生化檢驗常用技術(shù)

第五章

常用生物化學(xué)檢驗技術(shù)第一節(jié)光譜分析技術(shù)（講授）第二節(jié)電化學(xué)分析第三節(jié)電泳技術(shù)（講授）第四節(jié)層析技術(shù)第五節(jié)離心技術(shù)第六節(jié)自動生化分析技術(shù)

內(nèi)容概要第一節(jié)光譜分析技術(shù)1.分光光度技術(shù)的基本原理2.其他光譜技術(shù)掌握熟悉分光光度計的基本結(jié)構(gòu)、操作方法2.分光光度技術(shù)的定性和定量方法內(nèi)容提要一、分光光度技術(shù)的原理二、分光光度計的基本結(jié)構(gòu)三、分光光度計的操作方法四、分光光度技術(shù)的定量和定性五、其它光譜分析技術(shù)一、分光光度技術(shù)的基本原理T=I/I0透光度（transmitance,T）透射光強度和入射光強度之比。吸光度（absorbance,A）A=-lgT透光度的負對數(shù)。Lambert-Beer定律

比例常數(shù)，稱為吸光系數(shù)溶液層厚度，稱為光徑

A＝KLC物質(zhì)對單色光的吸光度（A）與吸光物質(zhì)溶液的濃度（C）和液層厚度（L）的乘積成正比。吸光度溶液濃度吸光系數(shù)（K）吸光物質(zhì)在單位濃度及單位液層厚度時的吸光度。當(dāng)液層厚度為1cm，物質(zhì)濃度為1mol/L時在特定波長下的吸光度。

ε是物質(zhì)的特定性常數(shù)。K＝A/LC物理意義摩爾吸光系數(shù)（ε）偏離Lambert-Beer定律的因素1.化學(xué)因素：溶液的濃度、pH、溶劑和溫度等因素可影響化學(xué)平衡。2.光學(xué)因素：非單色光、非平行光等因素，入射光的譜帶越寬，其誤差越大。二、分光光度計的基本結(jié)構(gòu)可見分光光度計紫外-可見光分光光度計

光源單色器比色杯檢測器顯示器五大部份結(jié)構(gòu)最常用㈠光源可見光分光光度計常用光源:鎢燈或鹵鎢燈

紫外光光度計常用氫燈作為光源。㈡單色器光源的復(fù)合光單色光

種類定義濾光片棱鏡光柵常用玻璃或石英

光電管光電倍增管㈢比色杯＝吸收池＝比色皿材料㈣檢測器㈤顯示器定義光信號電信號<<<<<<

種類三、分光光度計的操作方法721-A型1.打開開關(guān)和比色池的蓋子，通電20分鐘使儀器預(yù)熱。2.將波長旋至測定的波長。3.將空白液、校準液或待測液放入比色池，將空白液置于光路中。4.打開比色池蓋子，調(diào)節(jié)T為0,關(guān)上比色池蓋子，調(diào)節(jié)T為100。5.重復(fù)步驟4和56.將校準液或待測液推入光路，測量溶液的吸光度（A）四、分光光度技術(shù)的定性定量方法㈠定性2.摩爾吸光系數(shù)ε方法1.最大吸收波長λmax方法㈡定量1.標(biāo)準曲線法2.比較法1.標(biāo)準曲線法

將一系列濃度不同的標(biāo)準液，在同一條件下分別測定吸光度，然后以標(biāo)準液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，按最小二乘法的原理，將對應(yīng)各點連成一條通過原點的直線，稱為標(biāo)準曲線。待測溶液測定吸光度后，從標(biāo)準曲線上可查出其相應(yīng)的濃度。

此法對儀器的要求不高，適用于單色光不純的儀器，適用于大批量的定量分析。特點2．比較法

己知濃度的標(biāo)準品和樣品作同樣處理，使用相同的空白，同時測定其吸光度，可根據(jù)Lambert-Beer定律計算出樣品的濃度：A樣＝K樣L樣C樣A標(biāo)＝K標(biāo)L標(biāo)C標(biāo)C樣＝A樣/A標(biāo)×C標(biāo)特點用比較法定量時，選用的標(biāo)準品溶液的濃度應(yīng)盡量接近樣品溶液濃度，可減少誤差。五、其它光譜分析技術(shù)光譜分析技術(shù)熒光光度法火焰光度法原子發(fā)射光譜法紫外、可見分光光度法原子吸收分光光度法比濁法發(fā)射光譜技術(shù)吸收光譜技術(shù)散射光譜技