十八種實(shí)驗(yàn)室常用的克隆感受態(tài)細(xì)胞

感受態(tài)種類應(yīng)用DH5a實(shí)驗(yàn)室最常用的感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率高，可用于藍(lán)白斑篩選TOP10常規(guī)實(shí)驗(yàn)用克隆感受態(tài)細(xì)胞，生長(zhǎng)速度快，轉(zhuǎn)化效率高，可用于藍(lán)白斑篩選JM109提取高質(zhì)量DNA的理想菌株，可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)Mach1-T1生長(zhǎng)速度快，轉(zhuǎn)化效率高！具有噬菌體抗性JM110甲基化基因dam,dcm缺失菌株，只適用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化，一般不用于質(zhì)粒構(gòu)建XL1-Blue可提取高純度質(zhì)粒DNA，能保證高拷貝質(zhì)粒穩(wěn)定復(fù)制，可用于藍(lán)白斑篩選XL1-BlueMRF'Kan菌株來源于XL1-Blue株系，是限制酶系統(tǒng)缺失型，且具有卡那霉素抗性XL2-Blue適用于大質(zhì)粒DNA和重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，降低片段大小的偏愛性，多用于文庫(kù)構(gòu)建DB3.1適用于構(gòu)建或擴(kuò)繁含有ccdB基因的質(zhì)粒載體XL10-Gold特異性用于大質(zhì)?；蛘滟F連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫(kù)的超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞TG1生長(zhǎng)速度最快的克隆用大腸桿菌菌株之一，主要用于噬菌體展示，也可用于普通質(zhì)粒構(gòu)建HB101可抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率Stbl2適合克隆不穩(wěn)定插入片段，甲基化的基因組序列，以及慢病毒載體的構(gòu)建Stbl3慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株Stbl4慢病毒載體或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體推薦使用的菌株，電轉(zhuǎn)特別適合于文庫(kù)的構(gòu)建SURE菌株體內(nèi)重組酶系統(tǒng)整條通路被破壞，提高外源甲基化DNA的克隆效率DH10B可提取高純度DNA,適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNADH10BacDH10Bac菌株主要用于生產(chǎn)重組桿狀病毒分子（Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)）DH5a:DH5a菌株是實(shí)驗(yàn)室最常用的感受態(tài)細(xì)胞。缺失核酸內(nèi)切酶（endA），提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型（recA）減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性;lacZAM15的存在使DH5a可用于藍(lán)、白斑篩選。DH5a感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞5x108cfu/ugDNA。TOP10：TOP10菌株來源于MC1061菌株，是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的感受態(tài)細(xì)胞之一，基因型與DH10B高度類似（DH10B為galE15型，而TOP10為galU型）。TOP10生長(zhǎng)速度快（比DH5a快，但比Mach1-T1生長(zhǎng)速度慢）,10小時(shí)可見克隆，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn)。TOP10感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞5x108cfu/ugDNA。JM109：JM109菌株來源于E.coliKstrain，是提取高質(zhì)量DNA的理想菌株，recAI和endAI的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。攜帶hsdR17基因型背景，使得異源DNA不被內(nèi)源核酸酶系統(tǒng)降解。laqIqZAM15的存在使JM109可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)JM109感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)109cfu/pgDNA。Mach1-T1:Mach1-T1菌株由野生型non-K-12E.ColiW菌株改造而來，是目前生長(zhǎng)速度較快的感受態(tài)細(xì)胞之一，在平板上8h可見克隆，缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型(recA1398)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性;lacZAM15的存在使Mach1-T1可用于藍(lán)、白斑篩選；tonA突變賦予Mach1-T1菌株對(duì)噬菌體T1和T5的抗性。Mach1-T1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞3何/的DNA。JM110：JM110菌株具有硫酸鏈霉素抗性區(qū)卬；是甲基化基因damdcm缺失的菌株，提取得到的質(zhì)粒DNA，可被對(duì)dam、dcm甲基化敏感的內(nèi)切酶切割；ladqlacZAM15的存在使JM110可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，但轉(zhuǎn)化效率不高，一般不用于質(zhì)粒構(gòu)建，只適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。JM110感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率約107cfu/pgDNA。XL1-Blue:XL1-Blue菌株能保證高拷貝質(zhì)粒穩(wěn)定復(fù)制，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。hsdR17突變導(dǎo)致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。lacIqZAM15的存在使XL1-Blue菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素抗性。XL1-Blue感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞3何/的DNA。XL1-BlueMRF'Kan:XL1-BlueMRF'Kan菌株來源于XL1-Blue株系，是限制酶系統(tǒng)缺失型[A(mcrA)183,A(mcrCB-hsdSMR-mrr)173],,且具有卡那霉素抗性(KanR)，可轉(zhuǎn)化具有氯霉素或四環(huán)素抗性的質(zhì)粒。recAI和endAI的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。hsdR17突變導(dǎo)致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。ladqZAM15的存在使XL1-BlueMRF'Kan菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。XL1-BlueMRF'Kan感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞108cfu/pgDNA。XL2-Blue:XL2-Blue菌株來源于XL1-Blue菌株，為Hte(hightransformationefficiency)基因型，Hte是Stratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型，已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。Hte使得XL2-Blue適用于大質(zhì)粒DNA和重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化，降低片段大小的偏愛性，多用于文庫(kù)構(gòu)建。recAI和endAI的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。hsdSMR突變導(dǎo)致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量。lacZAM15的存在使XL2-Blue菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素和氯霉素抗性。XL2-Blue感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞109cfu/ugDNA。DB3.1DB3.1大腸桿菌菌株基因組中含有g(shù)yrA462基因，賦予其對(duì)ccdB毒性基因的抗性，特別適用于構(gòu)建或擴(kuò)繁含有ccdB基因的質(zhì)粒載體(例GATEWAYSystemvector)，此菌株具有鏈霉素抗性。DB3.1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞108cfu/ugDNA。XL10-Gold：XL10-Gold是目前轉(zhuǎn)化效率最高的感受態(tài)細(xì)胞，由Stratagene開發(fā)的特異性用于大質(zhì)?；蛘滟F連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫(kù)的超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞。XL10-Gold菌株為Hte(hightransformationefficiency)基因型，Hte是Stratagene開發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型，已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。［A(mcrA)183△(mcrCB-hsdSMR-mrr)173賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統(tǒng)；同時(shí)缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；TetR,CamR賦予菌株四環(huán)素和氯霉素抗性;lacIqZAM15的存在使XL10-Gold可用于藍(lán)、白斑篩選。XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>2x109cfu/ugDNA。轉(zhuǎn)化方法：XL10-Gold感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA(質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。42℃水浴熱激35秒(非常重要——Efficiencydecreasessharplywhencellsareheat-pulsedfor<30secondsorfor>40seconds.),迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。向離心管中加入7003不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。5000rpm離心一分鐘收菌，留取1003左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。TG1：TG1來源于E.coliK-12菌株是目前生長(zhǎng)速度最快的克隆用大腸桿菌菌株在平板上37℃,7h可見克隆。主要的噬菌體展示用菌株，同時(shí)也可用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建，ladqZAM15的存在使其可以用于藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn)；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)推薦使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液以去除菌體內(nèi)大量的核酸酶。TG1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞109cfu/ugDNA。HB101：HB101菌株是E.ColiK12菌株和E.ColiB菌株的雜合產(chǎn)物同時(shí)也是Stbl3的原始菌株）。recA13突變可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失內(nèi)切酶系統(tǒng)，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質(zhì)量；此菌株具有鏈霉素抗性；不存在lacIqZAM15,不可用于藍(lán)、白斑篩選。HB101感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞5x108cfu/ugDNA。Stbl2：Stbl2菌株來源于JM109E.colistrain,適合克隆不穩(wěn)定插入片段（正向重復(fù)序列，逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等）；mcrA突變和mcrBC-hsdRMS-mrrdeletion使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列；同時(shí)Stbl2也可用于慢病毒載體的構(gòu)建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。不存在lac!qZAM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。Stbl2感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)109cfu/ugDNA。轉(zhuǎn)化方法：.Stbl2感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻（避免用槍吸打）,冰中靜置25分鐘。42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。向離心管中加入0.9mL室溫S.O.C.或LB培養(yǎng)基（S.O.C.營(yíng)養(yǎng)豐富，可提高轉(zhuǎn)化效率）。37℃,225rpm復(fù)蘇60分鐘或30℃,225rpm復(fù)蘇90分鐘。（當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化controlpUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃，225rpm復(fù)蘇60分鐘）5000rpm離心一分鐘收菌，留取1003左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C.或LB培養(yǎng)基上。將平板倒置放于37℃或30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。（當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化controlpUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率,則需37℃培養(yǎng)過夜）Stbl3Stbl3菌株來源于HB101E.colistrain，是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株?；蚪M含有重組酶recA13突變，可有效抑制長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有鏈霉素抗性，不存在lacIqZAM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。Stbl3感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞108cfu/ugDNA。Stbl4Stbl4菌株來源于Stbl2E.colistrain，可用于慢病毒載體或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建。Stbl4菌株適合克隆不穩(wěn)定插入片段（正向重復(fù)序列，逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等）；mcrA突變和mcrBC-hsdRMS-mrrdeletion使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。ladqZAM15標(biāo)記使得Stbl4菌株可用于藍(lán)、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素抗性。唯地生物生產(chǎn)的Stbl4感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1x108cfu/ugDNA。使用方法：.Stbl4感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。向離心管中加入7003不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（LB），混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇70分鐘。當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化controlpUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃,225rpm復(fù)蘇60分鐘5000rpm離心1分鐘收集菌體，留取1003左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上，平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)17-20小時(shí)或30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)20-24小時(shí)。若轉(zhuǎn)化controlpUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃培養(yǎng)過夜。5若要獲得大量，高純度質(zhì)粒，建議在TB培養(yǎng)基中30度搖菌培養(yǎng)（以標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒PUC19為例：500ml三角瓶中加入100mlTB營(yíng)養(yǎng)液，經(jīng)30度250rpm搖菌，可提取約100-200ugPUC19質(zhì)粒）SURE真核生物DNA存在較多“十字型”、“Z字型”等二級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)，這種DNA結(jié)構(gòu)在利用傳統(tǒng)大腸桿菌進(jìn)行克隆時(shí)易被大腸桿菌體內(nèi)的重組酶系統(tǒng)或其他防御系統(tǒng)識(shí)別并對(duì)其進(jìn)行重組，刪除等破壞，導(dǎo)致很難對(duì)這類DNA進(jìn)行正確的克隆操作。SURE菌株可以解決這些問題：此菌株體內(nèi)重組酶系統(tǒng)整條通路被破壞，并且（McrA-,McrCB-,McrF-,Mrr-,HsdR-）這些限制性突變的存在賦予此菌株無法對(duì)外源DNA進(jìn)行標(biāo)記、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同時(shí)具有核酸酶（endA）突變、重組酶（recBrecJ）突變，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性。存在于F'因子上的lacIqZAM15基因使此菌株可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選;Kanr,Tetr賦予菌株卡那霉素和四環(huán)素抗性。SURE感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)5x108cfu/ugDNA。DH10B：DH10B菌株來源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突變使DH10B菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(Therefore,genomicDNA,bothprokaryoticandeukaryotic,canbeclonedefficientlyinDH10B)。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。^80lacZAM15marker的存在使DH10B可用于藍(lán)白斑篩選，rpsL賦予其鏈霉素抗性。DH10B感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率＞108cfu/ugDNA。DH10Bac：DHIOBac菌株主要用于生產(chǎn)重組桿狀病毒分子(Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng))。該菌株中含有父本桿粒bMON14272、輔助質(zhì)粒pMON7124:父本桿粒bMON14272包含mini-F復(fù)制子，卡那抗性基因,attTn7位點(diǎn)和lacZa互補(bǔ)因子；輔助質(zhì)粒pMON7124含有tnsABCD區(qū)(tnsABCDregionsuppliesthetranspositionproteinsrequiredforinsertionofthemini-Tn7fromthedonorplasmidintoitstargetsiteontheparentbacmid)，具有四環(huán)素抗性，在細(xì)胞擴(kuò)增過程中丟失，但可提高供體質(zhì)粒pFastBac(具有慶大霉素抗性)轉(zhuǎn)化后的基因轉(zhuǎn)座效率。mcrA、mcrBC及mrr突變使DHIOBac菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(Therefore,genomicDNA,bothprokaryoticandeukaryotic,canbeclonedefficientlyi