胃癌組織CD44v6、COX-2、MMP-2表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

胃癌組織CD44v6、COX-2、MMP-2表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系【摘要】

目的

研究胃癌組織中CD44v6、COX-2、MMP-2的敘述及其與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。辦法

用免疫組化辦法檢測(cè)胃癌組織中CD44v6、COX-2、MMP-2的敘述情況，并分析其敘述與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果

60例胃癌組織中，CD44v6、COX-2和MMP-2敘述陽(yáng)性率分別為61.7%〔37/60〕，55.0%(33/60)和73.3%(44/60)。胃癌組織中CD44v6、COX-2、MMP-2的敘述與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。結(jié)論

胃癌組織中CD44v6、COX-2、MMP-2的敘述與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示CD44v6、COX-2、MMP-2可作為判斷胃癌預(yù)后的指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】

胃癌；CD44v6；環(huán)氧合酶-2；基質(zhì)金屬蛋白酶；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；免疫組織化學(xué)

ExpressionofCD44v6，COX-2，MMP-2ingastriccarcinomasandtheirrelationshiptolymphnodemetastasis

【Abstract】

Objective

TostudytheexpressionofCD44v6，COX-2andMMP-2ingastriccarcinomasandthererelationshiptolymphnodemetastasis.Methods

TheexpressionofCD44v6，COX-2andMMP-2ingastriccarcinomasweredetectedbyimmunohistochemicalmethod，andtheirrelationshipwithlymphnodemetastasiswasanalyzed.Results

ThepositiveratesfortheexpressionofCD44v6，COX-2andMMP-2in60gastriccancertissueswere61.7%〔37/60〕，55.0%(33/60)and73.3%(44/60)，respectively.TheexpressionofCD44v6，COX-2andMMP-2weresignificantlyrelatedwithlymphnodemetastasis.Conclusion

TheexpressionofCD44v6，COX-2andMMP-2weresignificantlyrelatedwithlymphnodemetastasisingastriccarcinomas，showingthattheycanbeusedasindicatorstopredictprognosisofgastriccarcinomas.

【Keywords】

gastriccarcinoma;CD44v6;COX-2;MMP-2;lymphnodemetastasis;immunohistochemistry

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是影響胃癌患者預(yù)后的重要因素之一。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，CD44v6可參與癌細(xì)胞與基質(zhì)的黏附作用及淋巴細(xì)胞歸巢，從而有利于癌細(xì)胞的擴(kuò)散與轉(zhuǎn)移。環(huán)氧合酶-2〔COX-2〕的過(guò)度敘述可上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-2〔MMP-2〕的敘述，并增加其活性，從而促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。本文采用免疫組化辦法對(duì)60例胃癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)行檢測(cè)，并分析胃癌組織中CD44v6、COX-2和MMP-2敘述與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1

對(duì)象與辦法

1.1

研究對(duì)象

選擇60例手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的胃癌標(biāo)本，男39例，女21例，年齡32～81歲，平均58歲。其中早期胃癌8例，進(jìn)展期胃癌52例。所有患者均行根治性胃癌切除，術(shù)前未接受放療和化療。病理標(biāo)本均按?中國(guó)胃癌診治標(biāo)準(zhǔn)》和日本胃癌處理標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行處理。胃癌組織及淋巴結(jié)標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度5μm，進(jìn)行常規(guī)HE染色和免疫組化染色。

1.2

免疫組化檢測(cè)

采用ABC法免疫組化染色，ABC試劑盒購(gòu)自美國(guó)Vector公司，組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟、酒精水化后，浸入3ml/L的過(guò)氧化氫中30min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化酶的活性，然后將玻片置入0.01mol/L，pH6.0的檸檬酸緩沖液中加熱30min，以充沛暴露抗原，分別滴加鼠抗人CD44v6單抗〔北京中山生物技術(shù)公司〕、兔抗人COX-2多抗〔北京中山生物技術(shù)公司〕和鼠抗人MMP-2單抗〔福州邁新生物技術(shù)公司〕，4℃孵育過(guò)夜，再滴加第二抗體，室溫下反饋20min，過(guò)氧化酶反饋15min。隨后經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽顯色5min，再經(jīng)蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片。每次染色均以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3

辦法

每張切片分別取上、下、左、右和中心共5個(gè)區(qū)域進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，每個(gè)區(qū)計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞，共計(jì)數(shù)1000個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算染色細(xì)胞所占比例。CD44v6定位于胃癌細(xì)胞胞膜，COX-2和MMP-2定位于胃癌細(xì)胞胞漿，以細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例1.4

統(tǒng)計(jì)學(xué)辦法

所有數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差別有顯著性。

[1]

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2

結(jié)果

胃癌組織中CD44v6敘述定位于癌細(xì)胞的胞膜，60例胃癌中其敘述陽(yáng)性率為61.7%〔37/60〕。胃癌中COX-2和MMP-2均定位于癌細(xì)胞胞漿，60例中其敘述陽(yáng)性率分別為55.0%(33/60)和73.3%(44/60)。分析發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中CD44v6、COX-2、MMP-2的敘述與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其敘述陽(yáng)性者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率顯著高于敘述陰性者〔P＜0.05〕，見表1。表1

CD44v6、COX-2、MMP-2敘述與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

例〔%〕

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討論

CD44v6是廣泛分布于細(xì)胞外表的跨膜糖蛋白，作為細(xì)胞基質(zhì)透明質(zhì)酸受體，參與細(xì)胞膜與基質(zhì)的黏附作用及淋巴細(xì)胞歸巢，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的擴(kuò)散與轉(zhuǎn)移。研究說(shuō)明，CD44v6與人類惡性腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［1］。Yamamichi等［2］報(bào)道，胃癌浸潤(rùn)胃壁淋巴管及淋巴結(jié)陽(yáng)性者，CD44v6敘述顯著高于陰性者。COX-2是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在正常組織中不敘述。COX-2與腫瘤的關(guān)系表現(xiàn)在下列幾個(gè)方面：〔1〕COX-2的過(guò)度敘述可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，抑制其凋亡；〔2〕COX-2的過(guò)敘述與腫瘤新生血管形成有關(guān)；〔3〕COX-2的過(guò)敘述可提高腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移的潛能。有研究說(shuō)明，COX-2的敘述與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)［3］。MMP-2是MMP家族的主要成員之一，又稱“明膠酶A〞，其主要依賴降解IV型膠原以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞突破基底膜屏障發(fā)生浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。

本研究用免疫組化辦法檢測(cè)胃癌組織中CD44v6、COX-2、MMP-2的敘述情況，并分析其敘述與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果說(shuō)明，在腫瘤CD44v6、COX-2和MMP-2敘述陽(yáng)性的病人中，其胃周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率分別為81.1%、81.8%和77.3%，而敘述陰性者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率分別為52.2%、55.6%和50.0%，其差別有顯著性〔P＜0.05〕〔見表1〕。提示胃癌細(xì)胞在異常分化中，獲得CD44v6、COX-2和MMP-2敘述的同時(shí)，也獲得高轉(zhuǎn)移的能力。根底研究顯示，CD44v6僅在轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中敘述，而非轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中不敘述，將CD44v6轉(zhuǎn)移到非腫瘤細(xì)胞中，后者就具有轉(zhuǎn)移能力［4］。亦有臨床研究顯示，COX-2抑制劑〔非甾體類抗炎藥〕可顯著降低胃腸道腫瘤的發(fā)生率和死亡率，而MMP-2抑制劑BBS2516imastat也已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。這些均說(shuō)明，CD44v6、COX-2、MMP-2蛋白在胃癌的進(jìn)展中起重要作用，檢測(cè)這些蛋白敘述對(duì)判斷胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后、提供胃癌新的治療靶點(diǎn)有重要意義。

【參考文獻(xiàn)】

1

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2

YamamichiK，UeharaY，KitamuraN，etal.IncreasedexpressionofCD44v6mRNAsignificantlycorrelateswithdistantmetastasisandpoorprognosisingastriccancer.IntJCancer，1998，79:256.

3

KinoshitaT，TakahashiY，SakashitY.Regulationandinductionofepidermalgrowthfactorreceptorbyoverexpressionofcyclooxygenase1and2inhumancoloncarcin