)柱柱分析到檢測器預(yù)柱對流動(dòng)相而言保護(hù)柱對色譜柱而言StrippingorConcentratingColumn16制備樣品:流動(dòng)相過濾樣品，以確保其不含有固體微粒用流動(dòng)相或比流動(dòng)相極性較弱的溶劑溶解樣品進(jìn)樣的樣品體積應(yīng)盡量小樣品不溶于流動(dòng)相樣品溶于流動(dòng)相真正的環(huán)境樣品樣品的溶解性溶劑強(qiáng)度體積效應(yīng)微粒雜質(zhì)強(qiáng)保留的組分17色譜柱維修/再生——物理阻塞在安裝柱前后測試壓力差如果柱壓力太高，反裝色譜柱，并用10-20倍柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱，監(jiān)測壓力變化若出現(xiàn)沉淀