魚類生理學(xué)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

魚類生理學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)一 反射中樞活動(dòng)的某些根本特征及反射弧的分析試驗(yàn)工程學(xué)時(shí)：3** 要求：■必修□選修一、試驗(yàn)?zāi)康募耙螅和ㄟ^對(duì)某些脊髓反射〔如脊蛙的屈肌反射〕的分析，了解反射弧完整性與反射活動(dòng)的關(guān)肌反射為指標(biāo)，觀看反射中樞活動(dòng)的某些根本特征，并分析它們產(chǎn)生的機(jī)制。二、試驗(yàn)根本原理：在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的參與下，機(jī)體對(duì)刺激所產(chǎn)生的具有適應(yīng)意義的規(guī)性律性反響過程稱為反射。將動(dòng)物的高位中樞切除僅保存脊髓的動(dòng)物成為脊髓動(dòng)物〔如脊蛙射過程的某些特征。反射活動(dòng)的構(gòu)造根底是反射弧。典型的反射弧由感受器、傳入神經(jīng)、神經(jīng)中樞、傳出到破壞，反射活動(dòng)就無(wú)法實(shí)現(xiàn)。特征。如：反射時(shí)〔從刺激作用于感受器至效應(yīng)器消滅反響所經(jīng)受的時(shí)間〕的長(zhǎng)短、反射活動(dòng)空間范圍的大小、反射活動(dòng)持續(xù)時(shí)間的久暫以及引起反射活動(dòng)的刺激條件等等。三、主要儀器設(shè)備及試驗(yàn)耗材：蟾蜍、硫酸溶液0.1%,0.3%,0.5%,1秒表、玻璃平皿、肌夾、搪瓷杯、小濾紙〔約1c×1c、燒杯。四、試驗(yàn)內(nèi)容或步驟：1、試驗(yàn)預(yù)備神經(jīng)干下穿一條細(xì)線備用。手術(shù)完后，用肌夾夾住動(dòng)物下頜，懸掛在鐵架臺(tái)上。2、試驗(yàn)工程〔l〕反射中樞活動(dòng)的某些根本特征①反射時(shí)的測(cè)定：在平皿內(nèi)盛適量0.1%硫酸溶液，將蟾蜍一側(cè)后肢的一個(gè)腳趾尖浸入度要全都。三次所測(cè)時(shí)間的平均值，即為此反射的反射時(shí)〔兩次試驗(yàn)間隔至少2～3mi。0.3%、0.5%、1%的硫酸溶液再重復(fù)上述測(cè)定，比較四種濃度硫酸所測(cè)之反射時(shí)是否一樣?！?〕反射弧的分析①用浸有1%硫酸溶液的小濾紙片貼在下腹部。觀看雙后肢有何反響？待反響消滅后，的細(xì)線，剪斷坐骨神經(jīng)，再重復(fù)上述試驗(yàn)，比較兩次結(jié)果有何不同？②分別將左右后肢趾尖浸入盛有1%硫酸的小平皿內(nèi)〔兩側(cè)浸沒的范圍相等且僅限于趾尖，雙側(cè)后肢是否都發(fā)生反響？〔趾尖皮膚肯定要?jiǎng)兏蓛?，再?硫酸溶液浸泡該趾尖〔切不行將其他趾尖浸入④將一1%硫酸紙片貼于左后肢皮膚，觀看引起的反響，用搪瓷杯中清水洗掉紙片及硫酸，擦干皮膚后，將探針插入脊髓腔內(nèi)反復(fù)搗毀脊髓，再重復(fù)剛剛的試驗(yàn)。結(jié)果如何？[方法評(píng)估]操作簡(jiǎn)潔、易于把握，為常規(guī)試驗(yàn)方法。[應(yīng)用意義]為了解中樞神經(jīng)系統(tǒng)某些特征及活動(dòng)規(guī)律的驗(yàn)證性試驗(yàn)統(tǒng)內(nèi)反射中樞的活動(dòng)規(guī)律及反射弧的完整與反射活動(dòng)的關(guān)系。[留意事項(xiàng)]1、離斷顱腦部位要適當(dāng)，太高可能保存局部腦組織而消滅自主活動(dòng)，太低也會(huì)影響反射的引出。2、每次用硫酸溶液或紙片處理后，應(yīng)快速用搪瓷杯中的清水洗去皮膚上殘存的硫酸，并用紗布擦干，以保護(hù)皮膚并防止沖淡硫酸溶液。測(cè)定反射時(shí)的硫酸濃度應(yīng)由低到高。3五、思考題1、何謂反射時(shí)，反射時(shí)與刺激強(qiáng)度之間有何關(guān)系？2試驗(yàn)二 魚類血液紅細(xì)胞和白細(xì)胞的計(jì)數(shù)試驗(yàn)工程學(xué)時(shí)：3** 試驗(yàn)要求：■必修□選修附件一 魚類紅細(xì)胞與白細(xì)胞的計(jì)數(shù)〔必修〕[目的與原理]含量及其差異。顯微鏡下計(jì)數(shù)肯定容積的紅、白細(xì)胞數(shù)。再將所得的結(jié)果換算為每立方mm血液中紅、白細(xì)胞個(gè)數(shù)。[試驗(yàn)對(duì)象]鯉、鯽或草魚。[試劑與器材]顯微鏡，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，計(jì)數(shù)器，魚用注射器1ml或5m棉球，紗布，擦鏡紙，小試管及試管架，移液管1ml及2m，紅、白細(xì)胞稀釋液〔或0.850.9的NaCl溶液，75的酒精，蒸餾水，抗凝劑1肝素鈉溶液或10草酸鉀溶液。[試驗(yàn)步驟]1、生疏血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板為一長(zhǎng)方形厚玻璃板。其中計(jì)數(shù)室方格大小的劃分，各種產(chǎn)品略有不同，但根本原理一樣。其中心橫溝的兩邊各有一計(jì)數(shù)室，兩計(jì)數(shù)〔圖1-5-9個(gè)大方格〔圖1-5-。大方格每邊長(zhǎng)1.0m。四角的大方格每個(gè)又分為16個(gè)中方格，這是用以2516個(gè)小方格〔用單線，中方格每邊長(zhǎng)為0.2m，計(jì)數(shù)紅細(xì)胞時(shí)，數(shù)中心大方格的5個(gè)中方格〔即四角和中心的中方格〕內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)目〔1-5-。計(jì)數(shù)室較兩邊的蓋玻片支柱低0.1m，因此，放上蓋玻片后，計(jì)數(shù)板與蓋玻片之間的距離為0.1mm，此為計(jì)數(shù)室的高度。22ml0.85~0.9%NaCl2ml1ml移液管在另一干凈的小試管內(nèi)參加白細(xì)胞稀釋液0.38ml，備用。是將魚腹部向上固定在魚解剖臺(tái)上，或用紗據(jù)解剖部位確認(rèn)已刺入心臟，可稍后拔針管，如有血液吸入即可，否則重拔出再刺。圖1-5-1血細(xì)胞計(jì)數(shù)室構(gòu)造 圖1-5-2血細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)尾動(dòng)脈取血方法〔血紅蛋白〕吸血管吸10μl20μl血液至白細(xì)胞稀釋液試管內(nèi)，輕輕擠出血液并反復(fù)吸洗2～3次。然后將血液與稀釋液混和均勻，但不行用力振蕩，以免細(xì)胞裂開。3、充液：將蓋玻片先蓋在計(jì)數(shù)板上，用干凈的吸血管吸取搖勻的稀釋血液，而流入計(jì)數(shù)室內(nèi)。但必需留意，如滴入過多時(shí)，流出室外凹溝中，易造成蓋玻片浮起，體積不準(zhǔn)；過少時(shí)，經(jīng)屢次充液，易造成氣泡，所以都應(yīng)洗去重充液。4、計(jì)數(shù)：稀釋血液滴入計(jì)數(shù)室后，須靜置2—3分鐘，然后低倍鏡下計(jì)數(shù)〔顯微鏡焦距準(zhǔn)確，縮小光圈并降低聚光器。使視野較暗。計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)，數(shù)四角四個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)〔共5個(gè)中方格〕數(shù)上不數(shù)下，〔圖1-5-計(jì)數(shù)白細(xì)胞時(shí)，如覺察每個(gè)大方格白細(xì)胞數(shù)相差1015個(gè)，表示血細(xì)胞分布不均勻。應(yīng)將計(jì)數(shù)板洗凈，重?fù)u勻稀釋血液，再充液計(jì)數(shù)。5．計(jì)算紅細(xì)胞數(shù)目：將5個(gè)中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)乘以10，000．即得每立方mm血液中紅細(xì)胞總數(shù)。1-5-3血細(xì)胞計(jì)數(shù)方式〔實(shí)心圈表示計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞，空心圈表示不應(yīng)計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞〕

3=5個(gè)中格紅細(xì)胞數(shù)×稀釋mm倍數(shù)/5個(gè)中格容積〔1〕 稀釋倍數(shù)等于稀釋液2ml除以參加血1μ〔0.01m，為200倍。〔2〕 50.2×0.2×0.1×5=0.02mm3。白細(xì)胞數(shù)目：將4個(gè)大方格內(nèi)數(shù)得白細(xì)胞總數(shù)乘以50，即每立方mm血液的白細(xì)胞總數(shù)。計(jì)算公式為：白細(xì)胞數(shù)/3=4個(gè)大方格白細(xì)胞數(shù)×稀釋倍數(shù)/4個(gè)大格容積mm〔1〕0.38ml+20μL〔0.02ml〕/0.02ml20倍。〔2〕計(jì)數(shù)室41×1×0.1×4=0.4mm3。[方法評(píng)估]自動(dòng)化分析方法，但該方法由于經(jīng)典、便利、有用，仍較廣泛用于血液檢驗(yàn)和科研實(shí)踐中。[應(yīng)用意義]紅細(xì)胞是血液中數(shù)量最多的有形成分，在正常狀況下幾乎占血容量的1／2，故使血液呈紅色粘稠混懸液。紅細(xì)胞數(shù)量正常狀況下保持相對(duì)穩(wěn)定的。多數(shù)魚100—300萬(wàn)個(gè)/mm3，400/mm3低者數(shù)十萬(wàn)/mm3。細(xì)胞數(shù)量常因魚種、年齡、外界環(huán)境變化、機(jī)體不同生理狀況〔運(yùn)動(dòng)狀況、患病、養(yǎng)分狀況等〕而消滅肯定的差異。環(huán)境變化如長(zhǎng)期缺氧紅細(xì)胞代償性增多。魚類白細(xì)胞數(shù)量隨種類、年齡、生理狀況〔產(chǎn)卵、疾病以及一些外界環(huán)境因素影響而變化，此外，魚類白細(xì)胞還與飼養(yǎng)條件、養(yǎng)分狀況有關(guān)：飽食消化力旺盛時(shí)多，長(zhǎng)期饑餓白細(xì)胞〔特別是嗜酸性白細(xì)胞〕顯著削減。[留意事項(xiàng)]1、各種用具要事前清洗。清洗吸管時(shí)依據(jù)蒸餾水〔兩次〕→95%酒精〔兩次〕→乙醚〔兩次〕的方法清洗。計(jì)數(shù)室用蒸餾水洗后，再用軟紗布或擦鏡紙吸干。2、采血要求快速、準(zhǔn)確，不能凝血，也不能有氣泡，否則棄去重采。3、血吸管用完后必需馬上清洗干凈，以防血液凝固堵塞管口。[思考題]1、綜合試驗(yàn)所得結(jié)果，與紅、白細(xì)胞的正常值相比照，有何變異？為什么？2、為什么機(jī)體正常血細(xì)胞數(shù)可維持在相對(duì)穩(wěn)定的數(shù)量水平？3、試爭(zhēng)論魚類紅細(xì)胞的正常值及其應(yīng)用意義？4、白細(xì)胞數(shù)量的變化有何生理意義？5、血細(xì)胞計(jì)數(shù)室中心的大方各中每一種方格的容積是多少？附 血細(xì)胞稀釋液1、白細(xì)胞稀釋液冰醋酸〔破壞紅細(xì)胞〕 1.5毫升1%龍膽紫〔染白細(xì)胞核便于計(jì)數(shù)〕 1毫升蒸餾水 加至100毫升2、紅細(xì)胞稀釋液NaCl (維持滲透壓) 0.5克Na2SO4 (使溶液比重增加，紅細(xì)胞分布不易下沉) 2.5克HgCl〔固定紅細(xì)胞外形〕 0.25克蒸餾水 加至100毫升附件二魚類血涂片的制作和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)〔必修〕[目的與原理]同魚類白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)和血細(xì)胞形態(tài)特征、變形率等的觀看。酶和酸性磷酸酶，吞噬力量與中性粒細(xì)胞相當(dāng)或稍弱，能吞噬抗原-抗體復(fù)合物，此外，嗜酸性粒細(xì)胞具有抗炎作用。嗜堿性粒細(xì)胞含有多種化學(xué)物質(zhì)，如組織胺、肝素和5-羥色胺等，當(dāng)抗原-抗體發(fā)生反響時(shí)，或機(jī)體在嚴(yán)寒環(huán)境中時(shí)，都能引起嗜堿性粒細(xì)胞釋放組織胺和肝素。血液中的單核細(xì)胞穿出血管壁進(jìn)入組織，變成巨噬細(xì)胞，可對(duì)抗組織內(nèi)的致病物，各種細(xì)菌和病毒。淋巴細(xì)胞有免疫功能，對(duì)異己構(gòu)型的物質(zhì)具有殺滅和消退作用。各種白細(xì)胞必需經(jīng)過染色，才易于區(qū)分其類別。常用者為瑞氏〔Wright’s〕染色法和姬姆薩(Giemsa)染色法。[試驗(yàn)對(duì)象] 魚〔淡水魚和海水魚均可。[試劑與器材] 試劑：染色液的配制：1、姬姆薩〔Giemsa〕染液的配制Giemsa粉劑0.8；甘油〔醫(yī)用50m；甲醇50m。將Giemsa37～408～12h，過濾，裝入棕色內(nèi)，密封保存?zhèn)溆?。稀釋液臨用時(shí)取Giemsa5ml，加磷酸鹽緩沖液〔pH6.4～6.8〕50ml，即為Giemsa稀釋液。pH6.4~6.8磷酸鹽緩沖液：取磷酸二氫鉀〔無(wú)水〕0.3g，磷酸氫二鈉〔無(wú)水〕0.2g，加少量蒸餾水溶解，調(diào)整pH6.4~6.81000ml。2、瑞氏〔Wright′s〕染液的配制〔1〕0.1g60ml。(2)配制步驟：①將瑞氏染料粉放人乳缽內(nèi)，加少量甲醇研磨。②將已溶解的染料倒入干凈的玻璃瓶?jī)?nèi)，剩下未溶解的染料再參加少量甲醇進(jìn)展研磨，如此反復(fù)操作，直至全部染料溶解為止。③裝入玻璃瓶?jī)?nèi)密封，在室溫下保存一周即可使用。④穎配制的染料偏堿性，放置后呈酸性，染液儲(chǔ)存時(shí)間越久，染色愈好。器材：顯微鏡，香柏油，載玻片，蓋玻片，玻片水平支架，采血針或注射器，計(jì)數(shù)器，小滴管，蠟筆，消毒棉球，瑞氏染液，pH6.4~6.8磷酸鹽緩沖液，姬姆薩染液，蒸餾水。[試驗(yàn)步驟]1、血涂片的制作：取一滴血〔采血方法見試驗(yàn)49，滴于干凈無(wú)油脂的玻片一端。左當(dāng)與血滴接觸后，血即均勻附在二玻片之間。此后以二玻片約呈30—45度的角度平穩(wěn)地向前推至玻片另一端〔圖1-5-。推時(shí)角度要全都，用力應(yīng)均勻，即推出均勻的血膜〔血膜不行過厚、過薄。將制好的血涂片晾干，不行加熱。2、血涂片的染色步驟：用蠟筆在血膜兩端各劃一道線，以免染料外溢，置涂片于水平的支架上。用小滴管將瑞氏染液滴于涂片上，并蓋滿劃出的涂片局部固定約半分鐘。用小滴管再加1.5倍緩沖液或姬姆薩〔Glemsa〕染液，輕輕搖動(dòng)，并輕吹液體使5—10分鐘。用蒸餾水沖洗〔如自來(lái)水的pH7.2左右時(shí)亦可代用。沖洗血膜時(shí)應(yīng)將玻璃片持平，沖洗后斜置血涂片于空氣中枯燥。或先用濾紙吸取水分快速枯燥，即可鏡檢。3、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)：先用低倍鏡檢查涂片及染色是否均勻。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均勻處〔一般在體尾交界處，在油鏡下由此處開頭按其形態(tài)特征進(jìn)展分類計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，記錄各種白細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)。例如：嗜中性白細(xì)胞分?jǐn)?shù)〔%〕=計(jì)數(shù)嗜中性白細(xì)胞個(gè)數(shù)/計(jì)數(shù)總白細(xì)胞個(gè)數(shù)×100%。1-5-4血涂片制備示意圖鮮紅至桔紅色；嗜堿性粒細(xì)胞顆粒呈深藍(lán)紫色；淋巴細(xì)胞核呈深藍(lán)紫色，胞質(zhì)呈天藍(lán)色；單核細(xì)胞核呈淺紫色，胞質(zhì)呈灰藍(lán)色。[方法評(píng)估]顯微鏡法白細(xì)胞分類是經(jīng)典、傳統(tǒng)的血細(xì)胞分類法，目前還無(wú)任何儀器可以完全取代。胞分類主要是從細(xì)胞的體積大小、細(xì)胞核形、細(xì)胞化學(xué)染色等方面進(jìn)展檢測(cè)，檢測(cè)速度快，確認(rèn)病理轉(zhuǎn)變還必需以顯微鏡檢查為準(zhǔn)。[應(yīng)用意義]在不同的生理狀態(tài)下，不同種類白細(xì)胞數(shù)目波動(dòng)較大。如運(yùn)動(dòng)、嚴(yán)寒、消化期、生殖期等，此外，在機(jī)體失血、劇痛、急性炎癥、慢性炎癥等病理狀態(tài)下，白細(xì)胞也增多。例如，急性感染、急性中毒、嚴(yán)峻組織損傷、惡性腫瘤等中性粒細(xì)胞增多；某些病毒、細(xì)菌感染、某些慢性感染時(shí)，淋巴細(xì)胞數(shù)量增多。[留意事項(xiàng)]1、所用玻片必需干凈，無(wú)油污。2、如染色太淺，可依據(jù)原來(lái)步驟重染；染色太深或有沉淀物則可用甲醇脫色后重染。3、如白細(xì)胞核為天藍(lán)色則染色時(shí)間過短。如紅細(xì)胞呈紫紅色，表示染色時(shí)間過長(zhǎng)。4、染色時(shí)切勿使染液枯槁，否則發(fā)生不易去掉的沉淀。5、沖洗時(shí)不行先傾倒染色，應(yīng)先輕輕搖動(dòng)玻片，緩慢加水使沉渣泛起，然后再用水沖洗。6、水沖洗時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)脫色。[思考題]1、試述瑞氏〔Wright’s〕染色法區(qū)分各種白細(xì)胞的依據(jù)？2、怎樣才能制備一個(gè)形態(tài)清楚的血涂片？3、試驗(yàn)所得結(jié)果與正常值相比照，有何變異？為什么？試驗(yàn)三 溫度對(duì)魚類呼吸代謝的影響試驗(yàn)工程學(xué)時(shí)：4** 試驗(yàn)要求：■必修□選修一、試驗(yàn)?zāi)康募耙螅罕粶y(cè)動(dòng)物的代謝率〔或代謝強(qiáng)度。把握影響魚類呼吸代謝的主要影響因素。二、試驗(yàn)根本原理：耗氧率常常被直接用來(lái)表示機(jī)體的代謝強(qiáng)度率也是間接測(cè)定能量代謝的重要指標(biāo)之一。溫度和pH是影響耗氧率的重要因素。本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定溫度和pH對(duì)魚類耗氧量的影響，從而可以了解溫度和pH對(duì)魚體代謝活動(dòng)式，二是流水式。本試驗(yàn)承受的是靜水密閉測(cè)定法。三、主要儀器設(shè)備及試驗(yàn)耗材：試劑：1、硫酸錳：稱取52gMnSO·5H

O〔37gMnSO·H

90毫升蒸餾水溶解，然后稀釋4 2 4 2100ml。靜置數(shù)日，取清液使用。2、堿性碘化鉀：50gNaOH(70KOH)15g固體KI5035ml純水中。然100ml3、濃H2SO41.84的試劑。4、HCl〔1：1〕5、0.05NNa2S2O3：稱取2.5gNa2S2O3·5H2O,500ml，參加NaOH0.2g使溶液呈堿性，減慢Na2S2O3分解，貯存于棕色瓶中，濃度要標(biāo)定。6、0.51g300ml燒杯中，用少量純水調(diào)成懸濁液。沖入剛煮沸200ml純水，并再煮沸即可。材料：鯽、羅非魚或其它水生動(dòng)物。器材：水產(chǎn)動(dòng)物呼吸試驗(yàn)裝置；酸式滴定管；恒溫水浴鍋；采樣瓶〔或磨口〕30ml假設(shè)干；三角錐瓶100ml假設(shè)干；微量滴定管；乳膠管；滴定架；蝴蝶夾；羅紋水止；移液管；吸耳球等。四、試驗(yàn)內(nèi)容或步驟：1、試驗(yàn)設(shè)置不同的試驗(yàn)溫度，如金魚〔鯽魚，可設(shè)置102℃和3℃三個(gè)試驗(yàn)溫度。高于室溫則需要加熱，并使水溫保持相對(duì)穩(wěn)定。2、試驗(yàn)設(shè)置不同的pH，然后測(cè)定不同pH3〔見圖1或2裝時(shí)，首先將呼吸室布滿水，放入試驗(yàn)動(dòng)物〔試驗(yàn)動(dòng)物放入前需稱量，使測(cè)試動(dòng)物穩(wěn)定半小時(shí)方可開頭試驗(yàn)。4、測(cè)定試驗(yàn)開頭時(shí)水中溶解氧〔初溶氧，及試驗(yàn)完畢時(shí)水中溶解氧〔末溶氧。5、溶氧測(cè)定方法：用30ml細(xì)口瓶〔具塞磨口瓶〕作為水樣瓶，用虹吸法取樣一滿瓶水樣后，馬上加硫酸錳3滴，堿性碘化鉀3滴，蓋上瓶蓋〔瓶中不行有氣泡，上下?lián)u動(dòng)約1分鐘。靜置，待沉淀下降到中部后，加濃硫酸5滴，蓋上蓋再搖勻。取酸化后水樣15ml于錐0.050N0.55～6滴，再連續(xù)滴定到藍(lán)色剛剛消逝。記錄滴定消耗體積V〔毫升。圖圖1靜水密閉法裝置2流水密閉法裝置6、耗氧率計(jì)算：NV溶解氧〔mg/l〕=V樣

×1000(初溶氧－末溶氧)耗氧率〔Og/kg/h〕=2

〔動(dòng)物體重×試驗(yàn)時(shí)間〕

×呼吸室體積五、思考題1、承受靜水式和流水式方法進(jìn)展耗氧率測(cè)定各有何優(yōu)缺點(diǎn)？2、為何用靜水式測(cè)定耗氧率要在一晝夜實(shí)行3-4個(gè)時(shí)間段測(cè)定，并取其平均值，為什么？3、溫度和pH影響魚類呼吸代謝？試驗(yàn)四 亞硝酸鹽對(duì)魚類血紅蛋白的影響試驗(yàn)工程學(xué)時(shí)：3** 試驗(yàn)要求：■必修□選修附件一 魚類血紅蛋白含量的測(cè)定〔必修〕方法一、酸化血紅蛋白稀釋測(cè)定法〔改進(jìn)沙利氏法〕[目的與原理]把握測(cè)定魚類血紅蛋白含量的原理和方法這就可以與標(biāo)準(zhǔn)色相比，從而測(cè)出其含量。通常以每100ml血液中含血紅蛋白克數(shù)來(lái)表示，7-8g。[試驗(yàn)對(duì)象]鯉、鯽或草魚。試驗(yàn)設(shè)置四個(gè)組，即空白比照組和三個(gè)低中高濃度的亞硝酸鹽試驗(yàn)組。[試劑與器材]75球，0.1mol/L鹽酸，蒸餾水，滴管，紗布，抗凝劑〔1%肝素鈉溶液或10%草酸鉀溶液。[試驗(yàn)步驟]1吸血管為一厚壁毛細(xì)玻璃管，其上有10μl、20μl的刻度，尾端連有橡皮頭，供吸血用。比色計(jì)的兩側(cè)，裝有標(biāo)準(zhǔn)濃度的高鐵血紅蛋白溶液，也有用比色玻璃柱〔或片〕來(lái)代替的。比色管可插在比色計(jì)中，與兩側(cè)的標(biāo)準(zhǔn)比色柱進(jìn)展比色。比色管的兩側(cè)通?？逃袃尚锌潭取Ｒ恍袨檠t蛋白確實(shí)定值，以g計(jì)數(shù)〔100毫升血液中所含血紅蛋白的克數(shù)〕來(lái)表示，刻度范圍為2～22%〔即相當(dāng)于正常平均值的百分?jǐn)?shù)來(lái)表示，10%～160%。目前測(cè)定常用確定值來(lái)表示。2、用蒸餾水將比色管洗凈，吸血管則依次用蒸餾水，95%酒精和乙醚洗凈枯燥備用。3、用滴管加0.1mol/L4—6滴到刻度比色管內(nèi)，約加到管下端刻度“2”或“10%”處為止。4、采血：采血方法見前面的試驗(yàn)，用吸血管吸血至20μl刻度〔要準(zhǔn)確。用綿球認(rèn)真將管尖端外面的血拭去。5、將吸血管中血液輕輕地滴到比色管中鹽酸底部，并用上層較清的鹽酸溶液反復(fù)清洗吸血管3次。使吸血管內(nèi)的血液完全洗凈。切勿帶入空氣，以至形成氣泡影響比色。吸血管15分鐘使管內(nèi)的鹽酸和血紅蛋白作用完全，形成棕色的高鐵血紅蛋白。6、把比色管插入標(biāo)準(zhǔn)比色架兩色柱中心的空格中，使無(wú)刻度的兩側(cè)面位于空格的前前方，便于透光和比色。7、用吸管將蒸餾水逐滴地參加比色管內(nèi)，每加一滴都應(yīng)充分混勻并觀看比色管內(nèi)的顏〔讀數(shù)應(yīng)以溶液凹面最低點(diǎn)相全都的刻度為佳。即為每100ml血液中所含血紅蛋白的克數(shù)〔用g/100ml表示。8、試驗(yàn)完畢應(yīng)將吸血管和比色管洗凈，放回盒內(nèi)。[方法評(píng)估]儀器的準(zhǔn)確度有關(guān)。[應(yīng)用意義]血紅蛋白含量與年齡、性別、性周期、養(yǎng)分狀況、活動(dòng)狀況、季節(jié)變化等有關(guān)，養(yǎng)分不良或長(zhǎng)期饑餓可引起血紅蛋白量顯著降低。[留意事項(xiàng)]1、用吸血管吸血過程應(yīng)認(rèn)真、認(rèn)真，準(zhǔn)確把握住吸入的血液量是初學(xué)者的一個(gè)難點(diǎn)，也是試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確與否的一個(gè)關(guān)鍵。2、血紅蛋白吸管很簡(jiǎn)潔被損壞，應(yīng)妥當(dāng)疼惜。管內(nèi)有凝血塊時(shí)不行用金屬絲疏通，可45%→95%酒精→乙醚的挨次清洗，最終吹干吸管。310分鐘以上方可稀釋比色，否則血紅蛋白不能充分轉(zhuǎn)變成高鐵血紅蛋白。最好在30分鐘內(nèi)比色完畢。4、滴加蒸餾水時(shí)，宜少量屢次，逐滴參加后混勻比色，以免稀釋過度，得不到準(zhǔn)確結(jié)果。5、比色應(yīng)在自然光線下進(jìn)展，避開在陰暗處或有色燈光下比色，并將比色管刻度轉(zhuǎn)向兩側(cè)，以免影響比色效果。試驗(yàn)五設(shè)計(jì)性試驗(yàn)水體污染對(duì)魚類血液和腦組織膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)的影響試驗(yàn)工程學(xué)時(shí)：8** 試驗(yàn)要求：■必修□選修〔一〕試驗(yàn)?zāi)康募耙螅喊盐漳憠A酯酶活力測(cè)定的原理和方法，并用羥胺三氯化鐵顯色法測(cè)定魚類血液和腦組織中膽堿酯酶活力。對(duì)魚類的影響?！捕持饕獌x器設(shè)備分光光度計(jì)，恒溫水浴，勻漿器，冰盤，解剖器械。附件 魚腦組織〔或血液〕膽堿酯酶活力的測(cè)定[目的與原理]把握膽堿酯酶活力測(cè)定的原理和方法，并用羥胺三氯化鐵顯色法測(cè)定魚腦膽堿酯酶活力。成乙酰膽堿的膽堿乙?；负痛呋阴Ｄ憠A水解的膽堿酯酶。在肯定溫度、pH條件下，酶的反響速率與酶的量、反響速率，以及作用時(shí)間成近似的線性未經(jīng)膽堿酯酶水解的乙酰膽堿與羥氨作用生成乙酰羥氨，乙酰羥氨酸性條件下與三氯化鐵(FeCl)3試劑：1、磷酸鹽緩沖液〔pH7.2〕23.752克磷酸氫二鈉〔NaHPO·2HO〕1000ml。2 4 218.156g磷酸二氫鉀(KHPO2

)1000ml。4取〔1〕72ml和(2)28ml，混合即成。20.0905g0.001M〔pH4.5〕10ml，0.04mol貯備液，置冰箱內(nèi)保存〔2星期0.04M1份，加90.004mol使用液。31M13.9200ml300C時(shí)，應(yīng)置于冰箱內(nèi)。4、14％NaOH 稱取14gNaOH，加蒸餾水溶解至100ml。5、1010g10N100ml。6、1010.0g，加0.83ml10ml蒸餾水，待全部100ml。7、0.001mol醋酸緩沖液〔pH4.5〕稱取醋酸鈉〔NaAC·3H2O〕13.6g，加蒸餾水溶解后再稀釋至100ml即成0.1mol0.58ml加水至100ml即配成0.1mol57ml、43ml100倍即成。820分鐘配制，將1mol14％NaOH液等體積混合即成。材料：魚腦組織〔或魚血液〕器材：分光光度計(jì)，恒溫水浴，勻漿器，冰盤，解剖器械。[試驗(yàn)步驟]1、取穎或﹣20℃冷凍魚，從魚頭反面剖骨，認(rèn)真取出完整的魚腦，用濾紙輕輕吸去外表體液，剪碎、稱重，在冰浴下加1毫升磷酸緩沖液勻漿，再用磷酸緩沖液稀釋成每ml2mg腦組織液。2、按下表參加試劑試劑 試 管樣品管比照管空白管標(biāo)準(zhǔn)管1.01.0－1.0－－2.01.01.0樣品管比照管空白管標(biāo)準(zhǔn)管1.01.0－1.0－－2.01.01.0－－－3〔202530℃〕204.0ml。1ml魚腦組織液。4、加102.0ml，充分搖勻，然后每管再加102.0毫升，充分搖勻。5、各管試液用濾紙過濾，以除蛋白質(zhì)。62cm525nm0測(cè)量其余各管的光密度。7、計(jì)算4 2 〔比照管光密度－樣品管光密度〕4 2 腦膽堿酯酶活力＝ ×÷×標(biāo)準(zhǔn)管光密度=〔比照管光密度－樣品管光密度〕×6標(biāo)準(zhǔn)管光密度膽堿酯酶活力以每mgμgμg/mg/mi。[方法評(píng)估]活力受基質(zhì)濃度的影響，本法的消耗基質(zhì)，應(yīng)過量參加30～70％，在此范圍外易產(chǎn)生誤差。此方法在國(guó)內(nèi)應(yīng)用較普遍。[應(yīng)用意義]時(shí)把握水體污染對(duì)魚類等水生動(dòng)物的影響。[留意事項(xiàng)]1、測(cè)定膽堿酯酶活力時(shí)溫度、反響時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格掌握。2、由于魚腦膽堿酯酶的活力除受有機(jī)污染物影響外，水體中多種因素也對(duì)該酶有肯定影響，正常魚腦膽堿酯酶活力有30%的波動(dòng)。因此測(cè)定時(shí)肯定要有足夠的樣品數(shù)量，以保證明驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。[思考題]1、試述膽堿酯酶的作用原理？2、取腦的酶組織液時(shí)為什么要用冰??？3、當(dāng)水體受有機(jī)磷污染時(shí)，魚腦膽堿酯酶活力有何變化？為什么？試驗(yàn)六 幾種激素對(duì)魚類血糖調(diào)整的分析試驗(yàn)工程學(xué)時(shí)：5** 試驗(yàn)要求：■必修□選修一、試驗(yàn)?zāi)康募耙螅喊盐锗徏妆桨贩y(cè)定血糖的原理和操作技術(shù)把握魚類血糖調(diào)整的生理機(jī)制。二、試驗(yàn)根本原理：魚類的血糖受激素的調(diào)整而處于動(dòng)態(tài)平衡之中。參與調(diào)整或影響血糖的激素很多，如胰島素、胰高血糖素、腎上腺素以及甲狀腺、垂體、腎上腺皮質(zhì)分泌的激素。測(cè)定血糖的方法很多，最準(zhǔn)確的方法是葡萄糖氧化酶法。但是限于條件，本試驗(yàn)承受鄰〔或藍(lán)綠色〕應(yīng)如下：三、主要儀器設(shè)備及試驗(yàn)耗材：試劑：1、鄰甲苯胺試劑：稱取硫脲〔A.R.〕2.5g，溶于冰醋酸〔A.R.〕750ml中。將此溶液轉(zhuǎn)1L150ml，2.4100ml,1L刻度，置棕色2個(gè)月。2、葡萄糖貯存標(biāo)準(zhǔn)液10mg/m：將少量無(wú)水葡萄糖A.R或C.P〕內(nèi)一夜。準(zhǔn)確稱取此葡萄糖1.000g，以飽和苯甲酸溶液溶解并轉(zhuǎn)移入100ml容量瓶?jī)?nèi)，再100ml刻度。置冰箱中可長(zhǎng)期保存。3、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液1.5mg/m：在100ml容量瓶?jī)?nèi)，參加葡萄糖貯存標(biāo)準(zhǔn)液15.0m100ml刻度，混和。4、0.1g/L0.01g100mL。5、胰島素：用魚用生理鹽水配制成2.10-mol/20IU/m。6、糖皮質(zhì)激