實驗四甘油三酯測定范玉平

實驗四甘油三酯測定范玉平演示文稿當(dāng)前1頁，總共31頁。優(yōu)選實驗四甘油三酯測定范玉平當(dāng)前2頁，總共31頁。測量誤差:是測量結(jié)果減真值之差。誤差和準(zhǔn)確度屬于不同概念，兩者之間不能劃等號。當(dāng)前3頁，總共31頁。不準(zhǔn)確度的數(shù)字表達(dá)是不確定度(標(biāo)準(zhǔn)差和置信區(qū)間的半寬度表示)。

可以理解為測量結(jié)果與約定真值之差的范圍。當(dāng)前4頁，總共31頁。生化分析相關(guān)概念

正確度

大量測量的均值與真值的接近程度。用偏倚表示不正確度。偏倚值(Bias=Xi-x),當(dāng)前5頁，總共31頁。生化分析相關(guān)概念精密度：表示測量結(jié)果中的隨機誤差大小的程度，即指在一定條件下進(jìn)行多次測定時，所得結(jié)果之間的符合程度。常用標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)表示。當(dāng)前6頁，總共31頁。生化分析相關(guān)概念實驗方法分類①決定性方法（definitivemethod）②參考方法（referencemethod）③常規(guī)方法（routinemethod）當(dāng)前7頁，總共31頁。①決定性方法（definitivemethod）是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細(xì)的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法，測定結(jié)果為“確定值”，與“真值”最接近。由于技術(shù)要求太高，費用昂貴，用途：一級標(biāo)準(zhǔn)品定值；參考方法評價(一般不用于常規(guī)工作)

當(dāng)前8頁，總共31頁。②參考方法（referencemethod）是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)充分證實的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差很小，與重復(fù)測定的隨機誤差相比可以忽略不計，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異性、直線性及較寬的分析范圍。此類方法在條件優(yōu)越的實驗室中應(yīng)經(jīng)常使用。但它主要應(yīng)用于鑒定常規(guī)方法，評價其誤差大小，干擾因素，并決定其是否可以被接受。用途：它也用于二級標(biāo)準(zhǔn)品定值，也可用于評價商品試劑盒等。(有條件實驗室可用于常規(guī)工作)

當(dāng)前9頁，總共31頁。③常規(guī)方法（routinemethod）有足夠的精密度、準(zhǔn)確性、特異性和適當(dāng)分析范圍。用途：經(jīng)方法評估和學(xué)術(shù)組織認(rèn)可后推薦為常規(guī)方法。例如：TG定量決定性方法——同位素稀釋/質(zhì)譜（ID/GC/MS）參考方法——酶法

常規(guī)方法——酶法

當(dāng)前10頁，總共31頁。實驗方法選擇原則

①實用性：速度快、標(biāo)本用量少、操作簡便、安全可行。②可信性：精密度、準(zhǔn)確度、敏感性、特異性均達(dá)到要求。當(dāng)前11頁，總共31頁。血清三酰甘油測定實驗四當(dāng)前12頁，總共31頁。實驗?zāi)康?1.掌握酶法測定血清中三酰甘油的原理和意義．2.了解三酰甘油的正常值范圍.當(dāng)前13頁，總共31頁。

一，血清甘油三酯/三酰甘油（TG），是一項重要的臨床血脂常規(guī)測定指標(biāo)，特別是隨著對其致動脈粥樣硬化（AS）作用研究的深入，TG作為冠心病的一項獨立的危險因素日益受到重視。TG的生物化學(xué)當(dāng)前14頁，總共31頁。TG的生物化學(xué)二TG又稱中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，是體內(nèi)能量的主要來源。TG處于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式運輸。當(dāng)前15頁，總共31頁。除TG外，外周血中還存在甘油二酯、甘油一酯（兩者總和不足TG的3%）和游離甘油（FG）。各種脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、極低密度脂蛋白（VLDL）及其殘粒中，TG含量高，被統(tǒng)稱為富含TG脂蛋白（TRL），也稱殘粒樣脂蛋白（RLP）當(dāng)前16頁，總共31頁。TG的代謝外源性途徑內(nèi)源性途徑當(dāng)前17頁，總共31頁。外源性途徑：指食物中的TG在小腸內(nèi)水解成脂肪酸和甘油一酯、二酯后由腸粘膜吸收入細(xì)胞，再合成TG并與其他脂質(zhì)形成CM，通過淋巴系統(tǒng)入血。CM中的TG在脂蛋白脂肪酶（LPL）作用下水解為甘油和游離脂肪酸（FFA），被細(xì)胞利用或貯存。當(dāng)前18頁，總共31頁。內(nèi)源性途徑：CM水解產(chǎn)物—CM殘粒以受體介導(dǎo)的形式被肝臟吸收，其衍生物和一些新組分合成VLDL。當(dāng)前19頁，總共31頁。TG測定的方法學(xué)化學(xué)法色譜法酶法當(dāng)前20頁，總共31頁?；瘜W(xué)法化學(xué)法用有機溶劑氯仿抽提標(biāo)本中的TG，去除抽提液中磷脂等干擾物后，用堿水解（皂化）TG，以過碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用顯色反應(yīng)測甲醛。但因操作步驟繁多、技術(shù)要求高、不能自動化，而不適于常規(guī)工作應(yīng)用。當(dāng)前21頁，總共31頁。化學(xué)法1.VanHandel-Caslson法（二氯甲烷-硅酸-變色酸法）比較準(zhǔn)確2.分溶抽提-乙酰丙酮顯色法比較簡便，條件溫和，但靈敏度低基本步驟：抽提、皂化、氧化、顯色當(dāng)前22頁，總共31頁。色譜法核素稀釋/氣相色譜/質(zhì)譜技術(shù)（ID/GC/MS）主要用作參考系統(tǒng)中決定性方法的建立及參考物質(zhì)的制備與定值，此法費用昂貴，樣品處理復(fù)雜，難以推廣應(yīng)用。當(dāng)前23頁，總共31頁。酶法1.磷酸甘油氧化酶法最為普遍使用酶試劑穩(wěn)定，靈敏度高，線性范圍寬2.乳酸脫氫酶法結(jié)果準(zhǔn)確，但靈敏度低，試劑不太穩(wěn)定3.甘油氧化酶法當(dāng)前24頁，總共31頁。磷酸甘油氧化酶法實驗原理:TG+H2O甘油+FFA甘油-3-磷酸+ADPLPLGK甘油+ATP甘油-3-磷酸+O2GPO磷酸二羥丙酮+H2O2H2O2+4-AAP+DHBSPOD醌亞胺+H2O當(dāng)前25頁，總共31頁。實驗操作(手工分析）:加入物 空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣本管蒸餾水（ul）20 ——

——

標(biāo)準(zhǔn)液（ul）—— 20——樣本（ul）——

——20酶工作液（ml)1.51.51.5混勻，37℃孵育15min，以空白管調(diào)零，520nm波長處測定各管吸光度值(A)。當(dāng)前26頁，總共31頁。酶工作液試劑1（稀釋液）過氧化物酶EDTA4-氨基安替比林緩沖劑試劑2（酶試劑）脂蛋白脂酶ATPEDTA甘油激酶甘油磷酸氧化酶3，5-二氯-2-羥基苯磺酸鹽Mg2+當(dāng)前27頁，總共31頁。計算TG的含量甘油三酯濃度（mmol/L)=A樣/A標(biāo)×標(biāo)準(zhǔn)液濃度

(2.26mmol/L)

單位換算：

甘油三酯mmol/L×88.5=甘油三酯mg/dL當(dāng)前28頁，總共31頁。實驗操作(自動分析）

空白管校準(zhǔn)管質(zhì)控管樣本管試劑1（ul）240240240240蒸餾水（ul）3 ——

——

——標(biāo)準(zhǔn)液（ul）—— 3——

——質(zhì)控液（ul）——

——3——樣本（ul）——

——

——3混勻，37℃孵育5min試劑2（ul）60606060混勻，37℃孵育5min，以空白管調(diào)零，520nm波長處測定各管吸光度