如何選擇流動相

流動相的調(diào)節(jié)是搞液相分析最重要的環(huán)節(jié)，也是液相水平高低的度量，每一種液相都有影響它的主要因素，抓住主要因素，問題就容易解決。歡迎大家討論。一則可以為新手傳播知識，二則大家相互學(xué)習共同提高！先開個頭：常用的是化學(xué)鍵合相色譜，分離中性化合較簡單，主要是調(diào)節(jié)溶劑強度,可從有機相的比例合種類兩個方面入手，例如：有機相占的比例大，出峰就早。分離酸堿化合物就就復(fù)雜一點，增加了添加劑，明白了添加劑的作用，然后從溶劑，酸堿性，添加劑等方面入手。問題就容易解決。液相色譜采用鍵合硅膠可以分離絕大多數(shù)的分析物質(zhì)，針對不同化學(xué)性質(zhì)的單體采用不同的鍵合硅膠，現(xiàn)在有什么十八烷、氨基柱、氰基、苯基太多了，再加上不同流動相也就是加入不同的抑制劑可以測許多成分，比如：酸性的可以用十八烷加入酸，加緩沖鹽；堿性物質(zhì)可以加緩沖鹽，以個人來講用離子對的形式較多，并且效果也很好，現(xiàn)在分析生物堿是比較難做的，我現(xiàn)在就有一個難題，就說鹽酸水蘇堿吧，在低波長的吸收，UV是不行了，用蒸發(fā)光檢測器，但是分離又成了問題，我試了十八烷，氨基柱、氰基、都不理想，并且用過日本的shodex（C18）柱PH9-10不好。不好做呀，在郁悶中 如用反相色譜柱時，一般先改變有機相與水相的比例；再考慮改變pH值，酸性物質(zhì)將pH值調(diào)低，堿性物質(zhì)將pH值調(diào)高；如兩者都無效，可考慮加入離子對試劑,如庚烷磺酸鈉用于（堿性藥物）我覺得溶劑過濾器抽濾時抽走一部分有機相使保留時間相差較大。其實流動相的調(diào)節(jié)也是很難的，一個條件下來是非常的不易呀，從查文獻到，條件成熟，有一次我做麻黃就是二個月呀，最后才定下來，現(xiàn)在的水蘇堿又是一個大頭,現(xiàn)在為什么生物堿這樣的難做呢，柱前衍生我是考慮過，但對柱子是有影響的，同時處理也麻煩。對于流動相的抽濾對測定是沒什么影響的，一個穩(wěn)定的條件，是不計較那一點損失的，如果抽濾對于測定的影響非常之大這個條件是不穩(wěn)的?，F(xiàn)在的流動相在檢驗所比例是可調(diào)的，但酸堿不變，所以我個人認為在一定的比例范圍內(nèi)，耐用性一定要好。有高手的話對我的水蘇堿給一點意見反相HPLC中的溶劑優(yōu)化：1?首先應(yīng)調(diào)整k'值：強溶劑一20%遞減一選擇合適的溶液強度，使得k'在1?20（tR：3?35min）。一種方法是首先試用一種可能過強的流動相，在后面的試驗中逐漸減小溶劑強度以增大k。當所有譜峰符合1vk'<20的范圍時，從溶劑強度的觀點來說，其流動相已接近最佳了。（觀察待分離組分的分離度）。（反相色譜一一溶劑極性弱洗脫能力強，組分k'減小）。另一種方法是首次用梯度洗脫試驗。通過這一實驗，有可能估計出使樣品的k'值符合1<k'<20范圍的大概溶劑成分。2?改變選擇性（占）：根據(jù)分子間作用力將溶劑分組。不同組的溶劑選擇性不同，根據(jù)溶劑分組改變?nèi)軇┓N類即可改變選擇性。離子對HPLC中的溶劑優(yōu)化：離子對色譜法是分離離子，或可電離的分子的一種色譜技術(shù)。關(guān)于離子對色譜的機理，至今仍不十分明確，但己提出三種機理：離子對形成機理，離子交換機理，離子相互作用機理。在以下討論中，采用離子對形

成機理。基本原理：有一色譜體系，固定相為非極性，如C18型鍵合相，流動相為水溶液，并在其中加入一種電荷與組分離子相反的離子B+,B+離子由于靜電引力，與帶負電的組分離子生成離子對，故稱它為平衡離子或成對離子。由于離子對具有疏水性，因而被非極性固定相（即有機相）提取。組分離子的性質(zhì)不同，它與平衡離子形成離子對的能力大小不同，以及離子對的極性不同，導(dǎo)致各組分離子在固定相中滯留的時間不同，因而各離子先后離開色譜柱，這就是離子對色譜法的基本原理。以上這類色譜法稱反相離子對色譜法。能用離子對色譜法分離的樣品種類很多。它可以用于極性樣品，如堿類、酸類、離子、以及帶有可離解的多種官能團化合物的分離?？捎糜谏眢w液的分析，如甾族化合物以及體液中藥物的分析。反相離子對色譜中流動相的影響小結(jié)：1?改變選擇性：a?改變?nèi)軇┓N類：改變?nèi)軇┻x擇性的方法，類似于鍵合相色譜所介紹的原則。選用不同選擇性組別的溶劑，可使流動相的選擇性得到明顯改進。b?改變pH:組分離子與平衡離子的生成，離子對的形成，都與流動相的pH值密切相關(guān)。改變流動相的pH可以改變體系的選擇性。流動相的pH值應(yīng)調(diào)節(jié)到能使不同組分有合適的離解度，而使提供平衡離子的化合物能完全離解。要符合這一要求，只有使提供平衡離子的化合物在一個很寬的pH范圍內(nèi)保持完全離解，因此，只有強酸鹽（高氯酸鹽或烷基磺酸鹽）和強堿鹽（季銨鹽）才滿足此要求。c■系統(tǒng)選擇:使用一種有機溶劑（甲醇）；流動相的其它三種成分為pH=（□和卩日=匚的緩沖液以及另一種pH=、其中含有最大濃度（例如：200mM）的離子對試劑的緩沖液（D）。以組合不一的緩沖液（B—D）進行七次實驗，并變化甲醇（A）量以保持每次實驗的k'值范圍大致恒定。三?正相HPLC中的溶劑優(yōu)化溶劑非極性溶劑：正己烷或FC-113（1,1,2-三氟-1,1,2-三氯乙烷）極性溶劑：非定位、堿性定位和非堿性定位按正相HPLC中譜峰間距效應(yīng)分類的溶劑取代和定位是正相HPLC流動相選擇性的主要來源溶劑強度調(diào)節(jié)選擇性影響四、梯度洗脫梯度洗脫給色譜分離帶來很大的方使，已成為高效液相色譜法不可缺少的部分。所謂梯度洗脫，就是有兩種（或兩種以上）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程序連續(xù)地改變，以改變流動相的配比和極性。通常用的流動相為二元的。梯度期間，強溶劑B（如反相HPLC中的甲醇）的濃度增大。在下述討論中，我們將這種溶劑的濃度寫作B%。梯度洗脫對分離一定種類的樣品很理想?？商岣叻蛛x度、縮短分離時間、降低最小檢測量和提高分離精度。梯度洗脫對于復(fù)雜混合物、特別是保留值相差較大的混合物的分離是極為重要的手段。因為這些樣品的k'范圍寬，不能用等度方法簡單地處置。梯度洗脫期間的平均k'值tR=tm（1+k'）VR=Vm（1+k'）=Vm+kVs

我做液相時，為什么主峰總是出現(xiàn)肩峰？是柱效降低了還是制劑中的成分沒有完全被分離出來？應(yīng)該如何處理肩峰？出現(xiàn)上述情況的原因，可能大致考慮以下幾個方面：一、就是組分影響，也就是有與主峰保留時間相近的組分峰（雜質(zhì)峰）的存在；二、柱子柱效明顯降低，是柱子要壞掉的先兆；三、主藥在流動相中發(fā)生部分離解,使一部分主藥的結(jié)構(gòu)狀態(tài)發(fā)生改變。等。解決方法，對應(yīng)解之，即可。（個人見解）各們講的都很厲害啊，我是初學(xué)者不太了解。但在操作中常要根據(jù)要分離的物質(zhì)加適當?shù)碾x子對試劑，而離子對試劑是如何選擇的呢？我在做鹽酸水蘇堿時也遇到了樓上的問題，嘗試了UV及ELSD,都不是很理想，最近看到有人用柱前衍生然后用UV,但自己沒做過，不知效果怎樣。但出于檢測方法應(yīng)該越簡單越好真想快點找個即簡便又有效的方法。我也在做鹽酸水蘇堿，用的是SCX（離子交換柱）柱，出峰時間在8――9分鐘之間，樣品經(jīng)處理后基線分離的比較好，唯一不好的就是峰型有些拖尾。因為它的流動項是緩沖溶液，所以調(diào)了一下配比，發(fā)現(xiàn)離子交換柱出峰并不象ODS柱那么有規(guī)律，隨著pH的加大，峰對稱性升高,峰寬減小，離子交換柱出峰有一明顯波谷反而寬度增加，峰形變大。鹽酸水蘇堿標準品峰對稱性最多只能達到不過還是比ODS柱出峰要好針對做生物堿的朋友：用常規(guī)的ODS柱會出現(xiàn)一個最普遍的問題是：峰很寬，拖尾很嚴重!原因：ODS柱有很多未鍵合的硅羥基，與N締合造成。解決方案：使用BDS柱，他是用堿鈍化殘余的硅羥基，很好的避免了拖尾現(xiàn)象！用常規(guī)的SCX離子交換柱會出現(xiàn)一個普遍的問題是：重現(xiàn)性差，隨流動相的pH值大小，Rt變化大！原因：所謂離子交換柱，就是陰陽正負離子的交換，由于流動相的離子濃度的變化，勢必會影響交換平衡！解決方案：流動相用Buffer緩沖液！向各位老師請教，我做液相時出現(xiàn)了進空白，樣品，原料都沒有主峰的現(xiàn)象，過去做過這個，正常，請幫忙分析一下補充一下，以前配流動相是乙腈與鹽混合過濾，再超聲，這次是先濾鹽，后濾乙腈，再超聲，這一步應(yīng)沒問題吧

我買的新的ODS碳18柱子,做白藜蘆醇和它的苷，標樣混標,出峰比較好.但是后幾個點保留值提前，今天進樣,發(fā)現(xiàn)有肩峰,但是保留時間基本一致?流動相是甲醇和水,40比60.怎么辦呢hu_2104411wrote:我買的新的ODS碳18柱子,做白藜蘆醇和它的苷，標樣混標,出峰比較好.但是后幾個點保留值提前，今天進樣,發(fā)現(xiàn)有肩峰,但是保留時間基本一致?流動相是甲醇和水,40比60.怎么辦呢可能是柱子臟了，用異丙醇或者四氫咲喃沖洗一下，柱子現(xiàn)在的壓力比最初使用時高多少？請問base-deactivatedoctadecylsilylsilicagel是什么柱？謝謝！to:xinyiaabds是填料經(jīng)過堿基去活的ods,就是將硅膠表面的硅醇基堿性硅烷化，適合于弱堿性和弱酸性化合物.對于某些色譜的分離較好。對于離子對色譜，有時不加離子對，分離也很好，峰的對稱性也有很大改善，當然，其作用不止這些。可以當作普通