目的基因的克隆表達(dá)

DNA在高溫時(shí)發(fā)生解鏈，溫度降低時(shí)又可復(fù)性成雙鏈。根2.反應(yīng)體系水(1)預(yù)變性：94℃,1min(4)延伸:72℃,2min(6)72℃,10min(7)16℃，保溫極DNA帶上綠色熒光標(biāo)記(4)倒入制膠板中冷卻ingbufferDNA(1)將要回收的樣本在回收膠中進(jìn)行電泳 (2)利用紫外分析儀進(jìn)行切膠，注意避免樣本經(jīng)紫外照射時(shí)間太長(zhǎng)(4)加入bufferDE-B,保證形成均一的黃色溶液 (3)T載的特點(diǎn)JM)轉(zhuǎn)化原理：菌株經(jīng)低溫預(yù)處理后，再轉(zhuǎn)移到42℃環(huán)境中，造成細(xì)胞(1)提前登記使用超凈(2)點(diǎn)酒精燈，消毒(手，臺(tái)面)(4)放入冰中30min以降溫(6)放入冰中2min900ulLB培養(yǎng)基，進(jìn)行復(fù)蘇(9)培養(yǎng)基與IPIG誘導(dǎo)劑1:1 (11)用鋁箔紙將培養(yǎng)皿包裹起來(lái)，放入培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)(3)用鑷子夾起白槍頭，從平板中挑白斑放入EP管中，進(jìn)行標(biāo)記(4)放入三角瓶中，在搖床中培養(yǎng)1-3h(3)按如下體系加樣：水(5)復(fù)蘇1-3h(6)電泳(8)標(biāo)記后培養(yǎng)(2)加入250ulbufferS1懸浮沉淀的細(xì)菌，混勻 n棄上清(洗滌作用)步驟(沖洗作用)W(10)測(cè)核酸濃度和吸光度值(1)按如下體系加樣(2)37℃水浴2-4h(4)電泳，驗(yàn)證酶切是否成功(5)膠回收(6)測(cè)核酸濃度和吸光度值酶(3)取10ul連接產(chǎn)物加入菌液，對(duì)照管什么都不加(4)放入42℃水浴鍋中進(jìn)行熱激75s(6)加入800ulLB液體培養(yǎng)基，混勻后在37℃,165-180rpm的搖床(8)放置在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(先正放1-2h,再倒置培養(yǎng))阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子(元)受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動(dòng)序列P上游還有一個(gè)分解(代謝)物基因激活蛋白(CAP)調(diào)表達(dá)。在沒(méi)有乳糖存在時(shí)，lac操縱子(元)處于阻遏狀態(tài)。此操縱子(元)即可被誘導(dǎo)。在這個(gè)操縱子(元)體系中，真正的誘導(dǎo)(2)保種將600ul菌液和400ul甘油加入保種管(防止菌株在冰 水沖洗，裝好電泳槽，將玻璃板夾緊，用力保證玻璃板下面頂?shù)?5)蛋白膠的配制分離膠(下層膠)配制：2.混勻后，用移液槍轉(zhuǎn)移至槽內(nèi)，槍內(nèi)每次留一部分，防止生成干濃縮膠(上層膠)的配制：酸銨0.02ml催化劑(6)處理樣品1.誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)后的細(xì)胞裂解液(全蛋白)bMarker-空前-重前-(空全-空上-空沉-重全-重上-重沉)后(7)染色(1)取300ml恥垢結(jié)核分枝桿菌加入300ml離心管中，(3