自動(dòng)生化分析儀分析技術(shù)

自動(dòng)生化分析儀分析技術(shù)第一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日教學(xué)目標(biāo)與要求掌握：自動(dòng)生化分析儀的各種分析方法，吸光度變化特點(diǎn)和結(jié)果計(jì)算方法；連續(xù)監(jiān)測(cè)法理論K值、實(shí)測(cè)K值和校準(zhǔn)K值的概念；基本分析參數(shù)；取樣周期的概念。熟悉：分立式自動(dòng)生化分析儀的分析原理；特殊分析參數(shù)；分析儀性能評(píng)價(jià)。

了解：自動(dòng)生化分析儀的發(fā)展歷史；干化學(xué)分析系統(tǒng)；自動(dòng)生化分析儀的基本操作步驟，主要的維護(hù)保養(yǎng)，自動(dòng)生化分析與手工操作的比較。2第二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日目前絕大部分臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目已實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化其中大多數(shù)由自動(dòng)生化分析儀完成該儀器以紫外－可見光分光光度法為主要檢測(cè)原理目前較多大型儀器也組合了離子選擇電極模塊利用散射比濁、電化學(xué)、電泳和色譜等技術(shù)的檢測(cè)項(xiàng)目，由其他相應(yīng)的自動(dòng)分析儀完成，在第八章中敘述

3第三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日自動(dòng)生化分析儀（automaticbiochemicalanalyzer）

提高質(zhì)量和速度減輕勞動(dòng)強(qiáng)度節(jié)約樣品和試劑有利于標(biāo)準(zhǔn)化

操作步驟程序化電腦控制自動(dòng)進(jìn)行取樣、加試劑、混勻保溫反應(yīng)、吸光度檢測(cè)結(jié)果計(jì)算、可靠性判斷數(shù)據(jù)顯示、打印、傳輸清洗等4第四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日目錄

自動(dòng)生化分析儀概述（了解和熟悉）1自動(dòng)生化分析儀的分析技術(shù)（掌握）2自動(dòng)生化分析儀的操作方法（了解）3自動(dòng)生化分析儀性能評(píng)價(jià)（熟悉）4小結(jié)與展望5返回總目錄5第五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日第一節(jié)自動(dòng)生化分析儀概述

已發(fā)展50多年，可分為：連續(xù)流動(dòng)式（continuousflowstyle）分立式（discretestyle）離心式（centrifugationstyle）近十余年增加：分析前自動(dòng)化處理模塊分析后自動(dòng)化處理模塊分立式（discretestyle）：目前最常用干化學(xué)（drychemistry）分析系統(tǒng)：急診等領(lǐng)域應(yīng)用普遍

6第六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日本節(jié)內(nèi)容一、自動(dòng)生化分析儀的發(fā)展歷史二、分立式自動(dòng)生化分析儀的分析原理三、干化學(xué)分析系統(tǒng)7第七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日一、自動(dòng)生化分析儀的發(fā)展歷史（一）連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)生化分析儀（二）分立式自動(dòng)生化分析儀（三）離心式自動(dòng)生化分析儀（四）自動(dòng)化樣品前處理系統(tǒng)（五）自動(dòng)化樣品后處理系統(tǒng)（六）模塊式分析系統(tǒng)（七）全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化8第八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（一）連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)生化分析儀1957年第一臺(tái)，Skeggs醫(yī)生提出方案，Technicon公司設(shè)計(jì)儀器組成：樣品盤：樣品集中放置在能轉(zhuǎn)動(dòng)的樣品盤上

比例泵：將樣品和試劑按比例吸取的裝置

透析器：去除蛋白質(zhì)，制備無蛋白濾液

反應(yīng)管道：樣品和試劑混合和反應(yīng)均在其內(nèi)

混合器：使管道內(nèi)樣品和試劑混合的裝置

恒溫器：能加熱反應(yīng)，可達(dá)90℃

檢測(cè)器：吸光度測(cè)定、光電轉(zhuǎn)換和信號(hào)檢測(cè)注：1960年代前許多生化測(cè)定需采用無蛋白濾液和較高溫度9第九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日自動(dòng)稀釋器流動(dòng)比色杯示意圖連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)生化分析儀部件10第十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日連續(xù)流動(dòng)式自動(dòng)生化分析儀特點(diǎn)：樣品與試劑在一條連續(xù)管道內(nèi)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)并檢測(cè)不同樣品間的交叉污染采取空氣隔絕的措施來避免

管道（通道）：通常一個(gè)管道只能測(cè)定一個(gè)項(xiàng)目

單通道和多通道式：根據(jù)管道數(shù)量而分

通道數(shù)：目前在廣義上是指分析儀能同時(shí)測(cè)定的項(xiàng)目數(shù)

應(yīng)用：是20世紀(jì)50~80年代市場(chǎng)占有率最高的儀器由于通道少、分析速度慢、試劑浪費(fèi)大，逐漸被淘汰11第十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（二）分立式自動(dòng)生化分析儀第2代自動(dòng)生化分析儀交叉污染小，形式多樣、靈活已普遍應(yīng)用詳見本節(jié)二

12第十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（三）離心式自動(dòng)生化分析儀第3代分析儀，20世紀(jì)70年代初期設(shè)計(jì)運(yùn)行特點(diǎn)：樣品和試劑分置于轉(zhuǎn)盤中各自相應(yīng)的凹槽內(nèi)，樣品在外側(cè)，試劑在內(nèi)離心使內(nèi)側(cè)試劑受離心力甩向外側(cè)凹槽內(nèi)，與樣品相互混合發(fā)生反應(yīng)一定時(shí)間后流入轉(zhuǎn)盤外圈的比色凹槽內(nèi)由光度計(jì)檢測(cè)缺點(diǎn)：同一個(gè)離心盤一般同時(shí)分析一個(gè)項(xiàng)目反應(yīng)盤中的凹槽無自動(dòng)清洗功能分析速度慢應(yīng)用：20世紀(jì)70~80年代在中國非常流行因其缺點(diǎn)故應(yīng)用逐漸減少13第十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日離心式分析儀工作原理14第十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日離心式分析儀現(xiàn)用于凝血功能指標(biāo)檢測(cè)15第十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日離心式分析儀轉(zhuǎn)盤加樣針加試劑針16第十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日能獨(dú)立工作或連接在自動(dòng)生化分析儀之前

組成：樣品投入部離心分離部開蓋部在線分注部條碼（barcode）生成及粘貼部功能：能避免血清分離、分裝、識(shí)別等環(huán)節(jié)的差錯(cuò)（四）自動(dòng)化樣品前處理系統(tǒng)17第十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日收納部離心部開栓部在線分注部非在線分注部貼條碼部閉栓部樣品分注收存部接收部自動(dòng)化樣品前處理系統(tǒng)：樣品投入部離心分離部開蓋部在線分注部條碼部18第十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日MODULARPRE-ANALYTICSMODULARANALYTICS

模塊組合加前處理19第十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日Beckman

前處理系統(tǒng)20第二十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日Beckman前處理系統(tǒng)

機(jī)械臂開塞21第二十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（五）自動(dòng)化樣品后處理系統(tǒng)主要功能：樣品加蓋和低溫儲(chǔ)存組成：關(guān)蓋部、樣品分注收存部、樣品接收部

廣義的樣品檢測(cè)后處理還包括結(jié)果審核、可疑結(jié)果復(fù)查、結(jié)果輸出等實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)（laboratoryinformationsystem，LIS）可實(shí)現(xiàn)以上功能22第二十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日樣品接收部23第二十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（六）模塊式分析系統(tǒng)20世紀(jì)90年代中期開始推出由相同或不同的兩臺(tái)或兩臺(tái)以上分析模塊組合連接：基于光度法分析原理的生化分析模塊基于離子選擇電極原理的電解質(zhì)分析模塊基于免疫發(fā)光分析原理的免疫分析模塊

各分析模塊既有各自控制系統(tǒng)又有共用的控制系統(tǒng)樣品通過傳送帶在各模塊之間進(jìn)行傳遞模塊式分析系統(tǒng)又稱為組合式自動(dòng)分析儀24第二十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日模塊式分析系統(tǒng)日立7600全自動(dòng)生化分析儀25第二十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日自動(dòng)分析儀樣品傳送軌道26第二十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（七）全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化

（totallaboratoryautomation，TLA）指實(shí)驗(yàn)室的各種操作過程均實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化

將各種相關(guān)的自動(dòng)化分析儀器串聯(lián)起來組合成流水線式的作業(yè)，把樣品輸送到不同的檢測(cè)單元并將各個(gè)儀器的檢測(cè)結(jié)果合并輸出組成：樣品前處理系統(tǒng)樣品輸送系統(tǒng)樣品檢測(cè)單元不同檢測(cè)原理的各檢測(cè)單元往往需由同一公司生產(chǎn)以同一標(biāo)準(zhǔn)來連接，通過計(jì)算機(jī)控制運(yùn)行血細(xì)胞系統(tǒng)凝血系統(tǒng)生化系統(tǒng)免疫系統(tǒng)27第二十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日HitachiTLA28第二十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日東京大學(xué)附屬醫(yī)院TLA采血管準(zhǔn)備系統(tǒng)：病人編號(hào)、資料血液凝塊檢測(cè)單元可移動(dòng)機(jī)器人連接單元自動(dòng)平衡離心機(jī)樣品性狀檢測(cè)－再離心化學(xué)－免疫自動(dòng)化儀器單元尿液分析單元血糖和糖化血紅蛋白檢測(cè)單元血細(xì)胞計(jì)數(shù)單元29第二十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日30第三十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日二、分立式自動(dòng)生化分析儀的分析原理分立式自動(dòng)生化分析儀完全模仿手工操作方式設(shè)計(jì)特點(diǎn)：各檢測(cè)項(xiàng)目在各自獨(dú)立的反應(yīng)杯中進(jìn)行

反應(yīng)杯具有試管功能，同時(shí)又兼做比色杯

31第三十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日分立式全自動(dòng)生化分析儀貝克曼LX20生化分析儀32第三十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日HitachiClinicalChemistryAnalyzer

7600系列33第三十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日雅培Architectc800034第三十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日分立式分析儀基本結(jié)構(gòu)

（一）樣品盤或樣品架－－－（待測(cè)樣品和試管架）（二）試劑室和試劑瓶－－－（試劑架和試劑瓶）（三）反應(yīng)杯和反應(yīng)盤－－－（試管和試管架）（四）取樣和加試劑裝置－－（進(jìn)樣器和刻度吸管）（五）混勻與攪拌裝置－－－（手工混勻和漩渦振蕩器）（六）溫控和定時(shí)系統(tǒng)－－－（恒溫水浴和定時(shí)鐘）（七）光路和檢測(cè)系統(tǒng)－－－（比色計(jì)）（八）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)－－－－（計(jì)算器或電腦）（九）清洗系統(tǒng)－－－－－－（試管清洗）35第三十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（一）樣品盤或樣品架（specimendiscorrack

）樣品盤放置樣品杯或不同規(guī)格采血試管的裝置放置樣品數(shù)多，轉(zhuǎn)動(dòng)后使不同樣品到特定位置進(jìn)樣36第三十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日樣品盤（俯視圖，日立分析儀）37第三十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日樣品架一臺(tái)儀器有許多個(gè)，每個(gè)放置5或10只樣品杯或試管經(jīng)傳送帶移動(dòng)樣品到特定位置進(jìn)樣樣品架上的條形碼或底部編碼孔識(shí)別樣品架號(hào)及樣品位置號(hào)有些儀器有專用于急診樣品、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品等的可識(shí)別架

38第三十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日OLYMPUS生化分析儀的樣品架空白架校準(zhǔn)架質(zhì)控架常規(guī)架39第三十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日貝克曼LX20生化儀樣品架40第四十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日樣品架的優(yōu)點(diǎn)①隨著樣品架移動(dòng)及樣品的被檢測(cè)，可不斷追加已放置樣品杯或采血試管的樣品架②通過樣品架的移動(dòng)能將樣品傳送到另一個(gè)分析模塊甚至另一臺(tái)分析儀上再進(jìn)行分析

41第四十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日OLYMPUS生化儀上等待分析的樣品42第四十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日樣品架及其在軌道中的運(yùn)行43第四十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日雅培C8000常規(guī)樣品盤位置常規(guī)樣品位和急測(cè)樣品位44第四十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日雅培C8000分析儀急測(cè)樣品位優(yōu)先順序分別為：機(jī)上轉(zhuǎn)盤，急診/優(yōu)先位，常規(guī)位機(jī)上轉(zhuǎn)盤急診優(yōu)先位45第四十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日急測(cè)樣品位日立7600生化儀46第四十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日條形碼（barcode）

標(biāo)本條形碼：樣品杯或采血試管上包含樣品信息的條形碼包含信息如編號(hào)、患者資料、標(biāo)本類型、檢測(cè)項(xiàng)目等

樣品架條形碼或底部編碼孔試劑瓶條形碼分析儀上能安裝條碼識(shí)別器閱讀條碼上信息47第四十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（二）試劑室（reagentchamber）和試劑瓶試劑室：具有冷藏功能（1）試劑轉(zhuǎn)盤式：放置一定形狀試劑瓶，數(shù)量不等試劑盤轉(zhuǎn)動(dòng)可使某個(gè)試劑瓶到達(dá)特定的試劑吸取位置（2）試劑架形式：放置大容量任意形狀的試劑瓶由每個(gè)試劑瓶?jī)?nèi)引出一條試劑管路及其噴嘴

不同試劑間無交叉污染大型分析儀通常有第一和第二試劑室個(gè)別分析儀具有加入第三試劑的功能48第四十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日外圈為第一試劑，內(nèi)圈為第二試劑日立7600生化儀P模塊試劑倉49第四十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日奧林帕斯AU2700試劑倉（蓋子打開后）50第五十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日試劑盤樣品盤加樣機(jī)構(gòu)加試劑機(jī)構(gòu)清洗機(jī)構(gòu)攪拌機(jī)構(gòu)反應(yīng)盤反應(yīng)杯日立7170生化儀51第五十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日光學(xué)系統(tǒng)壓電攪拌清洗機(jī)構(gòu)

ISE模塊—檢測(cè)Na+、K+、Cl-165個(gè)反應(yīng)杯試劑位R1、R2雅培C8000生化儀工作面R1R252第五十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（三）反應(yīng)杯（reactioncuvette）和反應(yīng)盤反應(yīng)杯：是樣品與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的場(chǎng)所由透光性好的硬塑料或石英玻璃制成容量160μl～500μl不等，厚度0.5cm～1cm

同時(shí)用作比色杯反應(yīng)盤：由100只或更多的反應(yīng)杯圍成一圈組成

有些分析儀具有兩圈反應(yīng)杯反應(yīng)盤作恒速圓周運(yùn)動(dòng)，轉(zhuǎn)動(dòng)到某些特定位置時(shí)短暫停止，在反應(yīng)杯中加入樣品、試劑或進(jìn)行攪拌混勻53第五十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日反應(yīng)杯與反應(yīng)盤（一體化）美國TECHNICONRA系例生化儀54第五十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日雙圈比色杯組（分內(nèi)圈和外圈）日立55第五十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日反應(yīng)杯組AU2700C8000外圈內(nèi)圈56第五十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（四）取樣和加試劑裝置1．取樣裝置

組成：取樣針、取樣臂、取樣管路、取樣注射器和閥門取樣容量：一般為2μl～35μl，步進(jìn)0.1μl不等交叉污染：在吸取不同樣品時(shí)可產(chǎn)生攜帶交叉污染防止措施：對(duì)樣品針內(nèi)外壁進(jìn)行水沖洗化學(xué)惰性液隔絕樣品與取樣針內(nèi)外壁特殊功能：

液面感應(yīng)：取樣針尖上設(shè)有電子感應(yīng)器

防撞裝置：遇到阻礙時(shí)取樣針立即停止運(yùn)動(dòng)并報(bào)警

阻塞報(bào)警：某些取樣針有57第五十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日取樣裝置日立7170生化儀加樣針奧林帕斯AU2700加樣針58第五十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2．加試劑裝置組成：類似于取樣裝置（多數(shù)）取試劑量：一般為20μl～380μl，步進(jìn)1μl～5μl不等交叉污染：在吸取不同試劑時(shí)可產(chǎn)生攜帶交叉污染防止措施：對(duì)試劑針內(nèi)外壁進(jìn)行水沖洗特殊功能：

液面感應(yīng)防撞裝置預(yù)熱試劑59第五十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日第一試劑第二試劑反應(yīng)盤清洗攪拌加試劑機(jī)構(gòu)加樣品機(jī)構(gòu)奧林帕斯AU270060第六十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日灌注式加試劑裝置每種試劑單獨(dú)使用一條試劑管路和噴嘴優(yōu)點(diǎn)：不存在各試劑間的交叉污染缺點(diǎn)：管路通常較長(zhǎng)，試劑死腔較大管路中試劑無低溫保存61第六十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日日立7600生化儀灌注式加試劑裝置反應(yīng)盤62第六十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（五）混勻裝置反應(yīng)杯里的樣品與試劑需要混勻混勻方式：

攪拌混勻：用攪拌棒（stirringrod），多數(shù)

超聲混勻：可杜絕攜帶污染，極大程度減少泡沬產(chǎn)生攪拌棒混勻攪拌棒形狀：扁平棒狀或扁平螺旋狀，表面疏水材料工作方式：旋轉(zhuǎn)式攪拌震動(dòng)攪拌

防交叉污染：水洗63第六十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日C8000攪拌機(jī)構(gòu)壓電型攪拌64第六十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日奧林帕斯AU2700攪拌機(jī)構(gòu)反應(yīng)盤65第六十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日反應(yīng)杯攪拌機(jī)構(gòu)日立7600生化儀D模塊攪拌機(jī)構(gòu)66第六十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日日立7170生化儀攪拌棒試劑針試劑針清洗劑試劑室反應(yīng)盤67第六十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（六）溫浴系統(tǒng)反應(yīng)杯需浸浴在規(guī)定溫度中，溫度波動(dòng)不能大于±0.1℃一般固定在37℃溫浴方式：

水?。荷郎厮俣瓤?，溫度穩(wěn)定需加防腐劑保持水潔凈，并要定期更換循環(huán)水

空氣?。菏墉h(huán)境溫度影響較大，保養(yǎng)簡(jiǎn)單恒溫液：循環(huán)間接加熱法，兼具有空氣和水浴的優(yōu)點(diǎn)無污染、惰性的不蒸發(fā)液體用很小縫隙的空氣把比色杯與恒溫液隔開68第六十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（七）光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)由光源、單色器和信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)組成單色器：常采用光柵，選擇10～12種固定的單色光

分光方式：前分光：光源→分光元件→單色光→反應(yīng)液→檢測(cè)器

后分光：光源→反應(yīng)液→分光元件→單色光→檢測(cè)器后分光：分光后取多個(gè)固定單色光同時(shí)通過各自的信號(hào)傳送通路（如光導(dǎo)纖維）傳輸?shù)綄?duì)應(yīng)的信號(hào)檢測(cè)器

優(yōu)點(diǎn)：?jiǎn)紊髦袥]有轉(zhuǎn)動(dòng)部分，提高了檢測(cè)精度和速度69第六十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日日立生化分析儀的可選比色波長(zhǎng)：340、405、450、470、505、545、570、600、650、700、750、800nmOLYMPUS生化分析儀的可選比色波長(zhǎng)：340、380、410、450、480、520、540、570、600、660、700、750、800nm雅培C8000生化分析儀可選擇波長(zhǎng)：340、380、404、412、444、476、500、524、548、572、604、628、660、700、748、804nm70第七十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)光信號(hào)→光敏二極管→電信號(hào)→放大電路→模數(shù)轉(zhuǎn)換電路→數(shù)字信號(hào)→微處理器按各測(cè)定項(xiàng)目的分析參數(shù)選擇其波長(zhǎng)的吸光度值可選擇1或2個(gè)波長(zhǎng)71第七十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（八）清洗系統(tǒng)樣品針、試劑針和攪拌棒的隨時(shí)清洗在用于下一個(gè)樣品、試劑或反應(yīng)杯前需清洗一次多數(shù)為去離子水沖洗反應(yīng)杯的隨時(shí)清洗多數(shù)全自動(dòng)生化分析儀具有反應(yīng)杯清洗裝置一個(gè)反應(yīng)杯內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)和吸光度檢測(cè)結(jié)束后該反應(yīng)杯就被沖洗系統(tǒng)及時(shí)沖洗

沖洗過程：廢液針吸走杯內(nèi)廢液→加清洗劑洗滌并抽干→數(shù)次去離子水沖洗及抽干→吸光度檢查批檢測(cè)完成后的自動(dòng)清洗通常為清洗劑（detergent）清洗72第七十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日日立7170生化儀樣品針清洗73第七十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日日立7170生化儀攪拌棒試劑針試劑針清洗劑試劑室反應(yīng)盤試劑針外壁清洗站清洗站反應(yīng)杯74第七十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日反應(yīng)盤樣品針反應(yīng)杯清洗機(jī)構(gòu)日立7600分析儀D模塊樣品杯75第七十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日清洗針示意圖比色杯清洗劑或純水2防溢出3廢液1反應(yīng)杯清洗機(jī)構(gòu)AU270076第七十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（九）計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)控制樣品測(cè)定程序計(jì)算測(cè)定結(jié)果判斷結(jié)果準(zhǔn)確性顯示和輸出測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)儲(chǔ)存等77第七十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日三、干化學(xué)分析系統(tǒng)干化學(xué)分析技術(shù)利用固相試劑（干片試劑）測(cè)定方式：在干片試劑上滴加液態(tài)樣品載體上試劑溶解并與與樣品中待測(cè)成分發(fā)生反應(yīng)測(cè)定檢測(cè)信號(hào)的反射光強(qiáng)度“干化學(xué)”技術(shù)是相對(duì)于經(jīng)典的“濕化學(xué)”技術(shù)而言實(shí)際上是在一定潮濕狀態(tài)下的化學(xué)反應(yīng)78第七十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（一）干化學(xué)分析儀干化學(xué)儀分析儀與配套試劑組成一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)包括：血糖儀尿液化學(xué)分析儀全自動(dòng)干化學(xué)分析儀：急診化驗(yàn)室常用不同儀器隨試劑檢測(cè)原理不同采用不同監(jiān)測(cè)器79第七十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日半自動(dòng)干化學(xué)分析儀干化學(xué)試劑（正面與反面）80第八十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（二）干化學(xué)試劑片1.反射光度法

5層結(jié)構(gòu)目前普遍采用膠片涂層技術(shù)制備成的多層膜干試劑片81第八十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日①滲透擴(kuò)散層：樣品迅速均勻滲透，阻止顆粒成分和蛋白質(zhì)等大分子向下滲透②反射層：白色不透明層，下側(cè)涂布反射系數(shù)>95%的物質(zhì)如BaSO4，能隔離滲透擴(kuò)散層中有色物質(zhì)③輔助試劑層：去除血清中的內(nèi)源性干擾物，如固定維生素C氧化酶以消除血清中維生素C對(duì)H2O2的還原作用④試劑層：即反應(yīng)層，固定了該檢測(cè)項(xiàng)目所需的試劑⑤支持層：透明塑料基片，允許反射光完全透過，而樣品濃度與反射光強(qiáng)度成反比試劑層和支持層之間可加一吸水層加快樣品和試劑的滲透速度82第八十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日基于熒光反射光度法的多層膜根據(jù)免疫競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)原理，主要用于半抗原如藥物濃度測(cè)定膜結(jié)構(gòu)主要分四層擴(kuò)散層：含緩沖液、表面活性劑，及固相抗體與熒光標(biāo)記半抗原結(jié)合的復(fù)合物，并只允許小分子物質(zhì)如半抗原通過光屏層：含氧化鐵可阻止熒光標(biāo)記半抗原被激發(fā)信號(hào)層：激發(fā)光可作用于反應(yīng)產(chǎn)物基片層：起支持作用樣品中半抗原進(jìn)入擴(kuò)散層，競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合固相抗體，使一部分熒光標(biāo)記半抗原被置換下來成為游離熒光標(biāo)記半抗原，并通過光屏層進(jìn)入信號(hào)層；在激發(fā)光的作用下，由于光屏層的阻遏作用，僅信號(hào)層的熒光標(biāo)記半抗原可被激發(fā)產(chǎn)生熒光83第八十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2.基于差示電位法的多層膜常用于無機(jī)離子K+、Na+、Cl-等的檢測(cè)5層結(jié)構(gòu)：離子選擇敏感膜、參比層、氯化銀層、銀層和支持層電極：樣品電極參比電極測(cè)定方式：取一定量血清加到樣品電極的加樣槽中，再取等量參比液加入?yún)⒈入姌O的加樣槽中，通過電位計(jì)來測(cè)定這兩個(gè)電極的差示電位返回章目錄84第八十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日一、常用分析方法（一）終點(diǎn)法（二）連續(xù)監(jiān)測(cè)法二、分析參數(shù)設(shè)置（一）基本分析參數(shù)（二）特殊分析參數(shù)（三）分析參數(shù)設(shè)置舉例第二節(jié)自動(dòng)生化分析儀的分析技術(shù)

85第八十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日兩類基本分析方法各種分析儀上的一些其他方法，均可歸于這兩類之中如一點(diǎn)終點(diǎn)法、兩點(diǎn)終點(diǎn)法、兩點(diǎn)速率法等任何方法均以一定間隔時(shí)間測(cè)定化學(xué)反應(yīng)全過程吸光度值一、常用分析方法終點(diǎn)法連續(xù)監(jiān)測(cè)法正向反應(yīng)：吸光度升高負(fù)向反應(yīng)：吸光度下降正向反應(yīng)負(fù)向反應(yīng)86第八十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日時(shí)間-吸光度曲線吸光度隨時(shí)間變化的曲線稱為時(shí)間-吸光度曲線

測(cè)定吸光度的時(shí)間點(diǎn)稱為測(cè)光點(diǎn)用于計(jì)算結(jié)果的測(cè)光點(diǎn)稱為讀數(shù)點(diǎn)

87第八十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（一）終點(diǎn)法（endassay）概念：被測(cè)物在反應(yīng)過程中被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物后，化學(xué)反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)或平衡點(diǎn)，根據(jù)終點(diǎn)吸光度的大小求出被測(cè)物濃度，稱為終點(diǎn)法。該法稱為平衡法更為恰當(dāng)。終點(diǎn)法A變化特點(diǎn)：終點(diǎn)或平衡點(diǎn)吸光度基本不變透射比濁法：抗原和特異性抗體產(chǎn)生濁度反應(yīng)，濁度具光吸收能力，在生化分析儀中為透射比濁，采用終點(diǎn)法。88第八十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日1．一點(diǎn)終點(diǎn)法（onepointendassay）以時(shí)間-吸光度曲線上A基本不再改變時(shí)的第33個(gè)測(cè)光點(diǎn)為讀數(shù)點(diǎn)

計(jì)算公式：

Cu=(Au)n×Cs/(As)n

Cu、Cs為待測(cè)物和校準(zhǔn)液濃度

(Au)n、(As)n為待測(cè)物和校準(zhǔn)液終點(diǎn)ACs/(As)n為校準(zhǔn)K值89第八十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2．兩點(diǎn)終點(diǎn)法（twopointendassay）在時(shí)間-吸光度曲線上選擇兩個(gè)讀數(shù)點(diǎn)計(jì)算公式：Cu=[(Au)n-a×(Au)m]×校準(zhǔn)K值

a為反應(yīng)液體積校正系數(shù)

a=（Vs+Vr1）/（Vs+Vr1+Vr2）

Vs、Vr1、Vr2分別表示樣品、第一試劑和第二試劑的體積目前全自動(dòng)生化分析儀均具有自動(dòng)校正反應(yīng)液體積的功能校準(zhǔn)K值=Cs/[(As)n-a×(As)m]90第九十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日兩點(diǎn)終點(diǎn)法與雙試劑法兩點(diǎn)終點(diǎn)法常應(yīng)用于具有雙試劑的測(cè)定項(xiàng)目中雙試劑法：即具有兩種試劑的方法第一試劑通常只含緩沖液等成分，與樣品不起特異性反應(yīng)因此第二試劑加入前的讀數(shù)點(diǎn)吸光度相當(dāng)于樣品空白第二試劑與待測(cè)物起反應(yīng)并經(jīng)一定時(shí)間反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)終點(diǎn)測(cè)光點(diǎn)為第二讀數(shù)點(diǎn)如圖7-2中，第二試劑在第16點(diǎn)和17點(diǎn)之間加入則通常取第16點(diǎn)Am為第一讀數(shù)點(diǎn)第33點(diǎn)即最后1個(gè)測(cè)光點(diǎn)An為第二讀數(shù)點(diǎn)91第九十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日兩點(diǎn)終點(diǎn)法的作用能有效消除樣品造成的光吸收干擾如溶血(hemolysis)、黃疸(icterus)和脂濁(lipo-turbid)等酶法GLU、TC、TG、UA、CR等化學(xué)法TP、TB、DB、Ca、Pi、Mg、Fe等且都能在加R2后2～5min內(nèi)達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)故可設(shè)定兩點(diǎn)終點(diǎn)法單試劑型的項(xiàng)目只能選擇一點(diǎn)終點(diǎn)法

92第九十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日固定時(shí)間法（fixed-timeassay）為終點(diǎn)法中的特殊情況在時(shí)間-吸光度曲線上選擇的兩個(gè)讀數(shù)點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，其差值用于結(jié)果計(jì)算固定時(shí)間法可解決某些化學(xué)反應(yīng)的非特異性問題93第九十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日例如：苦味酸法測(cè)定肌酐反應(yīng)最初30s，血清中快反應(yīng)干擾物（如維生素C、丙酮酸、乙酰乙酸等）能與堿性苦味酸反應(yīng)在第二個(gè)30s，堿性苦味酸主要與肌酐反應(yīng)且此段時(shí)間－吸光度曲線的線性較好（故也可用連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定肌酐）在80s～120s及其以后，堿性苦味酸可與蛋白質(zhì)以及其它慢反應(yīng)干擾物反應(yīng)

故選用30s～80s這段固定時(shí)間為測(cè)定時(shí)間94第九十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（二）連續(xù)監(jiān)測(cè)法（continuousmonitoringassay）又稱速率法（rateassay）用于酶活性和酶法代謝物測(cè)定連續(xù)選取時(shí)間-吸光度曲線中線性期內(nèi)>4個(gè)測(cè)光點(diǎn)為讀數(shù)點(diǎn)并以其單位時(shí)間A值(ΔA/min)計(jì)算結(jié)果正向連續(xù)監(jiān)測(cè)法負(fù)向連續(xù)監(jiān)測(cè)法95第九十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日線性期各測(cè)光點(diǎn)之間的吸光度差值相等的時(shí)期圖中δ2＝δ3＝δ4，而δ1及δ5值偏小，故A1點(diǎn)至A4點(diǎn)為線性段此線性期對(duì)酶促反應(yīng)的底物來說屬零級(jí)反應(yīng)，期間的ΔA/min即為酶促反應(yīng)的初速度，其大小與被測(cè)酶活性成正比連續(xù)監(jiān)測(cè)法的優(yōu)點(diǎn)即是可確定線性期，準(zhǔn)確計(jì)算酶活性，因而使自動(dòng)生化分析儀在酶活性測(cè)定方面顯著地優(yōu)于手工法96第九十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日連續(xù)監(jiān)測(cè)法結(jié)果計(jì)算公式酶活性（U/L）＝ΔAu/min×K值代謝物濃度Cu=ΔAu/min×校準(zhǔn)K值校準(zhǔn)K值=Cs/(ΔAs/min)酶活性測(cè)定公式中的K值包括

理論K值實(shí)測(cè)K值校準(zhǔn)K值97第九十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日1．理論K值酶活性計(jì)算公式若某酶活性測(cè)定沒有可用的校準(zhǔn)品則由酶活性的國際單位定義推算得出：

酶活性（U/L）=ΔA/min×ε：指示物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)，b：比色杯光徑

VT：反應(yīng)液總?cè)萘?，Vs：樣品容量自動(dòng)生化分析儀的b一般會(huì)自動(dòng)校正為198第九十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日指示物質(zhì)常為NADH（NADPH）和對(duì)硝基酚類等在一定測(cè)定條件下的ε已被測(cè)定獲知，試劑說明書均會(huì)提供因此公式中可計(jì)算得出即為理論K值，又稱計(jì)算因子，作為分析參數(shù)輸入分析儀中如NADH（NADPH）、對(duì)硝基苯酚和對(duì)硝基苯胺在405nm的理論ε分別為6220、18700和9870L·mol-1·cm-1因酶校準(zhǔn)品制備和保存困難，故早期幾乎所有酶活性測(cè)定項(xiàng)目沒有校準(zhǔn)品，因而多數(shù)采用理論K值理論K值99第九十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2.實(shí)測(cè)K值理論K值受樣品和試劑的加量準(zhǔn)確度、比色杯光徑準(zhǔn)確度，尤其是ε的影響ε在波長(zhǎng)和溫度等不同時(shí)有所不同試劑說明書的ε可能與實(shí)際所用分析儀所測(cè)不同因而有必要獲得用戶所用分析儀的實(shí)際ε，再計(jì)算K值此為實(shí)測(cè)K值100第一百頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（1）還原型輔酶的ε測(cè)定NADH（NADPH）沒有標(biāo)準(zhǔn)純制品，配成溶液后穩(wěn)定性又較差，故不能直接用NADH或NADPH標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)定εHK法測(cè)定葡萄糖，葡萄糖消耗與NADH生成呈等摩爾關(guān)系根據(jù)A=εbC，已知b和Cs測(cè)得As便可計(jì)算NADH（NADPH）的ε例如C為10mmo1/L（0.01mol/L），Vs3.5μl，Vr335μl，b0.7cm，340nmA為0.465，則實(shí)測(cè)εNADH＝6424就是說此臺(tái)分析儀上340nm波長(zhǎng)處NADH（NADPH）的實(shí)測(cè)ε為6424，而理論上NADH（NADPH）的ε為6220利用該實(shí)測(cè)ε即可計(jì)算實(shí)測(cè)K值101第一百零一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（2）色素原底物酶促產(chǎn)物的ε測(cè)定有許多酶底物為人工合成的色素原，其本身無色，經(jīng)酶作用后釋放出黃色的反應(yīng)產(chǎn)物，在405nm波長(zhǎng)具有吸收峰最常用色素原底物及其產(chǎn)物為：

ALP：底物磷酸對(duì)硝基苯酚（4-NPP）產(chǎn)物對(duì)硝基苯酚（4-NP）

GGT：底物γ-L-谷氨酰對(duì)硝基苯胺或γ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺產(chǎn)物對(duì)硝基苯胺或5-氨基-2-硝基-苯甲酸102第一百零二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日色素原底物酶促產(chǎn)物的ε測(cè)定測(cè)定試劑：①10mmo1/L

4-NP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液②2.5mmo1/L

4-NP標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，0.84mol/LAMP緩沖液稀釋③底物緩沖液（l5mmol/L4-NPP配于0.84mol/LAMP-HCl緩沖液中，37℃，pHl0.09土0.02）實(shí)測(cè)ε4-NP＝若測(cè)得ΔA為0.460，則：測(cè)定方法：4-NP標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液5μl，底物緩沖液350μl，波長(zhǎng)405nm，光徑0.7cm，溫度37℃，測(cè)得A1；另用蒸餾水代替4-NP標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，按上述方法測(cè)得A2，4-NP標(biāo)準(zhǔn)液吸光度ΔA=A1－A2＝18662103第一百零三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日3．校準(zhǔn)K值酶校準(zhǔn)液在分析儀中測(cè)定后可自動(dòng)計(jì)算得出校準(zhǔn)K值校準(zhǔn)K值=（酶活性U/L）s/（ΔA/min）s目前，已得到公認(rèn)的酶校準(zhǔn)品已越來越多，包括ALT、AST、LDH、ALP、GGT、CK、AMY等。酶校準(zhǔn)品應(yīng)具有溯源性，并與所用試劑相配套。酶活性測(cè)定過程中的分析條件如溫度、樣品和試劑加量以及吸光度檢測(cè)等，可發(fā)生波動(dòng)或偏差，如同時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)液測(cè)定，可同等程度地影響校準(zhǔn)液和待測(cè)樣品，因此使用校準(zhǔn)K值通常優(yōu)于理論K值和實(shí)測(cè)K值。實(shí)測(cè)K值的得出較麻煩，且一般僅做一次性測(cè)定。104第一百零四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日二、分析參數(shù)設(shè)置（analysisparameters）分析參數(shù)：自動(dòng)生化分析儀需要如手工操作類似的分析參數(shù)，比如樣品加量、試劑加量、分析波長(zhǎng)、分析方法等封閉通道：某些分析儀使用配套試劑時(shí)，其分析參數(shù)已存儲(chǔ)在分析儀的硬盤中，用戶不能更改，這些項(xiàng)目稱為封閉通道開放通道：允許用戶修改或設(shè)定分析參數(shù)的分析項(xiàng)目分析參數(shù)分類：基本分析參數(shù)：若缺乏即無法測(cè)定項(xiàng)目特殊分析參數(shù)：與保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性有關(guān)，即使不設(shè)定也能測(cè)定項(xiàng)目。在不同分析儀上差別很大105第一百零五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（一）基本分析參數(shù)1．試驗(yàn)名稱（testname）：測(cè)定項(xiàng)目標(biāo)示符，常為英文縮寫2．分析方法（measuringmethod）或方法模式(assaymode)：基本方法為終點(diǎn)法和連續(xù)監(jiān)測(cè)法，其他方法均與這兩類方法有關(guān)3.測(cè)定波長(zhǎng)（primarywavelength）：可選擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)（1）主波長(zhǎng)（primarywavelength）：被檢測(cè)物吸收峰處波長(zhǎng)應(yīng)選擇離被測(cè)物吸收峰最近處，盡量避開試劑光吸收等干擾106第一百零六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（2）次波長(zhǎng)（secondarywavelength）使用次波長(zhǎng)目的：①消除噪音干擾噪音：從光源到比色杯、單色器、檢測(cè)器整個(gè)光路均可產(chǎn)生因雙波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè)，兩種波長(zhǎng)檢測(cè)產(chǎn)生的噪音基本上相同

②減少雜散光影響③減少樣品本身光吸收的干擾如溶血、黃疸和脂濁等干擾可部分消除

107第一百零七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日次波長(zhǎng)設(shè)置原則：使干擾物在主、次波長(zhǎng)處有盡可能相同的光吸收值而被測(cè)物在主、次波長(zhǎng)處的光吸收值有較大差異次波長(zhǎng)一般大于主波長(zhǎng)100nm，主要考慮脂濁問題免疫比濁法測(cè)定時(shí)次波長(zhǎng)的選擇，則是距離主波長(zhǎng)越遠(yuǎn)越好，以得到較高的靈敏度采用理論K值測(cè)定酶活性：

有些指示物在次波長(zhǎng)也有明顯的光吸收，ε必須進(jìn)行修正指示物主波長(zhǎng)ε次波長(zhǎng)εNADH3406.22×1033801.33×103對(duì)硝基苯酚4041.89×1044760.2×103對(duì)硝基苯胺40410.1×1034760.1×103DTNB40413.2×1034762.8×103108第一百零八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日4.

反應(yīng)方向(responsedirection)：正向反應(yīng)和負(fù)向反應(yīng)5．樣品量(samplevolum)：第一試劑量和第二試劑量

根據(jù)分析儀可加樣體積范圍可加試劑體積范圍反應(yīng)液總體積范圍將樣品量的常量設(shè)置到較小量（其減量可至最小加樣量）再按試劑說明書規(guī)定的試劑樣品體積比確定第一和第二試劑量三者總體積需在反應(yīng)液總體積范圍內(nèi)109第一百零九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日6.第二試劑（R2）加入時(shí)間

樣品和R1加入時(shí)間定在反應(yīng)開始時(shí)，R2時(shí)間不同分析儀有所不同某些分析儀只有一個(gè)固定時(shí)間，有些分析儀則有兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)可選可根據(jù)待測(cè)物化學(xué)反應(yīng)情況也即時(shí)間-吸光度曲線的線形而定多數(shù)情況選擇較早加入R2以利于終點(diǎn)法確實(shí)到達(dá)終點(diǎn)，連續(xù)監(jiān)測(cè)法延滯期和線性期足夠少數(shù)情況較遲加入R2如選擇性抑制法測(cè)定HDL-C，R1與血清中非HDL需充分反應(yīng)使其受抑制，這個(gè)過程需要3min～5min又如免疫抑制法測(cè)定CK-MB，R1中的抗體抑制M亞基需一定時(shí)間110第一百一十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日7.終點(diǎn)法讀數(shù)時(shí)間

一點(diǎn)終點(diǎn)法：時(shí)間-吸光度曲線最后一個(gè)測(cè)光點(diǎn)兩點(diǎn)終點(diǎn)法：分別為R2加入前的測(cè)光點(diǎn)和最后一個(gè)測(cè)光點(diǎn)111第一百一十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日8.速率法讀數(shù)時(shí)間

（1）延遲時(shí)間（delaytime）：速率法中從樣品與反應(yīng)試劑混勻開始至進(jìn)入線性期所需的時(shí)間存在原因：內(nèi)源性干擾物或抑制劑。延遲時(shí)間可因酶所存在介質(zhì)不同而略有差異確定原則：多觀察幾例濃度不等、病理情況不同的樣品的時(shí)間-吸光度曲線，選擇延遲時(shí)間最長(zhǎng)者作為確定值（2）讀數(shù)時(shí)間（readtime）：需在時(shí)間-吸光度曲線的線性期內(nèi)，在延遲時(shí)間之后即開始選擇整個(gè)線性期內(nèi)測(cè)光點(diǎn)或稍短于線性期，常1.0～2.5min測(cè)光點(diǎn)不應(yīng)少于4個(gè)（3個(gè)吸光度變化值）112第一百一十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日試驗(yàn)名稱、分析方法、測(cè)定波長(zhǎng)、反應(yīng)方向、樣品量與試劑量、第二試劑加入時(shí)間、終點(diǎn)法的讀數(shù)時(shí)間、速率法的延遲時(shí)間和讀數(shù)時(shí)間這8類參數(shù)是最主要的基本分析參數(shù)此外還有兩大類基本參數(shù)，包括校準(zhǔn)參數(shù)和質(zhì)控參數(shù)，也必需設(shè)定，分析儀才能進(jìn)行測(cè)定操作113第一百一十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日9.校準(zhǔn)參數(shù)自動(dòng)生化分析儀以紫外可見光分光光度法為分析技術(shù)，根據(jù)朗白-比爾定律，待測(cè)物濃度需與校準(zhǔn)液(標(biāo)準(zhǔn)液)濃度比較來確定計(jì)算公式：終點(diǎn)法：待測(cè)物濃度Cu=Au×校準(zhǔn)K值速率法：待測(cè)物Cu=ΔAu/min×校準(zhǔn)K值酶活性(U/L)=ΔAu/min×校準(zhǔn)K值校準(zhǔn)K值：待測(cè)物校準(zhǔn)K值＝Cs/As（或ΔAs/min）酶活性校準(zhǔn)K值＝酶活性s/(ΔA/min)s校準(zhǔn)（calibration）：對(duì)校準(zhǔn)液吸光度檢測(cè)并計(jì)算K值的過程校準(zhǔn)液濃度或酶活性已知，測(cè)得校準(zhǔn)液吸光度后即得校準(zhǔn)K值114第一百一十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日1點(diǎn)校準(zhǔn)：校準(zhǔn)曲線呈直線且過坐標(biāo)零點(diǎn)，用1個(gè)濃度校準(zhǔn)液2點(diǎn)校準(zhǔn)：校準(zhǔn)曲線呈直線但不過零點(diǎn)，需用2個(gè)濃度校準(zhǔn)液多點(diǎn)校準(zhǔn)：校準(zhǔn)曲線呈非線性需用3個(gè)以上濃度校準(zhǔn)液免疫比濁法的校準(zhǔn)曲線一般呈非線性

非線性校準(zhǔn)曲線可采用多種曲線方程擬合拋物線型采用logit方式：按校準(zhǔn)液個(gè)數(shù)選擇logit（3p）、logit（4p）或logit（5p）校準(zhǔn)曲線線形不確定或呈S型，用splain（樣條函數(shù)）方式（1）校準(zhǔn)類型和

校準(zhǔn)液個(gè)數(shù)拋物線型S型115第一百一十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（2）校準(zhǔn)液位置和校準(zhǔn)液濃度每個(gè)校準(zhǔn)品均需設(shè)定其在樣品盤或樣品架上的專用位置各檢測(cè)項(xiàng)目的校準(zhǔn)液濃度需輸入分析儀校準(zhǔn)品需要與試劑、最好與分析儀都配套，如有可能應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)因此，一個(gè)測(cè)定項(xiàng)目按其所用試劑對(duì)應(yīng)于一個(gè)校準(zhǔn)品若多個(gè)測(cè)定項(xiàng)目使用同一品牌的試劑，則該試劑公司可能制備多項(xiàng)目的混合校準(zhǔn)品116第一百一十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日10.質(zhì)控參數(shù)臨床生化所開展的定量檢測(cè)項(xiàng)目通常均需做室內(nèi)質(zhì)控每個(gè)項(xiàng)目一般要求兩個(gè)水平的質(zhì)控品需將這些質(zhì)控品的信息設(shè)置在分析儀中包括每個(gè)質(zhì)控品名稱和批號(hào)、每個(gè)測(cè)定項(xiàng)目的靶值和標(biāo)準(zhǔn)差

117第一百一十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（二）特殊分析參數(shù)1.試劑吸光度及其變化的檢查2.酶活性測(cè)定準(zhǔn)確度的監(jiān)測(cè)3.校準(zhǔn)檢查4.前帶檢查5.樣品信息監(jiān)測(cè)6.樣品預(yù)稀釋7.方法學(xué)補(bǔ)償系數(shù)8.參考范圍9.線性范圍和可報(bào)告范圍118第一百一十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日1.試劑吸光度及其變化的檢查（1）試劑空白吸光度檢查是檢查試劑質(zhì)量的一個(gè)指標(biāo)每種試劑本身有一定吸光度（AB）超出為其設(shè)定的范圍時(shí)分析儀會(huì)報(bào)警，提示試劑變質(zhì)如：ALP、GGT、AMY試劑，色素原底物可逐漸自身分解生成黃色產(chǎn)物，使其AB升高利用Trinder反應(yīng)原理的試劑，其中酚類物質(zhì)會(huì)逐漸氧化為醌類產(chǎn)物，使AB升高多種試劑中NADH可逐漸氧化為NAD+，其AB會(huì)隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降有些試劑久置后變混濁而使AB升高119第一百一十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（2）試劑空白速率監(jiān)測(cè)在連續(xù)監(jiān)測(cè)法中使用，設(shè)置在加入R1后待測(cè)物未反應(yīng)的時(shí)間段某些試劑在檢測(cè)溫度下于檢測(cè)過程的短時(shí)間內(nèi)，可發(fā)生較為明顯的自身分解等變化，使測(cè)定結(jié)果偏高或偏低如設(shè)置了此參數(shù)，便能在待測(cè)物反應(yīng)的吸光度變化速率中減去試劑空白速率，從而消除或減少這類誤差如色素原底物能自發(fā)分解產(chǎn)生黃色產(chǎn)物，使測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)正誤差120第一百二十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日試劑空白速率監(jiān)測(cè)膽紅素對(duì)堿性苦味酸速率法測(cè)定肌酐有負(fù)干擾因其在肌酐的檢測(cè)波長(zhǎng)505nm有較高光吸收且膽紅素在堿性可被氧化，在肌酐反應(yīng)過程其光吸收呈下降趨勢(shì)圖：空白速率法消除膽紅素對(duì)肌酐測(cè)定的干擾

121第一百二十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日彈性速率原理122第一百二十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2.酶活性測(cè)定準(zhǔn)確度的監(jiān)測(cè)（1）線性檢查（linearcheck）用于連續(xù)監(jiān)測(cè)法設(shè)定一個(gè)非線性度對(duì)讀數(shù)時(shí)間進(jìn)行線性判斷通過將讀數(shù)時(shí)間內(nèi)的吸光度值進(jìn)行線性回歸，計(jì)算各點(diǎn)的方差，根據(jù)方差值的大小來判斷該讀數(shù)時(shí)間是否處于線性期123第一百二十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（2）彈性速率（flexrate）酶活性測(cè)定中，當(dāng)酶活性太高，在讀數(shù)時(shí)間內(nèi)已不呈線性反應(yīng)。有些儀器具彈性速率功能，能選擇讀數(shù)時(shí)間前段仍呈線性的吸光度值計(jì)算結(jié)果，使酶活性測(cè)定的線性范圍得以擴(kuò)大（3）底物消耗限值（substrateexhaustlimit）在連續(xù)監(jiān)測(cè)法的測(cè)定項(xiàng)目中，可設(shè)置化學(xué)反應(yīng)后吸光度升高（正反應(yīng)）或下降（負(fù)反應(yīng)）的限值超過此限值說明酶反應(yīng)的底物消耗過多，已不足以維持底物的零級(jí)反應(yīng)，該檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確124第一百二十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日3.校準(zhǔn)檢查（1）離散性檢查在做校準(zhǔn)包括試劑空白時(shí)，分析儀通常都重復(fù)兩次并計(jì)算兩次吸光度的差值，其差值可做設(shè)定（2）敏感度檢查AS與AB之差應(yīng)保持相對(duì)恒定，可設(shè)定范圍（3）偏移檢查非直線及多點(diǎn)校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線中，標(biāo)準(zhǔn)液各濃度在擬和曲線中的A與實(shí)測(cè)A之差為偏移值，可設(shè)定限值（4）校準(zhǔn)系數(shù)檢查本次校準(zhǔn)K值與上次校準(zhǔn)K值比較的檢查125第一百二十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日4.前帶檢查典型抗原抗體反應(yīng)的校準(zhǔn)曲線呈S形，曲線下端，抗原（Ag）量很少，抗體過剩，免疫復(fù)合物生成很少，稱為前帶（prezone）（圖中0-A段）濁度隨Ag增加，進(jìn)入相對(duì)線性期(A-B)和平衡區(qū)(B-C)Ag繼續(xù)增加時(shí)，因抗體不足導(dǎo)致沉淀增加，濁度反下降，為抗原過剩區(qū)，稱為后帶（postzone）（C-D段）,此時(shí)測(cè)定結(jié)果可顯著偏低，這是透射比濁法的缺陷126第一百二十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日前帶檢查大多數(shù)分析儀針對(duì)以上現(xiàn)象有前帶檢查功能，方式不甚一致反應(yīng)速度比法：將添加抗血清后的反應(yīng)初速度對(duì)平均速度之比得出的前帶檢查值，與輸入的前帶界限值（％）進(jìn)行比較前帶檢查值＝×100127第一百二十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日5.樣品信息監(jiān)測(cè)

樣品溶血、脂濁、黃疸等會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生干擾按光譜吸收特性，用雙波長(zhǎng)或多波長(zhǎng)檢測(cè)其性質(zhì)和程度在600nm/570nm、700nm/660nm和505nm/480nm測(cè)定樣品吸光度比值的大小6.樣品預(yù)稀釋

設(shè)置樣品量、稀釋劑量和稀釋后樣品量三個(gè)數(shù)值便可在分析前自動(dòng)對(duì)樣品進(jìn)行高倍稀釋128第一百二十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日7.方法學(xué)補(bǔ)償系數(shù)用于糾正不同分析方法間測(cè)定結(jié)果的不一致性有斜率和截距兩個(gè)參數(shù)8.參考范圍超過此范圍的測(cè)定結(jié)果，儀器會(huì)打印出提示9.線性范圍（linearityrange）和可報(bào)告范圍

樣品結(jié)果若超過線性范圍，分析儀將提示多數(shù)分析儀會(huì)自動(dòng)將樣品減量或增量重新測(cè)定重測(cè)能達(dá)到的準(zhǔn)確范圍為可報(bào)告范圍129第一百二十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（三）分析參數(shù)設(shè)置舉例以肌酸激酶的某通用試劑盒在某分析儀上使用為例1．某生化分析儀有關(guān)參數(shù)的設(shè)置范圍總反應(yīng)容量180μl~350μ，樣品量2μl~35μlR1量20μl~270μl，R2量20μl~270μl第二試劑可加入時(shí)間為1.5min和4.5min測(cè)光點(diǎn)間隔18s，總反應(yīng)時(shí)間10min2．肌酸激酶試劑盒通用參數(shù)

樣品量50μl，R1

1000μl，37℃保溫5min，加R2

500μl波長(zhǎng)340nm，延遲時(shí)間2min，連續(xù)監(jiān)測(cè)2minNADH的ε為6220

130第一百三十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日3．根據(jù)以上條件進(jìn)行參數(shù)設(shè)置（1）按比例減少樣品量和各試劑量使反應(yīng)液總?cè)萘吭诜治鰞x180μl~350μl范圍內(nèi)選擇Vs10μl，R1量200μl，R2量100μl，則VT310μl或者Vs8μl，R1量160μl，R2量80μl，則VT248μl（2）確定第二試劑加入時(shí)間根據(jù)通用參數(shù)，應(yīng)選擇第4.5min為R2加入點(diǎn)（3）確定讀數(shù)時(shí)間由于R2在第4.5min加入，換算成監(jiān)測(cè)周期為第16、17點(diǎn)之間加上2min延時(shí)，則第24個(gè)測(cè)光點(diǎn)為第1讀數(shù)點(diǎn)選擇24~31為讀數(shù)時(shí)間

131第一百三十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（4）計(jì)算理論K值根據(jù)樣品量10μl，R1200μl，R2100μl，ε6.22，b為1，代入計(jì)算公式，則：

K=

=

=4984也可采用肌酸激酶校準(zhǔn)品，執(zhí)行校準(zhǔn)程序來得到校準(zhǔn)K值4．對(duì)新設(shè)置的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行試運(yùn)行開始運(yùn)行，分析儀對(duì)各反應(yīng)參數(shù)的邏輯合法性進(jìn)行檢測(cè)，若有錯(cuò)誤，則會(huì)顯示錯(cuò)誤信息并停機(jī)，需根據(jù)提示信息對(duì)反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行修改返回章目錄132第一百三十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日一、基本操作步驟（一）自動(dòng)生化分析儀的工作過程（二）操作前檢查和校準(zhǔn)（三）質(zhì)控品測(cè)定（四）病人標(biāo)本的測(cè)定

二、主要的維護(hù)保養(yǎng)三、自動(dòng)化分析與手工操作的比較第三節(jié)

自動(dòng)生化分析儀的操作方法133第一百三十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日一、基本操作步驟（一）自動(dòng)生化分析儀的工作過程自動(dòng)生化分析儀在測(cè)定過程中所有機(jī)械步驟均由微處理器根據(jù)已設(shè)定的程序進(jìn)行工作1．取樣、加試劑和混勻

樣品盤轉(zhuǎn)動(dòng)使樣品進(jìn)入待測(cè)位置，樣品針吸樣到反應(yīng)杯中反應(yīng)盤旋轉(zhuǎn)到一定位置；試劑轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)動(dòng)使所需試劑瓶進(jìn)入試劑吸取位置，試劑針吸取試劑到反應(yīng)杯反應(yīng)盤旋轉(zhuǎn)到一定位置，攪拌混勻134第一百三十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2．保溫反應(yīng)和吸光度檢測(cè)反應(yīng)杯內(nèi)液體在恒溫條件下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)當(dāng)反應(yīng)盤旋轉(zhuǎn)至該反應(yīng)杯通過吸光度檢測(cè)窗口時(shí)，即被檢測(cè)得到一個(gè)吸光度值；再按規(guī)定的間隔時(shí)間檢測(cè)該反應(yīng)杯的吸光度值直至總反應(yīng)結(jié)束總反應(yīng)時(shí)間一般為10min，如果18s為吸光度檢測(cè)間隔時(shí)間，則10min得到34個(gè)測(cè)光點(diǎn)分析儀能顯示或/和打印反應(yīng)全過程的時(shí)間-吸光度曲線135第一百三十五頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日3．計(jì)算、顯示或打印結(jié)果根據(jù)各測(cè)光點(diǎn)吸光度值對(duì)某一檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行結(jié)果計(jì)算并顯示或打印出每個(gè)標(biāo)本的報(bào)告也可按測(cè)定項(xiàng)目顯示或打印出全部標(biāo)本的結(jié)果136第一百三十六頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（二）操作前檢查和校準(zhǔn)

1.操作前檢查

（1）純水供給是否正常或足量各項(xiàng)分析試劑是否充足各種清洗劑是否足夠（2）光度計(jì)檢查確認(rèn)光路與檢測(cè)系統(tǒng)是否正常（可設(shè)定在自動(dòng)開機(jī)的程序中）137第一百三十七頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2.校準(zhǔn)按分析項(xiàng)目的穩(wěn)定性不同確定不同的校準(zhǔn)頻度如每日、每周、每月、每?jī)稍滦?zhǔn)，甚至每六個(gè)月校準(zhǔn)等以下情況必須進(jìn)行校準(zhǔn)：①改變?cè)噭┑姆N類或者批號(hào)若能說明改變?cè)噭┡?hào)不影響測(cè)定結(jié)果，可不進(jìn)行校準(zhǔn)②分析儀進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重要部件③出現(xiàn)失控，采取一般措施后，不能識(shí)別和糾正問題138第一百三十八頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（三）質(zhì)控品測(cè)定每批樣品測(cè)定均應(yīng)該有質(zhì)控樣品同時(shí)監(jiān)測(cè)批測(cè)定指一批樣品從開始測(cè)定到完成測(cè)定后停止的整個(gè)過程其中添加或更新試劑、進(jìn)行過有可能改變吸光度的維護(hù)等操作，均應(yīng)進(jìn)行一次質(zhì)控樣品的檢測(cè)實(shí)際工作中，通常在分析批的開始先進(jìn)行質(zhì)控品測(cè)定，如果室內(nèi)質(zhì)控符合要求即結(jié)果在控，則可進(jìn)行病人標(biāo)本的測(cè)定。失控：13S，22S，R4S，41S，10

；12S為警告出現(xiàn)失控需查找原因并加以解決失控原因包括試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、儀器因素，以及操作上的失誤139第一百三十九頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日（四）病人標(biāo)本的測(cè)定1．項(xiàng)目輸入（1）手工輸入①逐項(xiàng)輸入：將每個(gè)標(biāo)本的所有測(cè)定項(xiàng)目逐項(xiàng)地輸入②組合(profile)項(xiàng)目輸入：預(yù)先有組合項(xiàng)目設(shè)置時(shí)可輸入③批量輸入：針對(duì)有連續(xù)相同測(cè)定項(xiàng)目的標(biāo)本（2）樣品條碼識(shí)別分析儀自動(dòng)閱讀樣品條碼，識(shí)別樣品信息和需測(cè)定項(xiàng)目可杜絕樣品錯(cuò)誤和項(xiàng)目輸入錯(cuò)誤，并進(jìn)一步減輕人力消耗140第一百四十頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2．樣品測(cè)定

在開始測(cè)定畫面，輸入該批第一個(gè)標(biāo)本的標(biāo)本號(hào)，分析儀即會(huì)自動(dòng)逐個(gè)地對(duì)標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定具有條形碼的樣品不需輸入起始標(biāo)本號(hào)3．急診檢驗(yàn)

幾乎所有全自動(dòng)生化分析儀都具備“急診優(yōu)先”的功能儀器備有急診樣品分析位置或?qū)Ｓ脴悠芳芗捌鋵Ｓ镁幪?hào)在急診樣品位置上放置了樣品，并輸入急診檢驗(yàn)項(xiàng)目后，就會(huì)在常規(guī)樣品的測(cè)定過程中優(yōu)先對(duì)該樣品進(jìn)行分析測(cè)定141第一百四十一頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日二、主要的維護(hù)保養(yǎng)分析儀在操作過程中一般均能進(jìn)行主要部件自動(dòng)清洗為保證儀器正常運(yùn)行，還需嚴(yán)格按操作手冊(cè)做定期維護(hù)1．每天維護(hù)

①檢查和清洗樣品針、試劑針、攪拌棒②添加或更換試劑③添加清洗劑等142第一百四十二頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2.每周維護(hù)

①比色杯清洗②比色杯空白吸光度檢查③清洗恒溫水槽3．每月維護(hù)

清洗裝置本身、純水桶、供水過濾器、散熱器過濾網(wǎng)等4．不定期維護(hù)

對(duì)一些易磨損的消耗部件進(jìn)行檢查與更換：①進(jìn)樣注射器是否漏水，各沖洗管路是否暢通，各機(jī)械運(yùn)轉(zhuǎn)部分是否工作正常②比色杯是否需要更換③光源燈是否需要更換143第一百四十三頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日三、自動(dòng)化分析與手工操作的比較1.優(yōu)點(diǎn)

①檢測(cè)速度快②檢測(cè)靈敏度高：A1.0~3.0甚至以上且可精確到0.0001在符合郎白－比爾定律的前提下，線性上限提高③檢測(cè)準(zhǔn)確度高：能準(zhǔn)確判斷終點(diǎn)，能做連續(xù)監(jiān)測(cè)法，各種自動(dòng)監(jiān)測(cè)判斷功能④檢測(cè)精密度高：取樣和加試劑精度高，人為誤差小，偶然誤差少⑤樣品和試劑用量少⑥其他：包括能精確地控制反應(yīng)時(shí)間、精確地控制反應(yīng)溫度、能進(jìn)行復(fù)雜的結(jié)果計(jì)算如非線性計(jì)算等144第一百四十四頁，共一百五十八頁，2022年，8月28日2.缺點(diǎn)①無連續(xù)波長(zhǎng)可選：選擇合適的次波長(zhǎng)有時(shí)很困難②操作時(shí)間受限：加試劑時(shí)間只能統(tǒng)一固定在2到3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，總反應(yīng)時(shí)間只能固定在10min或15min等③操作復(fù)雜性受限：如加試劑次數(shù)；無法做復(fù)雜操作如離心、過濾、萃取、煮沸等步驟；選擇和改變反應(yīng)溫度困難④樣