生化檢驗常用技術

第五章

常用生物化學檢驗技術第一節(jié)光譜分析技術（講授）第二節(jié)電化學分析第三節(jié)電泳技術（講授）第四節(jié)層析技術第五節(jié)離心技術第六節(jié)自動生化分析技術

內容概要第一節(jié)光譜分析技術1.分光光度技術的基本原理2.其他光譜技術掌握熟悉分光光度計的基本結構、操作方法2.分光光度技術的定性和定量方法內容提要一、分光光度技術的原理二、分光光度計的基本結構三、分光光度計的操作方法四、分光光度技術的定量和定性五、其它光譜分析技術一、分光光度技術的基本原理T=I/I0透光度（transmitance,T）透射光強度和入射光強度之比。吸光度（absorbance,A）A=-lgT透光度的負對數。Lambert-Beer定律

比例常數，稱為吸光系數溶液層厚度，稱為光徑

A＝KLC物質對單色光的吸光度（A）與吸光物質溶液的濃度（C）和液層厚度（L）的乘積成正比。吸光度溶液濃度吸光系數（K）吸光物質在單位濃度及單位液層厚度時的吸光度。當液層厚度為1cm，物質濃度為1mol/L時在特定波長下的吸光度。

ε是物質的特定性常數。K＝A/LC物理意義摩爾吸光系數（ε）偏離Lambert-Beer定律的因素1.化學因素：溶液的濃度、pH、溶劑和溫度等因素可影響化學平衡。2.光學因素：非單色光、非平行光等因素，入射光的譜帶越寬，其誤差越大。二、分光光度計的基本結構可見分光光度計紫外-可見光分光光度計

光源單色器比色杯檢測器顯示器五大部份結構最常用㈠光源可見光分光光度計常用光源:鎢燈或鹵鎢燈

紫外光光度計常用氫燈作為光源。㈡單色器光源的復合光單色光

種類定義濾光片棱鏡光柵常用玻璃或石英

光電管光電倍增管㈢比色杯＝吸收池＝比色皿材料㈣檢測器㈤顯示器定義光信號電信號<<<<<<

種類三、分光光度計的操作方法721-A型1.打開開關和比色池的蓋子，通電20分鐘使儀器預熱。2.將波長旋至測定的波長。3.將空白液、校準液或待測液放入比色池，將空白液置于光路中。4.打開比色池蓋子，調節(jié)T為0,關上比色池蓋子，調節(jié)T為100。5.重復步驟4和56.將校準液或待測液推入光路，測量溶液的吸光度（A）四、分光光度技術的定性定量方法㈠定性2.摩爾吸光系數ε方法1.最大吸收波長λmax方法㈡定量1.標準曲線法2.比較法1.標準曲線法

將一系列濃度不同的標準液，在同一條件下分別測定吸光度，然后以標準液濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，按最小二乘法的原理，將對應各點連成一條通過原點的直線，稱為標準曲線。待測溶液測定吸光度后，從標準曲線上可查出其相應的濃度。

此法對儀器的要求不高，適用于單色光不純的儀器，適用于大批量的定量分析。特點2．比較法

己知濃度的標準品和樣品作同樣處理，使用相同的空白，同時測定其吸光度，可根據Lambert-Beer定律計算出樣品的濃度：A樣＝K樣L樣C樣A標＝K標L標C標C樣＝A樣/A標×C標特點用比較法定量時，選用的標準品溶液的濃度應盡量接近樣品溶液濃度，可減少誤差。五、其它光譜分析技術光譜分析技術熒光光度法火焰光度法原子發(fā)射光譜法紫外、可見分光光度法原子吸收分光光度法比濁法發(fā)射光譜技術吸收光譜技術散射光譜技