第四章-中藥制劑的含量測(cè)定

大綱要求掌握中藥制劑含量測(cè)定的目的特點(diǎn)掌握含量測(cè)定樣品處理的作用掌握方法學(xué)考察試驗(yàn)內(nèi)容熟悉色譜法分離凈化樣品常用填料及其特點(diǎn)第一頁，共一百二十頁。用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)方法或儀器分析方法對(duì)制劑中有效成分或有效部位進(jìn)行的定量分析。以其測(cè)定結(jié)果是否符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定來判斷藥品的優(yōu)劣，是控制和評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的重要方法。中藥制劑含量測(cè)定的定義第二頁，共一百二十頁。中藥制劑含量測(cè)定的特點(diǎn)含量測(cè)定內(nèi)容中藥制劑化學(xué)藥品對(duì)象不同供試品溶液制備待測(cè)成分確定組成及成分復(fù)雜方法繁瑣，大多需要凈化分離先根據(jù)中醫(yī)藥理論選擇藥味，再綜合選擇待測(cè)成分成分單一方法簡(jiǎn)單成分明確，一般選擇主要成分中藥制劑與化學(xué)藥品含量測(cè)定區(qū)別第三頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

作用：將被測(cè)成分有效地從樣品中釋放出來，并制成便于分析測(cè)定的穩(wěn)定試樣。除去雜質(zhì)、純化樣品，以提高分析方法的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度。富集濃縮或進(jìn)行衍生化，以測(cè)定低含量被測(cè)成分。衍生化不僅可提高檢測(cè)器的靈敏度，還可以提高方法的選擇性。使試樣的形式及所用溶劑符合分析測(cè)定的要求。

第四頁，共一百二十頁。步驟：樣品的粉碎樣品的提取樣品的分離凈化第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

第五頁，共一百二十頁。目的：1.保證所取樣品均勻而有代表性，提高測(cè)定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度。2.加速被測(cè)定組分的提取完全。樣品的粉碎第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

第六頁，共一百二十頁。注意：1.避免過細(xì)2.避免樣品受污染3.避免粉塵飛散及揮發(fā)性成分的損失4.避免丟棄不易通過篩孔的部分顆粒設(shè)備：粉碎機(jī)、研缽、高速勻漿機(jī)、玻璃勻漿器細(xì)粉：全部通過5號(hào)篩（80目），并含能過6號(hào)篩（100目）不少于95％的粉末樣品的粉碎第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

第七頁，共一百二十頁。冷浸法回流提取法連續(xù)回流提取法超聲法超臨界流體提取法

關(guān)鍵——提取完全樣品的提取第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

第八頁，共一百二十頁。稱取一定量樣品置于帶塞容器內(nèi)，搖勻后放置，浸泡提取，溶劑用量為樣品重量的10～50倍，并稱重。浸泡時(shí)間12～24小時(shí)，浸泡期間應(yīng)注意經(jīng)常振搖。取浸泡后的溶液測(cè)定有效成分。

冷浸法樣品的提取第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

第九頁，共一百二十頁。浸泡提取法中供試品的制備方式1.部分測(cè)定法（等量法）：即將浸泡后的溶液，用適宜濾器濾過，精密量取一定體積，進(jìn)行測(cè)定注：此法不適宜揮發(fā)性較大的提取溶劑冷浸法樣品的提取第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

第十頁，共一百二十頁。2.全部測(cè)定法（即總量測(cè)定法）：將浸泡后的溶液濾過，濾渣充分用溶劑洗滌至提取完全，合并濾液及洗液，濃縮或蒸干，殘留物用另一溶劑溶解，定量轉(zhuǎn)入量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)行測(cè)定注意：轉(zhuǎn)移完全冷浸法樣品的提取第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

靈寶護(hù)心丹（牛黃、麝香等）中膽酸的含量測(cè)定

取本品適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加石油醚（60-90℃）4ml，浸泡1小時(shí)，濾過，濾渣及濾紙揮去溶劑，放回錐形瓶中，精密加入冰醋酸無水乙醇溶液（1→10）15ml，搖勻，密塞，稱定重量，浸泡12小時(shí)，再稱定重量，用冰醋酸無水乙醇溶液（1→10）補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。第十一頁，共一百二十頁。特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，適于熱不穩(wěn)定的樣品，且提取雜質(zhì)少缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)（12-24h）、費(fèi)溶劑（10-50倍）冷浸法樣品的提取第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

第十二頁，共一百二十頁。將冷浸法中的帶塞容器換成回流裝置，用單一溶劑或混合溶劑于水浴上加熱回流提取，其余操作方法同冷浸法。萬應(yīng)膠囊（黃連等）中鹽酸小檗堿測(cè)定在HCl-70%乙醇溶液，加熱回流1h回流提取法樣品的提取第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

第十三頁，共一百二十頁。回流提取法樣品的提取第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

1、提取效率高于冷浸法；

2、每次提取時(shí)間為0.5～2小時(shí)，直至提取

完全為止。1、提取雜質(zhì)較多；

2、不適于對(duì)熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的成分。優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)第十四頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品置索氏提取器中，利用遇熱可以揮發(fā)的溶劑進(jìn)行反復(fù)提?。ㄏ喈?dāng)于總是在使用新鮮溶劑提?。?，一般提取數(shù)小時(shí)方可完全。保和丸（陳皮等）中橙皮甙測(cè)定+甲醇，加熱回流至提取液無色為止連續(xù)回流提取法樣品的提取第十五頁，共一百二十頁。優(yōu)點(diǎn)：1）無需過濾，提取完全后取下虹吸回流管，就可回收溶劑，再用適宜溶劑溶解，定容，進(jìn)行測(cè)定。2）提取效率高，所需溶劑少，提取雜質(zhì)少。缺點(diǎn)：受熱易分解的成分不宜使用。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

連續(xù)回流提取法樣品的提取第十六頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品置適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加入提取溶劑，放入超聲振蕩器（超聲波清洗器）中進(jìn)行提取。一般樣品30分鐘內(nèi)即可完成，最多不超過1小時(shí)。保濟(jì)丸（厚樸等）中厚樸酚測(cè)定+石油醚（30-60℃），超聲處理（功率500W，頻率33kHz）2次，每次30min超聲提取法樣品的提取第十七頁，共一百二十頁。優(yōu)點(diǎn)：超聲提取能使樣品粉末更好地分散于溶劑中提高提取效率和提取速度。（超聲的助溶作用）缺點(diǎn)：促使化學(xué)反應(yīng)發(fā)生（如氧化還原反應(yīng)、大分子化合物的降解和解聚合作用等）。

※注明超聲波的頻率、功率，以保證重現(xiàn)性第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

超聲提取法樣品的提取第十八頁，共一百二十頁。以超臨界流體作溶劑的樣品提取新技術(shù)。當(dāng)壓力和溫度超過氣體的臨界點(diǎn)時(shí)所形成的單一相態(tài)超臨界流體——特殊的物質(zhì)狀態(tài)密度~液體→溶解能力強(qiáng)粘度~氣體→傳質(zhì)快，有利于待測(cè)組分的擴(kuò)散表面張力幾乎為0→滲透性好密度受壓力、溫度的影響大→改變對(duì)溶質(zhì)的溶解能力第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

超臨界流體萃取法（SFE）樣品的提取第十九頁，共一百二十頁。最常用的SF是CO2，它的性質(zhì)穩(wěn)定，使用安全，價(jià)格低廉，臨界點(diǎn)低（Tc=31℃和Pc=7.4MPa），易于操作。加入甲醇、氯仿、苯等改變極性→提取不同極性的成分第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

超臨界流體萃取法（SFE）樣品的提取第二十頁，共一百二十頁。SFE具有優(yōu)點(diǎn)：速度快萃取效率高、選擇性較高、節(jié)省溶劑、可避免使用易燃，有毒的有機(jī)溶劑

SFE不僅常用于熱不穩(wěn)定成分或揮發(fā)性成分的萃取，而且也越來越多地用于熱穩(wěn)定性成分的萃取。缺點(diǎn)：對(duì)設(shè)備要求高。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

超臨界流體萃取法（SFE）樣品的提取第二十一頁，共一百二十頁。沉淀法蒸餾法液-液萃取法

A直接萃取法B離子對(duì)萃取法色譜法消化法

關(guān)鍵——保留有效成分第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化原則：從提取液中除去對(duì)測(cè)定有干擾的雜質(zhì)，而又不損失被測(cè)定成分依據(jù)：被測(cè)定成分和雜質(zhì)在理化性質(zhì)上的差異，結(jié)合測(cè)定方法的要求第二十二頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化沉淀法原理：它是基于某些試劑與被測(cè)成分或雜質(zhì)生成沉淀，分離沉淀或保留溶液以得到精制的方法。這種方法須注意：

1）過量的試劑若干擾被測(cè)組分的測(cè)定，則應(yīng)設(shè)法除去；

2）大量雜質(zhì)以沉淀形式除去時(shí)，被測(cè)成分不應(yīng)產(chǎn)生共沉淀而損失；

3）被測(cè)組分生成沉淀時(shí)，其沉淀經(jīng)分離后可重新溶解或直接用重量法測(cè)定。復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測(cè)定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部分有機(jī)堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。

第二十三頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化蒸餾法原理：利用某些被測(cè)成分具有揮發(fā)性,收集餾出液進(jìn)行含量測(cè)定.目前以水蒸氣蒸餾法應(yīng)用較多。

1）可分為共水蒸餾法（即直接加熱法）、通水蒸汽蒸餾法和水上蒸餾法。如中藥制劑中的揮發(fā)油，某些小分子生物堿（麻黃堿、檳榔堿）及丹皮酚等，都可用蒸餾法提取和分離凈化。

2）為了使揮發(fā)性成分更完全地蒸餾出來，有時(shí)也可用鹽析作用，即在蒸餾液中加入一定量的無機(jī)鹽，常用NaCl、NaSO4、MgSO4等。例六味地黃顆粒中丹皮酚含量測(cè)定

取本品約2g，研細(xì)，精密稱定，用水蒸汽蒸餾，收集餾出液約450ml，置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度?！?74nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度…。第二十四頁，共一百二十頁。直接萃取法原理：利用試樣中被測(cè)成分與干擾成分在有機(jī)溶劑中的溶解度不同，通過多次萃取來達(dá)到分離凈化的目的。萃取劑的選擇如苯、氯仿或乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等多次萃取（3-4次）調(diào)整水相酸度，提取有機(jī)酸、有機(jī)堿(非離子化)第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化液－液萃取法常用的是有機(jī)溶劑直接萃取法和離子對(duì)萃取法。第二十五頁，共一百二十頁。BH+（水相）+In-(水相)BH+·In-（水相）BH+·In-（有機(jī)相）

適合于高度電離的有機(jī)酸、堿化合物的萃?。ㄉ飰A）水相酸度的控制離子對(duì)試劑的選擇離子對(duì)萃取法原理：在適當(dāng)pH中，某些有機(jī)酸（堿）性物質(zhì)形成的離子與帶相反電荷的離子定量地結(jié)合成為弱極性的離子對(duì)，易溶于有機(jī)溶劑，使之萃取分離。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化液－液萃取法溴百里酚藍(lán)溴甲酚綠第二十六頁，共一百二十頁。分離的原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜按操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜微柱色譜，也稱固相萃取或液—固萃?。↙SE）

柱的大小：長(zhǎng)5～15cm，內(nèi)徑0.5～1cm第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法當(dāng)目標(biāo)物與填料極性相似時(shí)，樣品流過柱后，目標(biāo)物在填料上有較好的保留，而極性與填料相差較遠(yuǎn)的雜質(zhì)直接流出，再用適當(dāng)洗脫液把目標(biāo)物洗脫、收集，分析；或使雜質(zhì)保留于柱上，直接洗脫被測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定。第二十七頁，共一百二十頁。中藥制劑教研室第二十八頁，共一百二十頁。硅膠、氧化鋁鍵合相硅膠大孔樹脂聚酰胺硅藻土、纖維素離子交換樹脂

第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法——柱色譜常用的填料

第二十九頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法——硅膠、氧化鋁

硅膠作用機(jī)制：溶質(zhì)在吸附劑表面的極性吸附作用。非極性或極性低的雜質(zhì)先被洗出色譜柱，再用適當(dāng)極性的溶劑洗脫被測(cè)成分，而強(qiáng)極性的雜質(zhì)仍保留在柱上。特點(diǎn)：通常適于酸性和中性物質(zhì)的分離；如分離堿性物質(zhì)，可在展開劑中加入少量稀堿。第三十頁，共一百二十頁。如測(cè)定益母草浸膏中總生物堿含量時(shí)，使用中性氧化鋁柱，以乙醇洗脫生物堿，黃酮類成分則保留在柱上。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法——硅膠、氧化鋁

氧化鋁分離機(jī)制：溶質(zhì)在吸附劑表面的極性吸附作用堿性氧化鋁適于堿性和中性物質(zhì)的分離酸性氧化鋁適于分析酸性和中性物質(zhì)中性氧化鋁能將黃酮類成份吸附在柱上，可用于生物堿、苷的分離。第三十一頁，共一百二十頁。八寶坤順丸中國(guó)藥典2005年版一部，P311

對(duì)照品溶液的制備

取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30ug的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備取重量差異項(xiàng)下的本品，剪碎，取約2g，精密稱定，精密加入70%甲醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，通過中性氧化鋁柱（100~200目，2g，內(nèi)徑1cm，用50%甲醇濕法裝柱），收集至50ml量瓶中，再用50%甲醇洗脫，收集洗脫液至近刻度，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液10ul與供試品溶液10~15ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品每丸含白芍以芍藥苷計(jì)，不得少于2.6mg。第三十二頁，共一百二十頁。中藥制劑教研室第三十三頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法——鍵合相硅膠

借助化學(xué)反應(yīng)方法將固定液的官能團(tuán)鍵合在硅膠的表面而構(gòu)成鍵合相硅膠。有機(jī)硅烷與硅膠表面化學(xué)鍵合反應(yīng)，形成的-Si-O-Si-C-鍵是對(duì)溶劑、熱和化學(xué)穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。常用的有十八烷基鍵合相鍵合相硅膠（簡(jiǎn)稱C18或ODS）第三十四頁，共一百二十頁。第三十五頁，共一百二十頁。

第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法——大孔樹脂極性大孔樹脂：為丙稀酰胺聚合物，對(duì)極性化合物有相對(duì)強(qiáng)的吸附力非極性大孔樹脂：為苯乙烯和二乙烯苯的共聚物，對(duì)非極性水溶性成分有吸附力特點(diǎn)：表面積大，傳質(zhì)速率較高，具有不同的極性及適于吸附較大分子測(cè)定復(fù)方歸芪劑中的黃芪甲苷用大孔樹脂除去水溶性的多糖雜質(zhì)，再用30%乙醇洗脫黃芪甲苷。第三十六頁，共一百二十頁。

第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法——聚酰胺機(jī)制：主要通過與溶質(zhì)形成氫鍵而產(chǎn)生吸附作用用于含酚、酸、醌類藥物樣品液的凈化分離。測(cè)定黃酮時(shí)，用樣品的乙醇提取液上聚酰胺柱，水洗去部分雜質(zhì)，以95%乙醇洗脫總黃酮后測(cè)定。

第三十七頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法——硅藻土、纖維素

親水性填料機(jī)制：分配作用應(yīng)用：多以水基質(zhì)液為固定相，與水不混溶的有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，較親脂的成分從固定相轉(zhuǎn)移到流動(dòng)相，而被洗脫。萃取率較高（一般大于80%），無濃集作用，但洗脫劑用量較大（一般大于5ml）第三十八頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法——離子交換樹脂

特點(diǎn)：可除去樣品中的離子，防止組分分解，用于萃取樣品液中可解離化合物弱酸性藥物：中性和堿性條件下用陰離子交換樹脂柱，水及有機(jī)溶劑洗脫后，酸性溶液洗目標(biāo)成分第三十九頁，共一百二十頁。例益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的鑒別取本品10ml，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，…加在強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂柱（732Na-型，內(nèi)徑0.9cm，柱長(zhǎng)12cm）上，以水洗至流出液近無色，棄去水液，再以2mol/L氨溶液40ml洗脫，收集洗脫液…作為供試品溶液。離子型化合物第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化色譜法——離子交換樹脂

第四十頁，共一百二十頁。濕化消化——強(qiáng)酸腐蝕A硝酸—高氯酸法B硝酸—硫酸法C硫酸-硫酸鹽法干法消化——高溫?zé)胱茰y(cè)定中藥制劑中的無機(jī)元素第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化消化法第四十一頁，共一百二十頁。硝酸-高氯酸法：適用于血、尿、生物組織等生物樣品和含動(dòng)植物藥制劑的破壞，經(jīng)破壞后所得無機(jī)離子均為高價(jià)態(tài)離子，對(duì)含氮雜環(huán)類有機(jī)物破壞不夠完全。硝酸-硫酸法：適用于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)的破壞，無機(jī)金屬離子均氧化成高價(jià)態(tài)。與硫酸形成不溶性硫酸鹽的金屬離子的測(cè)定，不宜采用此法。硫酸-硫酸鹽法：經(jīng)本法破壞所得金屬離子，多為低價(jià)態(tài)。常用于含砷或銻的有機(jī)樣品的破壞。

第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化消化法——濕法消化法

第四十二頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化消化法——干法消化法

將有機(jī)物灼燒灰化以達(dá)分解的目的，本法不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷等）有機(jī)樣品的破壞。

將適量樣品置于坩鍋中，常加無水Na2CO3或輕質(zhì)MgO等以助灰化，混勻后，先小火加熱，使樣品完全炭化，然后放入高溫爐中灼燒，使其灰化完全即可。

第四十三頁，共一百二十頁。第一節(jié)含量測(cè)定樣品的處理

樣品的分離凈化消化法——干法消化法

應(yīng)用本法時(shí)要注意以下幾個(gè)問題：

1）灼燒溫度在420℃以下，以免某些被測(cè)金屬化合物的揮發(fā)。

2）檢查灰化是否完全，可將灰分放冷后，加入稍過量的稀HCl-水（1:3）或硝酸-水（1:3）溶液，振搖。若呈色或有不溶有機(jī)物，可于水浴上將溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼燒。

3）經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，但此時(shí)切勿棄去。第四十四頁，共一百二十頁。第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證分析方法驗(yàn)證的目的

是證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目

鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)檢查、原料藥及制劑中有效成分含量測(cè)定及其它成分測(cè)定驗(yàn)證內(nèi)容

準(zhǔn)確度、精密度、專屬性、線性、范圍、耐用性、檢測(cè)限、定量限、第四十五頁，共一百二十頁。指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，表示分析方法測(cè)量的正確性。用回收率（%）表示。方法：回收試驗(yàn)法

加樣回收試驗(yàn)法

第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證準(zhǔn)確度（accuracy）第四十六頁，共一百二十頁?？瞻?已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M?；厥赵囼?yàn)（化學(xué)藥品）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證準(zhǔn)確度（accuracy）第四十七頁，共一百二十頁。

已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M加樣回收試驗(yàn)（中藥）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證準(zhǔn)確度（accuracy）第四十八頁，共一百二十頁。規(guī)定的范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)或設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)

數(shù)據(jù)要求第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證準(zhǔn)確度（accuracy）第四十九頁，共一百二十頁。編號(hào)取樣量（ml）原有量（μg）加入量（μg）測(cè)得量（μg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）高13134.1137.808277.422104.0199.022.97高23134.1137.808266.54196.11高33134.1137.808273.726101.32中1289.491.868180.06698.69中2289.491.868182.147100.96中3289.491.868177.55495.96低1144.745.93489.61297.78低2144.745.93488.56695.50低3144.745.93491.039100.88中間濃度加入量與供試品含量控制在1：1一般要求在95～105%范圍內(nèi)RSD一般在3%以內(nèi)準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)建立。第五十頁，共一百二十頁。測(cè)定次數(shù)取樣量（g）制劑中淫羊藿苷量(mg)加入淫羊藿苷量(mg)測(cè)得淫羊藿苷量(mg)回收率(%)

RSD%10.10981.79641.30883.084298.401.9%20.10131.65741.30882.959899.5130.09851.61071.63603.184296.1840.10711.75131.63603.4238102.2350.10221.67121.96323.630798.8160.09861.61231.96323.529498.65回收率(%)=測(cè)得淫羊藿苷量(mg)－制劑中淫羊藿苷量(mg)×100%

加入淫羊藿苷量(mg)例：取已知含量的樣品(16.361mg/g)6份，每份約0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，每份依次精密加入淫羊藿苷對(duì)照品溶液(0.3272mg/ml)4、4、5、5、6、6ml，再加甲醇至100ml，照擬定的供試品制備方法制備加樣回收供試品溶液，精密吸取10μl注入色譜儀中，測(cè)定峰面積，按下式計(jì)算回收率，結(jié)果見下表。

第五十一頁，共一百二十頁。系指在規(guī)定測(cè)試條件下，同一均勻供試品，經(jīng)多樣取樣測(cè)定所得結(jié)果之間接近的程度。精密度是考察分析方法在不同的時(shí)間、操作人員、實(shí)驗(yàn)室，所獲得結(jié)果之間的重現(xiàn)性和重復(fù)性。在藥物分析中，常用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示。第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證精密度（precision）第五十二頁，共一百二十頁。偏差（d）：測(cè)量值與平均值之差標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）也稱變異系數(shù)（CV）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證精密度（precision）第五十三頁，共一百二十頁。重復(fù)性(repeatability)中間精密度（mid-precision)重現(xiàn)性(reproducibility)第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證精密度（precision）第五十四頁，共一百二十頁。定義：在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。要求：在規(guī)定的范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)或設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)重復(fù)性第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證精密度（precision）第五十五頁，共一百二十頁。編號(hào)取樣量（ml）峰面積平均峰面積測(cè)得量（μg）含量(μg/ml)平均值(μg/ml)RSD(%)14.00894.21088898.50323896.357055182.09345.5244.701.0924.00867.93341867.21960867.576505176.24644.0634.00876.81049878.23889877.52469178.26744.5744.00885.51129883.42120884.466245179.67844.9254.00879.37677877.07513878.22595178.41044.664.00875.81073877.34985876.58029178.07644.52取同一批號(hào)（20100701）的本品4ml，精密量取，平行取6份，依法制成供試品溶液，分別量取20μl各供試品溶液及對(duì)照品溶液注入液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算歐前胡素含量及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表，表明方法重復(fù)性好。第五十六頁，共一百二十頁。

同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。

不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。

已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度重現(xiàn)性只有在該分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)做中間精密度重現(xiàn)性第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證精密度（precision）第五十七頁，共一百二十頁。實(shí)驗(yàn)次數(shù)峰面積值平均峰面積值RSD（%）1296661295841.20.242295460329538242951175296586例精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品液(23.2μg/ml)10μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得淫羊藿苷峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見下表。第五十八頁，共一百二十頁。指在其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力；指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受到相互干擾程度的度量。常用陰性對(duì)照法。第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證專屬性（specificity）第五十九頁，共一百二十頁。A:陰性對(duì)照溶液色譜圖；B:歐前胡素對(duì)照品溶液色譜圖；C:供試品溶液色譜圖第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證專屬性（specificity）第六十頁，共一百二十頁。第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證線性(linearity)與范圍(range)

設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線性的含義范圍的含義指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間，表示：mg/L~mg/L第六十一頁，共一百二十頁。第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證線性(linearity)與范圍(range)考察方法線性與范圍可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定。n應(yīng)為5～7，用濃度c對(duì)峰高h(yuǎn)或被測(cè)物的響應(yīng)值之比進(jìn)行回歸處理，建立回歸方程，r≥0.999確定樣品濃度與峰面積/峰高是否呈線性關(guān)系

確定線性的范圍

直線是否通過原點(diǎn)目的第六十二頁，共一百二十頁。qqμg)峰面積均值0.08106201.02885201.0119200.994900.24318605.17249609.8347614.496890.32424805.34619804.7837804.221250.486361211.549191211.23081210.912350.648481617.023321614.73281612.442380.810602006.691772006.55982006.42786第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證線性(linearity)與范圍(range)第六十三頁，共一百二十頁。對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）0.09280.18560.27840.37120.464色譜峰面積126195238932366405482771603967Y=1292438.5776X+3839.1000r=0.9998樣品進(jìn)樣量在0.0928～0.464μg范圍內(nèi)，淫羊藿苷峰面積與進(jìn)樣量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。例：精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液(0.0464mg/ml)2、4、6、8、10μl注入液相色譜儀，按擬定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，測(cè)定結(jié)果下表。第六十四頁，共一百二十頁。指測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。如果條件要求苛刻，應(yīng)在方法中寫明第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證耐用性（robustness）變動(dòng)因素：測(cè)試液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時(shí)間液相色譜法：流動(dòng)相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號(hào)的同類色譜柱、柱溫，流速等。GC法：不同廠牌或批號(hào)的色譜柱、固定相，不同類型的擔(dān)體及柱溫、進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等TLC法：吸附劑或薄層板的型號(hào)和廠牌，展開溫度、濕度等第六十五頁，共一百二十頁。柱溫變動(dòng)的影響樣品不同柱溫條件下峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差%35℃25℃對(duì)照品535.3740(32h)541.07400.6892537.1292(32h)541.9327供試品883.9976(32h)889.91310.2190887.3354(32h)886.9148耐用性（robustness）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證第六十六頁，共一百二十頁。流動(dòng)相組成比例變化的影響樣品不同流動(dòng)相組成條件下峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差%63:3755:45供試品885.8881（0h）863.01731.7307%886.3683（0h）866.3838耐用性（robustness）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證第六十七頁，共一百二十頁。色譜柱的影響樣品不同色譜柱條件下峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差%色譜柱1色譜柱2對(duì)照品541.4097(40h)543.59810.3096542.4932(48h)545.0605供試品894.3388(40h)904.46230.4719898.0939(48h)899.9722耐用性（robustness）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證第六十八頁，共一百二十頁。流動(dòng)相流速的影響樣品不同流速條件下峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差%1.0ml/min*0.8ml/min對(duì)照品541.0740675.9177915.54541.9327674.57849供試品889.91311106.6318415.83886.91481118.04224供試品（μg/ml）44.3344.510.287耐用性（robustness）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證第六十九頁，共一百二十頁。定義指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或含量。要求是限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無需定量測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。檢測(cè)限（limitofdetection，LOD）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證第七十頁，共一百二十頁。確定LOD方法1.直觀法：用一系列已知濃度的供試品進(jìn)行分析，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量2.信噪比法：把已知低濃度供試品測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。

一般以信噪比為3:1或2:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限檢測(cè)限（limitofdetection，LOD）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證第七十一頁，共一百二十頁。是指在保證具有一定準(zhǔn)確度和精密度的前提下，分析方法能夠測(cè)定出的樣品中藥物的最低量。

常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。定量限（limitofquantitation,LOQ）第二節(jié)含量測(cè)定方法的驗(yàn)證第七十二頁，共一百二十頁。第七十三頁，共一百二十頁。方法總數(shù)修訂新增刪除HPLC339302820TLC3231212GC233190分光光度法18039滴定法13030重量法5011氮測(cè)定法5110揮發(fā)油測(cè)定法3001浸出物測(cè)定法13121總計(jì)4563732723儀器分析法化學(xué)分析法HPLC475GC35UV-vis41TLCS49化學(xué)法51其它41第三節(jié)常用定量分析方法第七十四頁，共一百二十頁?；瘜W(xué)分析法可見-紫外分光光度法薄層掃描法氣相色譜法高效液相色譜法熒光分析法原子吸收分光光度法第三節(jié)常用定量分析方法第七十五頁，共一百二十頁。

化學(xué)分析法所用儀器簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確。主要用于測(cè)定制劑中含量較高的一些成分及含礦物藥制劑中的無機(jī)成分，如總生物堿類、總酸類、總皂苷及礦物藥制劑等?；瘜W(xué)分析法有一定的局限性，其靈敏度低，操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，專屬性不高，對(duì)于微量成分準(zhǔn)確性不理想。包括重量分析和滴定分析第三節(jié)常用定量分析方法化學(xué)分析法第七十六頁，共一百二十頁。重量分析法揮發(fā)法萃取法沉淀法揮發(fā)法可測(cè)定具有揮發(fā)性或能定量轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性物質(zhì)的組分的含量。如：①供試品的干燥失重測(cè)定；②水分測(cè)定均屬揮發(fā)法；③中藥制劑分析中灰分及熾灼殘?jiān)臏y(cè)定等。第三節(jié)常用定量分析方法化學(xué)分析法第七十七頁，共一百二十頁。萃取法根據(jù)被測(cè)組分在互不相溶的兩相中溶解度的不同，達(dá)到分離的目的。如2000年版藥典收載的冰硼散測(cè)定冰片的含量：取本品約2.5g，精密稱定，置離心管中，用無水乙醚提取3次(6ml、3ml、2ml），每次用細(xì)玻璃棒攪拌，置離心機(jī)中，離心（每分鐘轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)）約5分鐘，合并上清液，置已稱定重量的蒸發(fā)皿中，在15～25℃放置1小時(shí)，稱定重量，即得。第三節(jié)常用定量分析方法化學(xué)分析法重量分析法第七十八頁，共一百二十頁。沉淀法是將被測(cè)組分定量轉(zhuǎn)化為難溶化合物，測(cè)定其含量的方法。如西瓜霜潤(rùn)喉片中西瓜霜的含量測(cè)定：

取本品60片，精密稱定，研細(xì)，混勻，取約18g，精密稱定，加水150ml，振搖10分鐘，離心，濾過，沉淀物用水50ml分三次洗滌，離心，濾過，合并濾液，加鹽酸1ml，煮沸，不斷攪拌，并緩緩加入熱氯化鋇試液使沉淀完全，置水浴上加熱30分鐘，靜置1小時(shí)，用無灰濾紙或已稱定重量的古氏坩堝濾過，沉淀用水分次洗滌，至洗液不再顯氯化物的反應(yīng)，干燥，并熾灼至恒重，精密稱定，與0.6086相乘，計(jì)算即得。第三節(jié)常用定量分析方法化學(xué)分析法重量分析法第七十九頁，共一百二十頁。滴定分析法酸堿滴定法沉淀滴定法配位滴定法氧化還原滴定法第三節(jié)常用定量分析方法化學(xué)分析法第八十頁，共一百二十頁。酸堿滴定法適用于測(cè)定中藥制劑中所含的生物堿、有機(jī)酸、內(nèi)酯類組分的含量。對(duì)于K·C>10-8酸、堿組分，可在水溶液中直接滴定。對(duì)于K·C<10-8的弱有機(jī)酸、生物堿或水中溶解度很小的酸堿，只能采用間接滴定或非水滴定法測(cè)定。

第三節(jié)常用定量分析方法化學(xué)分析法滴定分析法第八十一頁，共一百二十頁。例：顛茄酊中生物堿的含量測(cè)定精密量取本品100ml，置蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸發(fā)至約10ml，移至分液漏斗中，蒸發(fā)皿用0.1mol/L硫酸溶液10ml分次洗滌，洗液并入分液漏斗中，用氯仿分次振搖，每次10ml，至氯仿層無色，合并氯仿液，用0.1mol/L硫酸溶液10ml振搖洗滌，洗液并入酸液中，加過量的濃氨試液使呈堿性，迅速用氯仿分次振搖提取，至生物堿提盡。每次得到的氯仿液均用同一水10mL洗滌，棄去水液，合并氯仿液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，并在80℃干燥2小時(shí)，殘?jiān)勇确?ml使溶解，精密加硫酸滴定液（0.01mol/l）20ml，置水浴上加熱，除去氯仿，放冷，加甲基紅指示液1～2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/l）滴定。每1

ml硫酸滴定液（0.01mol/l）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿。第八十二頁，共一百二十頁。沉淀滴定法銀量法適用于測(cè)定中藥中無機(jī)鹵化物、有機(jī)氫鹵酸鹽及有機(jī)鹵化物四苯硼鈉法適用于測(cè)定生物堿的含量亞鐵氰化鉀法

第三節(jié)常用定量分析方法化學(xué)分析法滴定分析法第八十三頁，共一百二十頁。配位滴定法包括EDTA法和硫氰酸銨法。用以測(cè)定鞣質(zhì)、生物堿及含Ca+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等礦物類制劑的含量。如①萬氏牛黃清心丸等的含量測(cè)定就采用硫氰酸銨法；②牛黃解毒片中石膏的測(cè)定。氧化還原滴定法用于測(cè)定氧化還原性物質(zhì)，酚類、糖類、含F(xiàn)e、As的中藥制劑。如①磁朱丸中全鐵的含量測(cè)定采用鈰量法；②牛黃解毒片中雄黃的測(cè)定；③丹皮酚注射液中丹皮酚的測(cè)定。第三節(jié)常用定量分析方法化學(xué)分析法滴定分析法第八十四頁，共一百二十頁。該法是中藥及其制劑含量測(cè)定的一種常用方法,具有靈敏度高，精度好和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。該法要求被測(cè)成分本身或其顯色產(chǎn)物對(duì)可見－紫外光具有選擇性吸收。按測(cè)定波長(zhǎng)數(shù)目不同分為單波長(zhǎng)光譜法和多波長(zhǎng)光譜法。

第三節(jié)常用定量分析方法可見-紫外分光光度法第八十五頁，共一百二十頁。單波長(zhǎng)光度法

特點(diǎn)：選擇被測(cè)成分的λmax為測(cè)定波長(zhǎng)，而共存組分在此波長(zhǎng)處基本無吸收吸收系數(shù)法對(duì)照品比較法標(biāo)準(zhǔn)曲線法

第三節(jié)常用定量分析方法可見-紫外分光光度法第八十六頁，共一百二十頁。分類方法特點(diǎn)吸收系數(shù)法測(cè)定所配供試品溶液在規(guī)定波長(zhǎng)的吸收度，根據(jù)被測(cè)成分的吸收系數(shù)（E1%1cm）計(jì)算其含量①對(duì)儀器要求高，注意儀器波長(zhǎng)、空白吸收的校正，吸收度準(zhǔn)確度的檢定和雜散光的檢查②無需對(duì)照品，方法簡(jiǎn)便對(duì)照品比較法在同樣條件下配制對(duì)照品溶液和供試溶液，且使前者中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為后者中被測(cè)成分的量的100%±10%，用規(guī)定波測(cè)定二者的吸收度，則可計(jì)算出供試品中被測(cè)成分的濃度或含量對(duì)儀器要求較高標(biāo)準(zhǔn)曲線法配制一系列不同濃度的對(duì)照品溶液（常為5個(gè)），在相同條件下分別測(cè)定吸收度，繪制A-C曲線，或求出其回歸直線方程。在相同條件下，測(cè)定供試品溶液的吸收度，就可求得供試品中被測(cè)成分的濃度或含量。①本法對(duì)儀器的精度要求不高，有時(shí)標(biāo)準(zhǔn)曲線不通過原點(diǎn)，只要重現(xiàn)性好也可使用②該法在比色法中最常用第八十七頁，共一百二十頁。例：華山參片中莨菪堿的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備精密稱取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品，加水制成每1ml相當(dāng)于含莨菪堿7μg的溶液，即得供試品溶液的制備取本品40片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量，置具塞錐形瓶?jī)?nèi)，精密加入枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（PH4.0）25ml，振搖5分鐘，放置過夜，用干燥濾紙濾過，取續(xù)濾液，即得測(cè)定法精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各2ml，分別置分液漏斗中，各精密加枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（PH4.0）10ml，再精密加入用上述緩沖液配制的0.04%溴甲酚綠溶液2ml，搖勻，用10ml氯仿振搖提取5分鐘，待溶液完全分層后，分取氯仿液，用氯仿濕潤(rùn)的濾紙濾入25ml量瓶中，再用氯仿提取3次，每次5ml，依次濾入量瓶中，并用氯仿洗滌濾紙，濾入量瓶中，加氯仿至刻度。照分光光度法（附錄ⅤB）分別在415nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得第八十八頁，共一百二十頁。供試品溶液中若有多種組分共存，可通過測(cè)定多波長(zhǎng)處的吸收度，采用適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)處理方式進(jìn)行多組分的同時(shí)測(cè)定，或者排除共存組分干擾，測(cè)定其中的某個(gè)組分。包括雙波長(zhǎng)法（包括等吸收點(diǎn)法和系數(shù)倍率法）、三波長(zhǎng)法、導(dǎo)數(shù)光譜法和差示光譜法等。第三節(jié)常用定量分析方法可見-紫外分光光度法多波長(zhǎng)光度法第八十九頁，共一百二十頁。第三節(jié)常用定量分析方法可見-紫外分光光度法多波長(zhǎng)光度法——等吸收點(diǎn)法

設(shè)a、b分別為干擾組分和被測(cè)組分，λ2為測(cè)定波長(zhǎng)（λS），λ1為參比波長(zhǎng)（λR）。①選擇λ1和λ2的兩個(gè)基本條件：（i）a在λ1和λ2處應(yīng)具有相同的吸收度，即ΔAa=Aaλ2-Aaλ1=0，以便消除a的干擾。（ii）b的ΔAb=Abλ2-Abλ1應(yīng)足夠大，以便提高測(cè)定的靈敏度和準(zhǔn)確度。通常λ2選在b的λmax附近。

②定量公式△A

=△Aa

+

△Ab

=

△Ab

=（Ebλ2

-

Ebλ1

）·

L

·

Cb

=

K

Cb

即△A與Cb成線性關(guān)系，而與干擾組分濃度無關(guān)第九十頁，共一百二十頁。樣品經(jīng)薄層分離后，用一定波長(zhǎng)的光掃描吸收紫外可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)，用薄層色譜掃描儀（光密度計(jì)）測(cè)量被斑點(diǎn)反射或斑點(diǎn)發(fā)射的光束強(qiáng)度的變化而定量，可用于藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定。根據(jù)薄層掃描的測(cè)定方式分為薄層吸收掃描法和薄層熒光掃描法二種方法。第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法第九十一頁，共一百二十頁。薄層吸收掃描法第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法用鎢燈或氘燈為光源在波長(zhǎng)為200～800nm范圍內(nèi)選擇合適波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。Beer定律Kubelka-Munk理論散射參數(shù)（SX）SX=0（即薄層固定相無散射作用）時(shí)，A與KX呈線性關(guān)系，服從Beer定律。SX>0時(shí)，透射法的A值隨著SX增大而增大，而反射法的A值隨SX的增大而減小。薄層板的散射現(xiàn)象第九十二頁，共一百二十頁。用于定量分析時(shí)需對(duì)曲線進(jìn)行處理：曲線較直法：島津CS系列采用該法。該法特點(diǎn)：需知SX值，根據(jù)SX值，將Kubelka-Munk曲線校正為直線。計(jì)算機(jī)回歸法：Camag儀器采用該法。由計(jì)算機(jī)根據(jù)最小二乘法原理對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定值進(jìn)行相關(guān)分析，得到最佳回歸方程。不需要SX值。

薄層吸收掃描法第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法第九十三頁，共一百二十頁。薄層熒光掃描法第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法基本原理：F=KC

光源：氙燈或汞燈。靈敏度：最低可測(cè)到10～50pg。適用范圍：適合于本身具有熒光或經(jīng)過適當(dāng)處理后可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)的測(cè)定。

Kubelka-Munk理論不適用于薄層熒光掃描，無需進(jìn)行曲線校直。第九十四頁，共一百二十頁?？疾靸?nèi)容：標(biāo)準(zhǔn)曲線考察分離度考察重復(fù)性考察準(zhǔn)確度考察第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法新建薄層掃描定量方法必須進(jìn)行方法考察，以說明新建方法的可靠性。第九十五頁，共一百二十頁。第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法適于用Kubelka-Munk曲線校直法進(jìn)行定量校準(zhǔn)的儀器①檢查所選擇的散射參數(shù)SX值是否適宜。SX值適宜則工作曲線被校為直線，否則，調(diào)整SX值再校正，直至工作曲線成直線為止。②考察工作曲線是否過原點(diǎn)，以確定采用一點(diǎn)法或二點(diǎn)法定量。③確定點(diǎn)樣量的線性范圍。即使采用曲線校直，也只是在一定點(diǎn)樣量范圍內(nèi)工作曲線為直線，因此需確定點(diǎn)樣量的上、下限。第九十六頁，共一百二十頁。第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法定量峰與相鄰峰之間較好分離，分離度（R）應(yīng)大于1.0按擬定的含量測(cè)定方法，對(duì)同一批樣品進(jìn)行多次測(cè)定（平行試驗(yàn)至少6次以上），計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差，RSD應(yīng)不大于3%。

至少需要6次試驗(yàn)，在供試品中加入純品，測(cè)定其含量。

加樣回收率要求在95%～105%之間。第九十七頁，共一百二十頁?；貧w曲線法內(nèi)標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)一點(diǎn)法外標(biāo)兩點(diǎn)法第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法第九十八頁，共一百二十頁。①外標(biāo)一點(diǎn)法工作曲線通過原點(diǎn)時(shí)可用外標(biāo)一點(diǎn)法定量。只需點(diǎn)一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，與供試液同板展開，對(duì)比，測(cè)定組分含量，其計(jì)算公式為：C=F1·A式中：C為組分的重量或濃度，A為測(cè)得該組分的峰面積，F(xiàn)1為直線的斜率。第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法薄層色譜掃描最常用的定量方法第九十九頁，共一百二十頁。②外標(biāo)二點(diǎn)法工作曲線不通過原點(diǎn)時(shí)，只能用外標(biāo)二點(diǎn)法定量，至少需點(diǎn)二種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（或一種濃度兩種點(diǎn)樣量），才能決定一直線,其計(jì)算公式為：C=F1A+F2

式中：C、A同前，F(xiàn)1為直線的斜率或比例常數(shù)，F(xiàn)2為縱坐標(biāo)的截距，F(xiàn)1和F2值由儀器自動(dòng)算出。

第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法第一百頁，共一百二十頁。注意事項(xiàng)：點(diǎn)樣量必須準(zhǔn)確宜用定量毛細(xì)管點(diǎn)樣。采用隨行標(biāo)準(zhǔn)法，即供試品與標(biāo)準(zhǔn)品交叉點(diǎn)在同一板上；為減小誤差同一薄板上供試品點(diǎn)樣不得少于4個(gè)，對(duì)照品每一濃度不得少于2個(gè)；調(diào)整供試品與標(biāo)準(zhǔn)溶液的點(diǎn)樣量，使其峰面積相接近；第三節(jié)常用定量分析方法薄層掃描法外標(biāo)兩點(diǎn)法外標(biāo)一點(diǎn)法第一百零一頁，共一百二十頁。應(yīng)用范圍：主要用于測(cè)定含揮發(fā)油及其他揮發(fā)性組分的含量。氣相進(jìn)樣量小第三節(jié)常用定量分析方法氣相色譜法理論塔板數(shù)n：對(duì)柱效高低的評(píng)價(jià)指標(biāo)，n高，則柱效高，分離效果好。理論塔板數(shù)低于規(guī)定值，則要考慮更換色譜柱。速率理論：說明色譜柱、載氣、柱溫等對(duì)柱效的影響。分離度R：R≥1.5時(shí)，表明兩峰完全分離。系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)：理論塔板數(shù)、分離度、重復(fù)性、拖尾因子等。實(shí)驗(yàn)條件的選擇：固定相、柱溫、載氣等。定量分析方法：歸于化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法。第一百零二頁，共一百二十頁。優(yōu)點(diǎn)：可抵消儀器穩(wěn)定性差、進(jìn)樣量不夠準(zhǔn)確等原因所帶來的定量分析誤差。缺點(diǎn)：樣品的配制麻煩，選擇化學(xué)結(jié)構(gòu)、物理性質(zhì)與待測(cè)組分相似的純品作為內(nèi)標(biāo)物不易尋找。氣相色譜法第三節(jié)常用定量分析方法內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)物的選擇原則：①應(yīng)是樣品中不存在的純物質(zhì)。②加入量應(yīng)接近于被測(cè)成分。③其色譜峰應(yīng)位于被測(cè)成分色譜峰附近且與之完全分離。

第一百零三頁，共一百二十頁。同一檢測(cè)器對(duì)不同物質(zhì)具有不同的響應(yīng)值，故不能用峰面積直接計(jì)算的被測(cè)成分的含量，要引入校正因子（f）。藥典中采用的是相對(duì)重量校正因子（fw）.

即被測(cè)成分單位峰面積所相當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)量（Mi/Ai）是內(nèi)標(biāo)物單位峰面積所相當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)量（Ms/As）的多少倍。

Mi/Aifw=Ms/As內(nèi)標(biāo)法加校正因子氣相色譜法第三節(jié)常用定量分析方法內(nèi)標(biāo)法AsCi

=

f

CsAi校正因子經(jīng)常不知，可采用藥典方法測(cè)定校正因子再用內(nèi)標(biāo)法.第一百零四頁，共一百二十頁。

課間習(xí)題：十滴水軟膠囊中樟腦含量的測(cè)定

本品由樟腦、干姜、大黃、小茴香、肉桂、辣椒、桉油等七味中藥制成，樟腦是其主成分之一，具升華性，故采用氣相色譜法，以樟腦為對(duì)照品，薄荷腦為內(nèi)標(biāo)物，對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以聚乙二醇（PEG）-20M為固定相，涂布濃度為10%，柱溫150℃。理論塔板數(shù)按樟腦峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，樟腦峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于2。

校正因子測(cè)定

精密稱取樟腦對(duì)照品（r）50mg，置10ml量瓶中，精密加入薄荷腦內(nèi)標(biāo)物質(zhì)(s)50mg，加無水乙醇至刻度，搖勻，精密量取1～2μl，注入氣相色譜儀，Ar=211948、As=215835，計(jì)算校正因子（保留四位有效數(shù)字）。第一百零五頁，共一百二十頁。

測(cè)定法

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取0.8g，精密稱定0.7956g，置具塞試管中，用無水乙醇提取5次，每次4ml，分取乙醇提取液，合并，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，精密加入薄荷腦125mg，使溶解，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液(i＋s)。精密量取1～2μl，注入氣相色譜儀測(cè)定，Ai＝108685、As＝123544，計(jì)算即得（保留兩位有效數(shù)字)。解答問題①本法屬于氣液分配GC還是氣固吸附GC？②采用的是外標(biāo)法還是內(nèi)標(biāo)法？

③求算樟腦的含量。(藥典規(guī)定，本品每粒含樟腦不得少于53mg。)課間習(xí)題：十滴水軟膠囊中樟腦含量的測(cè)定第一百零六頁，共一百二十頁。解：求算校正因子（f）f=

(As

/

AR)(MR/Ms)=

(215835

/211948)

/

(50mg

/

50mg)＝

1.108求算供試液中樟腦的濃度Ci（mg/ml）Ci

=f

Cs

=

1.108X

X5

mg/ml

=

6.30mg/mlAsAi123544108685課間習(xí)題：十滴水軟膠囊中樟腦含量的測(cè)定第一百零七頁，共一百二十頁。應(yīng)用范圍：適用于分離低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)條件的選擇：色譜柱的選擇、洗脫方式的選擇、檢測(cè)器的選擇、HPLC前處理色譜柱的選擇：反相色譜柱、正相色譜柱、離子對(duì)色譜柱

第三節(jié)常用定量分析方法高效液相色譜法第一百零八頁，共一百二十頁。定量分析方法外標(biāo)法內(nèi)加法

第三節(jié)常用定量分析方法高效液相色譜法第一百零九頁，共一百二十頁。

課間習(xí)題.牛黃解毒片中黃芩的含量測(cè)定

本品由牛黃、大黃、黃芩、冰片、石膏等八味中藥制成。中國(guó)藥典以黃芩苷為指標(biāo)，采用HPLC測(cè)定其中黃芩的含量。

（1）色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

固定相：用十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2），流速1ml/min；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為315nm；理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

（2）對(duì)照品溶液制備

精密稱取在60℃減壓干燥4小時(shí)的黃芩苷對(duì)照品適量，以甲醇溶解配成每1ml中含31.2μg的對(duì)照品溶液。第一百一十頁，共一百二十頁。

（3）供試品溶液制備

取牛黃解毒片20片，剝?nèi)ヌ且拢芊Q定6.254g，研細(xì)，精密稱取1.045g，加70%乙醇30ml，超聲處理20分鐘，放冷濾過，濾液置50ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V于同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得。

（4）測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl進(jìn)樣，測(cè)得對(duì)照品及供試品中黃芩苷的峰面積分別為A供＝4340441，A對(duì)＝3945856?！窘獯稹竣俨捎玫氖峭鈽?biāo)法還是內(nèi)標(biāo)法？②流動(dòng)相中為什么要加入少量磷酸？③計(jì)算黃芩苷的含量（保留兩位有效數(shù)字）。課間習(xí)題.

牛黃解毒片中黃芩的含量測(cè)定第一百一十一頁，共一百二十頁。3945856=31.2(μg/ml)×=34.3(μg/ml)4340441求算供試液中黃芩苷的濃度▲求算藥品中黃芩苷的含量

黃芩苷（mg/片）=C供×稀釋倍數(shù)×平均片重取樣量