全國(guó)腎綜合征出血熱監(jiān)測(cè)方案(報(bào)送稿)20230722

附件4：全國(guó)腎綜合征出血熱監(jiān)測(cè)方案（試行）一、概述腎綜合征出血熱（以下簡(jiǎn)稱出血熱）是由漢坦病毒引起的一種自然疫源性疾病，是《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病。鼠類為其自然宿主和主要傳染源。根據(jù)我國(guó)出血熱的主要傳染源種類不同，本病可分為姬鼠型和家鼠型兩種主要類型，其中黑線姬鼠為姬鼠型出血熱的主要宿主動(dòng)物和傳染源；褐家鼠為家鼠型出血熱的主要宿主動(dòng)物和傳染源。通過(guò)多年研究，已經(jīng)基本明確了我國(guó)存在姬鼠型、家鼠型和家鼠姬鼠混合型3種疫區(qū)，此外，近年來(lái)在我國(guó)還發(fā)現(xiàn)了以棕背鼠平為主要宿主動(dòng)物的普馬拉型漢坦病毒。世界上已有30多個(gè)國(guó)家發(fā)現(xiàn)腎綜合征出血熱，主要分布在歐亞大陸，其中發(fā)病最多的為中國(guó)、俄羅斯、朝鮮、芬蘭、瑞典、挪威、波蘭等。我國(guó)每年腎綜合征出血熱發(fā)病人數(shù)占世界報(bào)道的漢坦病毒感染病例的90%以上，是受漢坦病毒危害最為嚴(yán)重的國(guó)家。我國(guó)大陸的31個(gè)省、市、自治區(qū)均有病例發(fā)生，臺(tái)灣也有漢坦病毒感染病例報(bào)告。我國(guó)年發(fā)病數(shù)最高曾超過(guò)11萬(wàn)，近十年來(lái)我國(guó)年報(bào)告發(fā)病人數(shù)一直在2～5萬(wàn)左右，新疫區(qū)不斷出現(xiàn)，并時(shí)有暴發(fā)流行，老疫區(qū)的類型也有所變化。近年來(lái)個(gè)別省份出血熱發(fā)病率明顯升高，形勢(shì)不容樂(lè)觀。出血熱病例以農(nóng)村青壯年人群為主，不僅對(duì)人民身體健康和生命安全造成危害，而且對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成嚴(yán)重影響，已經(jīng)成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。因此，在全國(guó)系統(tǒng)地開展出血熱的流行病學(xué)和病原學(xué)監(jiān)測(cè)，了解我國(guó)出血熱的疫情動(dòng)態(tài)和流行規(guī)律，了解宿主動(dòng)物情況和病原分布，分析其流行因素，對(duì)于全國(guó)出血熱的預(yù)防控制工作至關(guān)重要。二、監(jiān)測(cè)目的（一）了解我國(guó)出血熱的疫情動(dòng)態(tài)和流行規(guī)律。（二）了解我國(guó)出血熱的主要宿主動(dòng)物密度、構(gòu)成和感染情況。（三）了解我國(guó)出血熱流行毒株的型別、分布及變異等情況。（四）為分析出血熱流行趨勢(shì)和制定相應(yīng)的防治對(duì)策提供科學(xué)依據(jù)。三、監(jiān)測(cè)病例定義（一）診斷原則根據(jù)患者的流行病學(xué)史、臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。（二）診斷標(biāo)準(zhǔn)1.流行病學(xué)史在出血熱疫區(qū)及流行季節(jié)，或發(fā)病前兩個(gè)月內(nèi)有疫區(qū)旅居史，或發(fā)病前兩個(gè)月內(nèi)有與鼠類或其排泄物（尿、糞）/分泌物（唾液）直接或間接接觸史。2.臨床表現(xiàn)2.1早期癥狀和體征：起病急，發(fā)冷，發(fā)熱（38℃以上）；2.2全身酸痛，乏力，呈衰竭狀；2.3頭痛，眼眶痛，腰痛（三痛）；2.4面、頸、上胸部充血潮紅（三紅），呈酒醉貌；2.5眼瞼浮腫、結(jié)膜充血，水腫，有點(diǎn)狀或片狀出血；2.6上腭粘膜呈網(wǎng)狀充血，點(diǎn)狀出血；2.7腋下皮膚有線狀或簇狀排列的出血點(diǎn)；2.8束臂試驗(yàn)陽(yáng)性。3.病程經(jīng)過(guò)典型病例有發(fā)熱期、低血壓期、少尿期、多尿期和恢復(fù)期五期經(jīng)過(guò)。前三期可有重疊，并存在有大量五期不全的異型或輕型非典型病例。4.實(shí)驗(yàn)室檢查4.1血檢查早期白細(xì)胞數(shù)低或正常，3～4病日后明顯增多，桿狀核細(xì)胞增多，出現(xiàn)較多的異型淋巴細(xì)胞；血小板明顯減少。4.2尿檢查尿蛋白陽(yáng)性，并迅速加重，伴顯微血尿、管型尿。4.3血清特異性IgM抗體陽(yáng)性（見附件1、2）。4.4恢復(fù)期血清特異性IgG抗體比急性期有4倍以上增高（見附件3、4）。4.5從病人血清中分離到漢坦病毒和/或檢出漢坦病毒RNA（見附件5、6）。5.病例分類5.1疑似病例：具備1、2.1、2.2和2.3～2.8之一以上者；或雖無(wú)明確流行病學(xué)史但臨床癥狀典型者。5.2臨床診斷病例：疑似病例加3、4.1、4.2。5.3實(shí)驗(yàn)室確診病例：臨床診斷病例加4.3、4.4、4.5中的任一項(xiàng)。四、監(jiān)測(cè)內(nèi)容（一）全國(guó)常規(guī)監(jiān)測(cè)1.病例的發(fā)現(xiàn)和報(bào)告按照《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》和《突發(fā)公共衛(wèi)生事件與傳染病疫情監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理辦法》，各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、衛(wèi)生檢疫機(jī)構(gòu)執(zhí)行職務(wù)的醫(yī)務(wù)人員發(fā)現(xiàn)疑似、臨床診斷或?qū)嶒?yàn)室確診病例，城鎮(zhèn)應(yīng)于6小時(shí)內(nèi)、農(nóng)村應(yīng)于12小時(shí)內(nèi)通過(guò)傳染病疫情監(jiān)測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。不具備網(wǎng)絡(luò)直報(bào)條件的應(yīng)在診斷后24小時(shí)內(nèi)向相應(yīng)單位送（寄）出傳染病報(bào)告卡，縣級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和具備條件的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院收到傳染病報(bào)告卡后立即進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。2.個(gè)案調(diào)查各省對(duì)所報(bào)告的出血熱臨床診斷病例和實(shí)驗(yàn)室確診病例抽樣進(jìn)行個(gè)案調(diào)查（出血熱個(gè)案調(diào)查表見附表1），年報(bào)告病例數(shù)在1000例以上的省至少抽樣100例進(jìn)行調(diào)查，病例數(shù)少于1000例的省至少抽樣50例進(jìn)行調(diào)查，病例數(shù)少于50例的省，則對(duì)全部病例進(jìn)行調(diào)查。抽樣調(diào)查的病例應(yīng)至少分布在三個(gè)縣。有條件的省可以對(duì)所有病例進(jìn)行個(gè)案調(diào)查?？h級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)于每月10日前將上一月個(gè)案調(diào)查表錄入數(shù)據(jù)庫(kù)，并逐級(jí)上報(bào)。省級(jí)疾病預(yù)防控制中心每月20日前將上一月出血熱個(gè)案調(diào)查表數(shù)據(jù)庫(kù)上報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。3.血清學(xué)核實(shí)診斷各省對(duì)抽查的臨床診斷病例進(jìn)行個(gè)案調(diào)查后采集急性期血清，用MacELISA或膠體金標(biāo)記試紙條方法進(jìn)行血清學(xué)核實(shí)診斷（見附件1、2）。以省為單位，核實(shí)診斷數(shù)不得少于50例，如果病例數(shù)低于50例，則全部進(jìn)行檢測(cè)。血清學(xué)核實(shí)診斷結(jié)果及時(shí)錄入個(gè)案調(diào)查表數(shù)據(jù)庫(kù)。4.病原學(xué)監(jiān)測(cè)（1）核酸檢測(cè)各省采集30～50例發(fā)病7日內(nèi)的急性期（發(fā)熱期）患者血清，由省級(jí)疾病預(yù)防控制中心應(yīng)用RT-PCR分型方法檢測(cè)病毒核酸（見附件6），如果病例數(shù)少于30例，則全部進(jìn)行核酸檢測(cè)。（2）病毒分離有條件的省級(jí)疾病預(yù)防控制中心可采集急性期病人全血分離病毒（見附件5），并將陽(yáng)性病毒分離物送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心做進(jìn)一步鑒定。各省經(jīng)RT－PCR分型方法發(fā)現(xiàn)姬鼠型和家鼠型以外型別的漢坦病毒，將原始標(biāo)本送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行病毒分離和鑒定。（3）序列測(cè)定對(duì)分離到的病毒或PCR產(chǎn)物，各省每年測(cè)定家鼠型和姬鼠型漢坦病毒的M和S片段全序列各1株，并將測(cè)序結(jié)果報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。不具備序列測(cè)定條件的省份，可將標(biāo)本送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行序列測(cè)定。（4）結(jié)果的報(bào)告和反饋省級(jí)疾病預(yù)防控制中心每年7月15日和次年1月15日將病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果表（包括核酸檢測(cè)、病毒分離、序列測(cè)定）報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心（見附表4）。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心收到各省所送標(biāo)本后，兩個(gè)月內(nèi)將檢測(cè)結(jié)果反饋給各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心。5.暴發(fā)疫情調(diào)查與監(jiān)測(cè)（1）暴發(fā)疫情的報(bào)告按照《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》和《突發(fā)公共衛(wèi)生事件與傳染病疫情監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理辦法》的規(guī)定，各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、衛(wèi)生檢疫機(jī)構(gòu)執(zhí)行職務(wù)的醫(yī)務(wù)人員發(fā)現(xiàn)疑似、臨床診斷或?qū)嶒?yàn)室確診病例，城鎮(zhèn)應(yīng)于6小時(shí)內(nèi)、農(nóng)村應(yīng)于12小時(shí)內(nèi)通過(guò)傳染病疫情監(jiān)測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。如果暴發(fā)疫情達(dá)到《全國(guó)突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急預(yù)案》規(guī)定的級(jí)別，則按相應(yīng)要求同時(shí)通過(guò)《突發(fā)公共衛(wèi)生事件報(bào)告管理信息系統(tǒng)》報(bào)告?？h級(jí)疾病預(yù)防控制中心接到暴發(fā)疫情后，應(yīng)立即報(bào)告縣衛(wèi)生行政部門和逐級(jí)報(bào)告上級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)。（2）暴發(fā)疫情的調(diào)查暴發(fā)疫情的調(diào)查由縣級(jí)衛(wèi)生行政部門組織，縣級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)具體實(shí)施?？h級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)接到疫情報(bào)告后，應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)開展調(diào)查。1）核實(shí)診斷①病例核實(shí)：對(duì)報(bào)告的病例逐個(gè)進(jìn)行詳細(xì)的個(gè)案調(diào)查，并進(jìn)行血清學(xué)或病原學(xué)檢測(cè)。②疫情核實(shí)：了解暴發(fā)點(diǎn)近期有無(wú)類似病例發(fā)生，并對(duì)發(fā)現(xiàn)的可疑病例進(jìn)行個(gè)案調(diào)查，了解三間分布情況。對(duì)所有病人進(jìn)行血清學(xué)或病原學(xué)檢測(cè)。2）基本情況調(diào)查①詳細(xì)調(diào)查暴發(fā)點(diǎn)的人口資料、患者及居民居住環(huán)境、自然地理景觀、氣象資料等流行因素。②了解暴發(fā)點(diǎn)所在地的既往疫情情況和流行強(qiáng)度。③了解暴發(fā)點(diǎn)所在地出血熱宿主動(dòng)物的種類、分布、密度及感染情況。3）宿主動(dòng)物調(diào)查在暴發(fā)點(diǎn)的居民區(qū)（患者居住地及周圍）和野外進(jìn)行宿主動(dòng)物種類、密度調(diào)查，捕獲數(shù)量各不少于50只，對(duì)捕獲的宿主動(dòng)物進(jìn)行感染狀況調(diào)查。4）人群感染狀況調(diào)查采集暴發(fā)點(diǎn)內(nèi)高危人群血標(biāo)本50～100份，用免疫熒光法或ELISA法進(jìn)行抗體水平的檢測(cè)（見附件3、4），了解人群感染狀況。（3）控制措施在暴發(fā)疫情核實(shí)后，立即對(duì)暴發(fā)點(diǎn)采取滅鼠防鼠、預(yù)防接種等綜合性防制措施。1）滅鼠：按照衛(wèi)生部出血熱防治工作的有關(guān)要求進(jìn)行滅鼠。滅鼠3周后的鼠密度室內(nèi)應(yīng)達(dá)到1％以下、室外3％以下。2）應(yīng)急預(yù)防接種：對(duì)暴發(fā)點(diǎn)內(nèi)的高危人群實(shí)施應(yīng)急預(yù)防接種，接種率應(yīng)達(dá)80％以上，防止疫情蔓延。3）滅螨：對(duì)床鋪草墊、地面、室外草叢、柴草堆等處采用藥物滅螨。4）環(huán)境治理：大力開展愛國(guó)衛(wèi)生運(yùn)動(dòng)，整治和改善環(huán)境衛(wèi)生。5）健康教育：利用各種媒體及途徑，在發(fā)生暴發(fā)的地區(qū)，開展出血熱防病知識(shí)的宣傳，增強(qiáng)群眾防病和參與防治的意識(shí)。（4）總結(jié)暴發(fā)疫情處理后，及時(shí)收集、整理、統(tǒng)計(jì)、分析調(diào)查資料，在疫情處理結(jié)束后7日內(nèi)，寫出詳細(xì)的暴發(fā)調(diào)查報(bào)告，逐級(jí)上報(bào)至中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。同時(shí)，將個(gè)案調(diào)查表錄入數(shù)據(jù)庫(kù)，一并上報(bào)。（二）監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)以縣為單位，建立國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，開展人間疫情和宿主動(dòng)物監(jiān)測(cè)。1.國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)選擇原則（1）近三年出血熱發(fā)病水平居全國(guó)前列的??；（2）多數(shù)監(jiān)測(cè)點(diǎn)近三年的出血熱發(fā)病率達(dá)到高發(fā)或中發(fā)水平，同時(shí)兼顧低發(fā)地區(qū)；（3）監(jiān)測(cè)點(diǎn)能夠代表我國(guó)疫區(qū)和疫源地主要類型；（4）監(jiān)測(cè)點(diǎn)具有一定的出血熱工作基礎(chǔ)，能夠承擔(dān)并完成監(jiān)測(cè)任務(wù)；（5）各省可結(jié)合原有國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)進(jìn)行選擇；（6）國(guó)家根據(jù)疫情變化情況，將適時(shí)調(diào)整監(jiān)測(cè)點(diǎn)。根據(jù)國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)選擇原則，將國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)設(shè)置如下（共22個(gè)省39個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)）：遼寧（5）：沈陽(yáng)市（于洪區(qū)），本溪市（本溪縣），丹東市（風(fēng)城市），錦州市（凌海市），鞍山市（海城市）；黑龍江（4）：黑河市（嫩江縣），齊齊哈爾市（訥河市），雞西市（虎林市），牡丹江市（寧安市）；山東（4）：濟(jì)南市（章丘縣），青島市（膠南縣），濰坊市（青州市），臨沂市（莒南縣）；河北（4）：唐山市（灤縣），石家莊市（辛集市），保定市（定州市），滄州市（獻(xiàn)縣）；吉林（4）：延邊州（琿春市），白山市（撫松縣），長(zhǎng)春市（雙陽(yáng)區(qū)），吉林市（磐石縣）；陜西（2）：西安市（戶縣），寶雞市（眉縣）；浙江（1）：臺(tái)州市（天臺(tái)縣）；河南（1）：駐馬店市（確山縣）；湖南（1）：長(zhǎng)沙市（寧鄉(xiāng)縣）；內(nèi)蒙古（1）：呼倫貝爾盟（莫力達(dá)瓦旗）；四川（1）：涼山彝族自治州（鹽源縣）；江蘇（1）：連云港市（贛榆縣）；江西（1）：宜春市（高安）；湖北（1）：宜昌市（當(dāng)陽(yáng)市）；安徽（1）：阜陽(yáng)市（穎州區(qū)）；天津（1）：天津市（南開區(qū)）；貴州（1）：遵義市（遵義縣）；山西（1）：太原市（尖草坪區(qū)）；北京（1）：北京市；甘肅（1）：平?jīng)鍪校ㄈA亭縣）；云南（1）：紅河州（瀘西縣）；寧夏（1）：固原市（涇源縣）。2.監(jiān)測(cè)內(nèi)容（1）常規(guī)疫情和暴發(fā)疫情監(jiān)測(cè)同全國(guó)常規(guī)監(jiān)測(cè)，同時(shí)對(duì)轄區(qū)內(nèi)醫(yī)療機(jī)構(gòu)報(bào)告的出血熱疑似病例、臨床診斷病例和實(shí)驗(yàn)室確診病例全部進(jìn)行個(gè)案調(diào)查?？h級(jí)（或市級(jí)）疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)每月10日前將上月個(gè)案調(diào)查表錄入數(shù)據(jù)庫(kù)，并逐級(jí)匯總上報(bào)。各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心每月20日前上報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。（2）血清學(xué)核實(shí)診斷對(duì)監(jiān)測(cè)點(diǎn)報(bào)告的出血熱臨床診斷病例，按照不低于80％的比例采集急性期血清標(biāo)本，少于50例的全部采集，由各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心或有條件的縣級(jí)（市級(jí)）疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)應(yīng)用MacELISA或膠體金標(biāo)記試紙條方法進(jìn)行血清學(xué)核實(shí)診斷（見附件1、2）檢測(cè)，進(jìn)行核實(shí)診斷。并將血清學(xué)核實(shí)診斷結(jié)果立即錄入個(gè)案調(diào)查表數(shù)據(jù)庫(kù)。（3）病例的病原學(xué)監(jiān)測(cè)采集急性期患者的全血進(jìn)行PCR、病毒分離、核苷酸序列測(cè)定和交叉中和實(shí)驗(yàn)，分析流行型別（見附件5、6）。1）核酸檢測(cè)MacELISA法或膠體金標(biāo)記試紙條方法核實(shí)診斷陽(yáng)性的病例，由省級(jí)疾病預(yù)防控制中心采用RT-PCR進(jìn)行核酸檢測(cè)。每個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的抽樣數(shù)不少于20例，如果監(jiān)測(cè)點(diǎn)病例數(shù)低于20例，全部檢測(cè)。2）病毒分離各監(jiān)測(cè)點(diǎn)每年采集一定數(shù)量的急性期病例全血送省級(jí)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行病毒分離。各省每年從血清中分離漢坦病毒2株，混合型疫區(qū)分離姬鼠型和家鼠型各1株。陽(yáng)性病毒分離物送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)一步鑒定。3）序列測(cè)定各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心對(duì)分離到的病毒和陽(yáng)性PCR產(chǎn)物進(jìn)行M和S片段序列測(cè)定，并將測(cè)序結(jié)果報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。不具備序列測(cè)定條件的省份，可將標(biāo)本送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行序列測(cè)定。4）血清分型各監(jiān)測(cè)點(diǎn)每年采集20份實(shí)驗(yàn)室確診病例恢復(fù)期血清送省級(jí)疾病預(yù)防控制中心，進(jìn)行交叉中和實(shí)驗(yàn)（附件7），進(jìn)行血清學(xué)分型。不具備條件的省份，可將標(biāo)本送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行血清分型。5）結(jié)果的報(bào)告和反饋各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心每年7月15日和次年1月15日將病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果（包括核酸檢測(cè)、病毒分離、序列測(cè)定）報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心（見附表4）。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心收到各省所送標(biāo)本后，兩個(gè)月內(nèi)將檢測(cè)結(jié)果反饋給各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心。（4）宿主動(dòng)物監(jiān)測(cè)以縣（區(qū)）為單位，逐步查清居民區(qū)及野外宿主動(dòng)物種類、分布、密度、感染率和所帶病毒的型別及變異情況（見附表2、3、4）。未設(shè)國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的地區(qū)可參照以下內(nèi)容進(jìn)行宿主動(dòng)物監(jiān)測(cè)。1）鼠密度的監(jiān)測(cè)①調(diào)查點(diǎn)的選擇根據(jù)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的疫情分布情況和地理景觀選擇調(diào)查地點(diǎn)。農(nóng)村居民區(qū)應(yīng)選擇有代表性的、既往有出血熱病人發(fā)生的自然村；在調(diào)查自然村外500米半徑范圍內(nèi)，進(jìn)行野外鼠密度調(diào)查，應(yīng)選在河流、水渠、道路兩旁、田埂、墳地和場(chǎng)院等可能有鼠類棲息活動(dòng)的地方。②監(jiān)測(cè)時(shí)間每年3～4月和9～10月各一次，分別在農(nóng)村居民區(qū)和野外同時(shí)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。各省可根據(jù)具體情況適當(dāng)調(diào)整監(jiān)測(cè)時(shí)間。③捕鼠方法按出血熱鼠密度監(jiān)測(cè)有關(guān)規(guī)定方法進(jìn)行。④分類鑒定記錄捕獲的宿主動(dòng)物名稱應(yīng)寫學(xué)名，其名稱和鑒定方法、標(biāo)準(zhǔn)參考《醫(yī)學(xué)動(dòng)物分類鑒定》、《腎綜合征出血熱監(jiān)測(cè)及疫苗應(yīng)用研究》附錄部分（陳化新，羅成旺主編，2001年香港醫(yī)藥出版社）。2）鼠感染率調(diào)查各監(jiān)測(cè)點(diǎn)，每次分別在居民區(qū)和野外各捕鼠50只以上，進(jìn)行血清學(xué)和病原學(xué)檢測(cè)，計(jì)算感染率。①鼠標(biāo)本的采集取分類鑒定的鼠，無(wú)菌解剖，取鼠肺，放入編號(hào)的冷凍塑料管內(nèi)，封口，放入液氮罐內(nèi)保存。在取鼠肺的同時(shí)，用濾紙條（5cm×1cm）沾取鼠血，陰干后用塑料袋包好放入液氮罐。罐中保存。上述標(biāo)本帶到實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)及時(shí)放到超低溫或低溫冰箱內(nèi)保存，或盡快分裝檢測(cè)。②鼠肺抗原和血清抗體檢測(cè)各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)鼠肺出血熱病毒抗原，或用雙抗原夾心ELISA檢測(cè)鼠出血熱抗體（見附件8、9）。③結(jié)果報(bào)告各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心在完成捕鼠任務(wù)后，一個(gè)月內(nèi)將鼠密度和鼠感染情況監(jiān)測(cè)結(jié)果（附表2、3）報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。3）宿主動(dòng)物的病原學(xué)監(jiān)測(cè)①核酸檢測(cè)各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心對(duì)免疫熒光陽(yáng)性鼠肺標(biāo)本，采用RT-PCR方法（見附件6）進(jìn)行核酸檢測(cè)。②病毒分離各監(jiān)測(cè)點(diǎn)對(duì)采集的陽(yáng)性鼠肺標(biāo)本，送省級(jí)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行病毒分離（見附件5）。各省每年從鼠肺中分離漢坦病毒2株，混合型疫區(qū)分離姬鼠型和家鼠型各1株，陽(yáng)性病毒分離物送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)一步鑒定。③序列測(cè)定各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心對(duì)分離到的病毒和陽(yáng)性PCR產(chǎn)物進(jìn)行M和S片段序列測(cè)定，并將測(cè)序結(jié)果報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。不具備序列測(cè)定條件的省份，可將標(biāo)本送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行序列測(cè)定。④結(jié)果的報(bào)告和反饋各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心每年7月15日和次年1月15日將病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果（包括核酸檢測(cè)、病毒分離、序列測(cè)定）報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心（見附表4）。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心收到各省所送標(biāo)本后，兩個(gè)月內(nèi)將檢測(cè)結(jié)果（不包括病毒分離）反饋給各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心。五、監(jiān)測(cè)系統(tǒng)組成和職責(zé)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)由衛(wèi)生部、各級(jí)衛(wèi)生行政部門、中國(guó)疾病預(yù)防控制中心及各級(jí)疾病預(yù)防控制中心組成。其職責(zé)分別為：（一）衛(wèi)生部和各級(jí)衛(wèi)生行政部門衛(wèi)生部領(lǐng)導(dǎo)全國(guó)出血熱監(jiān)測(cè)工作，各級(jí)衛(wèi)生行政部門負(fù)責(zé)組織開展本轄區(qū)內(nèi)出血熱監(jiān)測(cè)工作，并提供所需監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)，保證監(jiān)測(cè)工作的順利開展。（二）中國(guó)疾病預(yù)防控制中心1.組織全國(guó)監(jiān)測(cè)方案的起草、論證、修改和完善，為全國(guó)出血熱監(jiān)測(cè)提供技術(shù)指導(dǎo)。2.組織考察、確定全國(guó)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的布局，與國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在省級(jí)疾病預(yù)防控制中心簽訂協(xié)議，明確具體任務(wù)和目標(biāo)，為國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)提供一定監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)補(bǔ)助。3.組織對(duì)全國(guó)省級(jí)疾病預(yù)防控制中心和國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)專業(yè)技術(shù)人員的培訓(xùn)。4.負(fù)責(zé)全國(guó)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的收集、整理，定期對(duì)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的全部數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、反饋。5.為各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心和國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)提供相應(yīng)的血清學(xué)診斷、檢測(cè)試劑。6.負(fù)責(zé)完成本方案中規(guī)定的實(shí)驗(yàn)室工作。7.組織專家定期對(duì)全國(guó)出血熱監(jiān)測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢查、考核。8.每年對(duì)全國(guó)出血熱監(jiān)測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行年度工作總結(jié)，組織召開全國(guó)年度工作總結(jié)研討會(huì)。（三）省級(jí)疾病預(yù)防控制中心1.根據(jù)國(guó)家監(jiān)測(cè)方案，結(jié)合本省實(shí)際情況制定本省監(jiān)測(cè)實(shí)施方案；協(xié)組國(guó)家疾病預(yù)防控制中心確定本省國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，建立和完善本省的監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)；2.負(fù)責(zé)本省監(jiān)測(cè)專業(yè)技術(shù)人員培訓(xùn)工作；3.承擔(dān)本省國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的管理、業(yè)務(wù)指導(dǎo)，參與國(guó)家CDC對(duì)國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)工作檢查、考核。4.與本省國(guó)家級(jí)及省級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)簽訂協(xié)議，明確具體任務(wù)和目標(biāo)，按其完成情況確定監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)補(bǔ)助數(shù)額。5.完成國(guó)家監(jiān)測(cè)方案中要求的病例抽查、血清學(xué)和病原學(xué)等監(jiān)測(cè)任務(wù)。6.對(duì)全省監(jiān)測(cè)資料進(jìn)行收集、匯總和分析，按方案要求的時(shí)限上報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，并進(jìn)行反饋。7.對(duì)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)工作進(jìn)行質(zhì)量控制。（四）市級(jí)疾病預(yù)防控制中心根據(jù)國(guó)家監(jiān)測(cè)方案的要求，協(xié)助省中心完成本地區(qū)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)任務(wù)和管理、業(yè)務(wù)指導(dǎo)；參與本地區(qū)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)工作。（五）縣級(jí)疾病預(yù)防控制中心1.按監(jiān)測(cè)方案要求，及時(shí)、準(zhǔn)確的對(duì)臨床診斷病例進(jìn)行個(gè)案調(diào)查，數(shù)據(jù)錄入，按規(guī)定的時(shí)限上報(bào)?。ㄊ校┘膊☆A(yù)防控制中心。負(fù)責(zé)病例標(biāo)本的采集、檢測(cè)、上送。2.承擔(dān)宿主動(dòng)物種群、密度的監(jiān)測(cè)工作和宿主動(dòng)物標(biāo)本的采集，并及時(shí)將采集的標(biāo)本送省級(jí)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行檢測(cè)。宿主動(dòng)物監(jiān)測(cè)完成后，在15內(nèi)上報(bào)省疾病預(yù)防控制中心。3.負(fù)責(zé)暴發(fā)疫情的調(diào)查處理。（六）監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在地醫(yī)療機(jī)構(gòu)在當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門的統(tǒng)一領(lǐng)導(dǎo)下，配合疾病預(yù)防控制部門的各項(xiàng)監(jiān)測(cè)工作，負(fù)責(zé)完成門（就）診和住院病例的標(biāo)本采集，協(xié)助疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)開展病例個(gè)案調(diào)查。六、數(shù)據(jù)收集、分析、反饋（一）數(shù)據(jù)收集內(nèi)容1.疫情報(bào)告卡2.個(gè)案調(diào)查表（見附表1）3.暴發(fā)疫情調(diào)查處理報(bào)告4.宿主動(dòng)物調(diào)查統(tǒng)計(jì)報(bào)表、宿主動(dòng)物感染情況報(bào)表（見附表2、3）5.實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)記錄（二）統(tǒng)計(jì)分析指標(biāo)1.發(fā)病情況及趨勢(shì)：發(fā)病數(shù)（例）、死亡數(shù)（例）、發(fā)病率（/10萬(wàn)）、病死率（％）和死亡率（/10萬(wàn)）。2.病例分布情況：病人年齡、性別、職業(yè)、時(shí)間、地理分布等。3.宿主動(dòng)物種類、分布、密度、帶毒情況。4.病毒分離及基因變異情況。5.疫源地分型：通過(guò)RT-PCR分型、對(duì)病毒基因的核苷酸序列測(cè)定以及血清學(xué)分型結(jié)果，進(jìn)行疫源地分型和疫區(qū)類型演變過(guò)程分析。（三）定期報(bào)告、反饋資料1.按照《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》，出血熱為乙類法定管理傳染病，發(fā)現(xiàn)出血熱或疑似出血熱疫情后，必須按照規(guī)定及時(shí)進(jìn)行網(wǎng)上直報(bào)。疫情證實(shí)后，應(yīng)通報(bào)相鄰有關(guān)市縣（區(qū)）鄉(xiāng)鎮(zhèn)。2.縣級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)每月10日前將前一月出血熱個(gè)案調(diào)查表錄入數(shù)據(jù)庫(kù)，并逐級(jí)匯總上報(bào)。各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心每月20日前上報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。3.血清學(xué)試驗(yàn)應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行，并將血清診斷結(jié)果立即錄入個(gè)案調(diào)查表數(shù)據(jù)庫(kù)。4.省級(jí)疾病預(yù)防控制中心每年7月15日和次年1月15日將病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果（包括核酸檢測(cè)、病毒分離、序列測(cè)定）報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心收到各省所送標(biāo)本后，兩個(gè)月內(nèi)將檢測(cè)結(jié)果反饋給省級(jí)疾病預(yù)防控制中心。5.省級(jí)疾病預(yù)防控制中心在完成捕鼠任務(wù)后一個(gè)月內(nèi)，將鼠密度和鼠感染情況監(jiān)測(cè)結(jié)果（附表2、3）報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。6.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心每個(gè)月做監(jiān)測(cè)簡(jiǎn)報(bào)反饋給各省。七、監(jiān)測(cè)系統(tǒng)質(zhì)量控制指標(biāo)（一）人員培訓(xùn)每年對(duì)國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在縣有關(guān)業(yè)務(wù)人員進(jìn)行1次培訓(xùn)，由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)指導(dǎo)、各國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在省疾病預(yù)防控制中心具體實(shí)施。（二）血清學(xué)試驗(yàn)的核實(shí)工作省級(jí)疾病預(yù)防控制中心應(yīng)對(duì)監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在縣進(jìn)行的血清學(xué)試驗(yàn)復(fù)核，至少抽樣30％進(jìn)行檢查，若病例數(shù)低于30，則需要全部核實(shí)，符合率不低于90％。（三）病原學(xué)試驗(yàn)的核實(shí)工作中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所對(duì)省級(jí)疾病預(yù)防控制中心所分離的漢坦病毒進(jìn)行鑒定。至少抽樣30％對(duì)分型工作進(jìn)行核實(shí)，符合率不低于90％。（四）技術(shù)資料檔案管理，原始記錄，總結(jié)等。八、附件附表1出血熱個(gè)案調(diào)查表附表2宿主動(dòng)物調(diào)查統(tǒng)計(jì)報(bào)表附表3宿主動(dòng)物感染情況報(bào)表附表4病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果一覽表附件1IgM捕捉ELISA法（MacELISA）檢測(cè)出血熱IgM抗體附件2IgM捕獲法膠體金標(biāo)記試紙條快速檢測(cè)IgM抗體附件3免疫熒光法（IFA）檢測(cè)人血清IgG抗體附件4酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清IgG抗體附件5VeroE6或Vero細(xì)胞分離漢坦病毒附件6RT-PCR檢測(cè)漢坦病毒基因及分型附件7交叉保護(hù)中和實(shí)驗(yàn)附件8免疫熒光法檢測(cè)鼠肺抗原附件9酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）雙抗原夾心法檢測(cè)血清總抗體附表1出血熱個(gè)案調(diào)查表縣（市）名稱：國(guó)標(biāo)碼：□□□□□□病例編號(hào)：□□□□□一、基本情況1.患者姓名：_________（如患者年齡<14歲，則家長(zhǎng)姓名：_____________）2.性別：1男，2女□3.年齡：_____歲□□□4.民族：1漢族，2壯族，3維吾爾族，4其他少數(shù)民族□5.職業(yè)：□（1）幼托兒童（2）散居兒童（3）學(xué)生（4）教師（5）保育保姆（6）飲食從業(yè)人員（7）商業(yè)服務(wù)（8）醫(yī)務(wù)人員（9）工人（10）民工（11）農(nóng)民（12）牧民（13）漁（船）民（14）干部職員（15）離退人員（16）家務(wù)待業(yè)（17）其他6．所在單位：___________________________________；聯(lián)系：_________________7．家庭住址：____?。ㄗ灾螀^(qū)/直轄市）____縣（市區(qū)）_____鄉(xiāng)（鎮(zhèn)/居委會(huì)）____村（街道）二、發(fā)病情況1.發(fā)病日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□2.就診日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□3.發(fā)病地點(diǎn)：_________________________________________4.住院醫(yī)院：____________________5.住院號(hào)：_____________________□□□□□□6.住院日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□7.出院日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□8.入院診斷：□1出血熱疑似病例，2臨床診斷病例，3實(shí)驗(yàn)室確診病例，4其他9、臨床診斷日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□10.出院診斷：□1出血熱疑似病例，2臨床診斷病例，3實(shí)驗(yàn)室確診病例，4其他11．臨床分型：1輕型，2中型，3重型，4危重型□12.轉(zhuǎn)歸：1痊愈，2好轉(zhuǎn)，3死亡（日期：_______年____月____日）□三、癥狀和體征及一般實(shí)驗(yàn)室檢查1.起病急：1是，0否□2.乏力：1有，0無(wú)□3.發(fā)熱：1有，0無(wú)□4.頭痛：1有，0無(wú)□5.腰痛：1有，0無(wú)□6.眼眶痛：1有，0無(wú)□7.臉紅：1有，0無(wú)□8.頸紅：1有，0無(wú)□9.胸紅：1有，0無(wú)□10.關(guān)節(jié)痛：1有，2無(wú)□11.全身痛：1有，2無(wú)□12.腹痛：1有，2無(wú)□13.腹瀉：1有，2無(wú)□14.便秘：1有，2無(wú)□15.惡心：1有，2無(wú)□16.嘔吐：1有，2無(wú)□17.結(jié)膜充血：:1有，2無(wú)□18.眼瞼浮腫：1有，2無(wú)□19.黃疸：1有，2無(wú)□20.腋下/上臂/胸部或其它部位有無(wú)皮膚出血點(diǎn)：1有，2無(wú)□如有，則出血點(diǎn)為：1散在，2條/線狀，3簇狀，4其它_________□21.口腔、鼻腔等處粘膜有無(wú)出血點(diǎn)：1有，2無(wú)□22.少尿或無(wú)尿：1有，2無(wú)□23.低血壓：1有，2無(wú)□24.休克：1有，2無(wú)□25.白細(xì)胞計(jì)數(shù)：1正常，2增多，3減少，4未做此項(xiàng)檢查□26.血小板減少：1有，2無(wú)，3未做此項(xiàng)檢查□27.尿蛋白：1陽(yáng)性，2陰性，3未做此項(xiàng)檢查，4不詳□28.有無(wú)尿膜狀物/管型尿/血尿：1有，2無(wú)□29.束臂試驗(yàn)：1陽(yáng)性，2陰性，3未做此項(xiàng)檢查，4不詳□30.出血時(shí)間：1正常，2延長(zhǎng)，3縮短，4未做此項(xiàng)檢查，5不詳□31.凝血時(shí)間：1正常，2延長(zhǎng)，3縮短，4未做此項(xiàng)檢查，5不詳□四、血清學(xué)及病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果（未做者請(qǐng)注明為“未做”）項(xiàng)目標(biāo)本采集時(shí)間檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果出血熱抗體IgGIgM漢坦病毒分離五、既往史及家庭情況1.既往是否患過(guò)此?。?是，0否，9不詳□如是，診斷單位：______，時(shí)間：______年____月____日□□□□/□□/□□2．食物、糧食有無(wú)防鼠設(shè)備：1有，0無(wú)，9不詳□3.流行性出血熱疫苗預(yù)防接種史：1有，0無(wú)，9不詳□如有，最近一次接種時(shí)間：______年____月____日□□□□/□□/□□4.有無(wú)家庭其他成員出現(xiàn)過(guò)類似癥狀：1有，0無(wú)，9不詳□如有，最近一例發(fā)病時(shí)間（患者除外）：____年____月____日□□□□/□□/□□5.房?jī)?nèi)有無(wú)鼠：1有，0無(wú)□6.院內(nèi)有無(wú)雜物、草堆等：1有，0無(wú)□六、接觸史及有關(guān)因素調(diào)查1.發(fā)病前2個(gè)月內(nèi)是否有外出（或旅游）史：1是，2否□如是，到何地：___________；外出時(shí)間：天□□返回時(shí)間：____年____月____日□□□□/□□/□□2.發(fā)病前1月內(nèi)是否接觸鼠類：1是，2否，9不詳□如為1，接觸方式：1挖鼠洞，2拿鼠，3鼠咬，4鼠尿，5鼠糞，□6鼠血污染手7手被鼠夾打傷8其他3.發(fā)病前1月內(nèi)是否有昆蟲叮咬史：1是，2否，9不詳□4.發(fā)病前1月內(nèi)是否吃過(guò)被鼠排泄物污染的食物：1是，2否，9不詳□5.發(fā)病前1月內(nèi)是否在野外喝過(guò)溝（塘）水：1是，2否，9不詳□6.發(fā)病前1月內(nèi)是否在鼠洞附近坐臥：1是，2否，9不詳□7.發(fā)病前1月內(nèi)是否在場(chǎng)院禾草上坐臥：1是，2否，9不詳□8.發(fā)病前1月內(nèi)是否在野外住宿：1是，2否，9不詳□如是，具體地點(diǎn)：；其附近有無(wú)鼠、鼠洞或鼠排泄物：1是，2否，9不詳□鋪的類型：1床，2土炕，3地鋪，4其他□9．工作場(chǎng)所有無(wú)鼠或鼠排泄物：1有，2無(wú)，9不詳□10．發(fā)病前1月內(nèi)是否接觸過(guò)出血熱病人血/尿：1有，2無(wú)，9不詳□（病例編號(hào)填寫說(shuō)明：年號(hào)（兩位數(shù)）、流水號(hào)（后邊三位））調(diào)查日期：______年___月___日調(diào)查地點(diǎn)：調(diào)查者：附表2腎綜合征出血熱監(jiān)測(cè)宿主動(dòng)物調(diào)查統(tǒng)計(jì)報(bào)表監(jiān)測(cè)點(diǎn)名稱：監(jiān)測(cè)點(diǎn)編號(hào)：□□□□□□捕鼠時(shí)間：____年____月____日□□□□/□□/□□捕鼠地點(diǎn)：1居民區(qū)，2野外（A田野，B山林，C草原，D河堤，E其他）□收夾數(shù)：夾次□□□捕鼠總數(shù)：只□□□總鼠密度：％□□主要鼠種及構(gòu)成情況鼠種鼠數(shù)構(gòu)成（％）鼠種鼠數(shù)構(gòu)成（％）黑線姬鼠褐家鼠大林姬鼠小家鼠黑線倉(cāng)鼠大倉(cāng)鼠黃毛鼠黃胸鼠填表時(shí)間：______年___月___日單位（蓋章）：___________________________________；填表人：____________________附表3腎綜合征出血熱監(jiān)測(cè)宿主動(dòng)物感染情況報(bào)表監(jiān)測(cè)點(diǎn)名稱：監(jiān)測(cè)點(diǎn)編號(hào)：□□□□□□捕鼠時(shí)間：____年____月____日□□□□/□□/□□捕鼠地點(diǎn)：1居民區(qū)，2野外（A田野，B山林，C草原，D河堤，E其他□捕鼠總數(shù)：只□□□感染率：％□□主要鼠種及感染情況鼠種鼠數(shù)抗原陽(yáng)性數(shù)抗原陽(yáng)性率（％）抗體陽(yáng)性數(shù)抗體陽(yáng)性率（％）黑線姬鼠褐家鼠大林姬鼠小家鼠大倉(cāng)鼠黑線倉(cāng)鼠黃毛鼠黃胸鼠填表時(shí)間：______年___月___日單位（蓋章）：___________________________________；填表人：___________________附表4腎綜合征出血熱監(jiān)測(cè)病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果一覽表監(jiān)測(cè)點(diǎn)名稱：國(guó)標(biāo)碼：□□□□□□病例編號(hào)標(biāo)本類型采集日期采集人檢測(cè)結(jié)果型別檢測(cè)日期檢測(cè)人核酸檢測(cè)病毒分離序列測(cè)定注：對(duì)于核酸檢測(cè)中的序列測(cè)定，報(bào)送結(jié)果中應(yīng)包括原始測(cè)序彩圖文件和序列文件的電子版拷貝。填表時(shí)間：______年___月___日單位（蓋章）：___________________________________；填表人：_________________附件1IgM捕捉ELISA法（MacELISA）檢測(cè)出血熱IgM抗體本試劑盒系采用抗人μ鏈捕獲人血清IgM抗體，加辣根過(guò)氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物，用以檢測(cè)出血熱特異性IgM抗體。具有較高的敏感性、特異性和重復(fù)性。特別適用于出血熱的早期特異性診斷及其它實(shí)驗(yàn)性研究。本試劑盒為96人份/包裝。試驗(yàn)材料：（1）抗人IgM抗體（μ鏈）：用pH9.5的包被液包被酶標(biāo)板（2）凍干陽(yáng)性血清/凍干陰性血清1支，0.2ml/支，工作濃度為1：10；（3）凍干辣根過(guò)氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1支，0.5ml/支，工作濃度為1：20；（4）凍干小牛血清1支，1ml/支；（5）濃縮洗液（10倍濃縮）1瓶，50ml；（標(biāo)本稀釋液為含5%小牛血清原倍洗液）；（6）A/B顯色液和終止液各1瓶。（凍干試劑先用相應(yīng)量的去離子水溶解，然后臨用前根據(jù)所需按工作濃度稀釋使用，余下的放-20℃保存）（7）終止液：4NH2SO4（8）酶標(biāo)儀。檢測(cè)步驟：（1）將待檢血清用稀釋液100倍稀釋，加入已包被抗人μ鏈抗體的酶標(biāo)板一孔中，100μl/孔，同時(shí)加入已1：10稀釋的陽(yáng)性血清/陰性血清對(duì)照各一孔，100μl/孔，置37℃水浴孵育1小時(shí)。（2）棄去血清，用PBS－T漂洗5遍，甩干。（3）將凍干辣根過(guò)氧化物酶－病毒抗原標(biāo)記物1：10稀釋后，加入反應(yīng)板相應(yīng)孔內(nèi)，100μl/孔，37℃水浴孵育1小時(shí)。（4）棄去酶標(biāo)抗體，用洗滌液洗滌6次，甩干。（5）加顯色液:于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分鐘。（6）加終止液（4NH2SO4）于每反應(yīng)孔，一滴/孔。結(jié)果判斷：（1）目測(cè)方法：陽(yáng)性對(duì)照孔呈明顯藍(lán)色，陰性對(duì)照孔呈無(wú)色，對(duì)照成立；若待檢血清孔呈明顯淡藍(lán)色或深藍(lán)色（TMB），則標(biāo)本為出血熱IgM抗體陽(yáng)性，反之陰性。（2）酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)：于450nm（TMB）陽(yáng)性對(duì)照孔OD值/陰性對(duì)照孔OD值,即P/N≥2.1，對(duì)照成立；若待檢血清孔OD值與陰性對(duì)照孔OD比值≥2.1，則標(biāo)本為流行性出血熱IgM抗體陽(yáng)性，反之陰性。（陰性對(duì)照孔OD值小于0.05按0.05記，若大于0.05按實(shí)際數(shù)值計(jì)算）意義：陽(yáng)性結(jié)果，表明患者新近漢坦病毒感染，用于出血熱早期診斷。附件2IgM捕獲法膠體金標(biāo)記試紙條快速檢測(cè)IgM抗體適用對(duì)象：本產(chǎn)品適用于人血清或血漿中出血熱病毒IgM抗體的快速檢測(cè)。檢測(cè)意義：檢測(cè)出血熱病毒IgM抗體對(duì)于早期診斷出血熱急性感染有重要指導(dǎo)意義。儲(chǔ)存條件和有效期：室溫或冰箱（4-30℃）密封保存，有效期18個(gè)月。注意事項(xiàng)：1.僅供專業(yè)人士使用2.嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作3.有效期內(nèi)使用，密封保存4.樣品中的脂質(zhì)、溶血及污染的的樣品有可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果樣品收集和保存：采取靜脈血于干凈未加抗凝劑（若收集血漿則加入抗凝劑）的容器內(nèi)，靜置使血凝固，分離血清備檢測(cè)，可于4℃冰箱內(nèi)保存2周；如不能及時(shí)檢測(cè)可將血清置于冰箱內(nèi)冷凍或冷藏。檢測(cè)前復(fù)溫并混勻。避免反復(fù)凍融標(biāo)本。操作步驟：1.如果試劑盒儲(chǔ)存于4℃冰箱，請(qǐng)將所有實(shí)驗(yàn)用試劑與器材取出并平衡至室溫2.打開密封的鋁箔袋，取出試劑盒，平放于水平桌面上，做好標(biāo)記3.用滴管或加樣器從盛有血清或血漿的試管中取2-3滴或100l-150l樣品滴加于測(cè)試盒上的樣品孔內(nèi)，于15分鐘內(nèi)觀察測(cè)試結(jié)果結(jié)果判斷：陽(yáng)性：可見質(zhì)控線與實(shí)驗(yàn)線2條紫紅色帶陰性：只有一條質(zhì)控線出現(xiàn)無(wú)效：如果未能觀察到質(zhì)控線出現(xiàn)，則無(wú)論是否有實(shí)驗(yàn)線顯示，均為無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)注意：陽(yáng)性結(jié)果最早1～2分鐘即可顯示出來(lái)，但陰性結(jié)果必須等到15分鐘才可判定。附件3免疫熒光法（IFA）檢測(cè)人血清IgG抗體試驗(yàn)材料：（1）抗原片：家鼠型和姬鼠型漢坦病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株感染VeroE6或Vero細(xì)胞制備，低溫干燥保存；（2）陽(yáng)、陰性對(duì)照：?jiǎn)慰寺】贵w或確診陽(yáng)性患者恢復(fù)期血清（陽(yáng)性對(duì)照）、陰性血清；（3）羊抗人（或兔抗人）IgG熒光抗體；（4）常用稀釋液：pH7.2～7.4PBS、伊文思蘭等；（5）熒光顯微鏡。檢測(cè)步驟：（1）用pH7.4，0.02mol/LPBS稀釋待檢血清，從1:20開始做2倍或4倍連續(xù)稀釋至需要的稀釋度。（2）取出抗原片，用蒸餾水漂洗后，冷風(fēng)吹干。（3）用加樣器依次從高稀釋度到低稀釋度逐個(gè)加入已稀釋的待檢血清，加入量以覆蓋細(xì)胞抗原面為準(zhǔn)（若為雙份血清，最好上排為急性期血清，下排為恢復(fù)期血清），在37℃水浴箱濕盒孵育30～40分鐘（每次試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽(yáng)、陰性對(duì)照）。（4）用PBS震蕩洗滌3次，每次5分鐘，再用蒸餾水洗滌1次脫鹽，冷風(fēng)吹干。（5）用含1：3萬(wàn)的伊文思蘭PBS按工作濃度稀釋熒光結(jié)合物，滴加各孔（以覆蓋細(xì)胞抗原面為準(zhǔn)），在37℃水浴箱濕盒孵育30分鐘，然后同（4）洗滌、漂洗、吹干。（6）熒光顯微鏡觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：細(xì)胞內(nèi)病毒特異性熒光為黃綠色顆粒，分布在感染細(xì)胞的胞漿內(nèi)。根據(jù)特異性熒光顆粒多少、熒光亮度、陽(yáng)性細(xì)胞在細(xì)胞總數(shù)中所占比例，可將免疫熒光反應(yīng)大致區(qū)分為1～4個(gè)“+”?？蓞⒖缄?yáng)性細(xì)胞數(shù)：<25%為“+”，25%～50%為“++”，51%～75%為“+++”，>75%為“++++”；無(wú)特異性熒光者為“—”（陰性）。檢測(cè)抗體滴度時(shí)，以能觀察到明顯特異性熒光反應(yīng)（>“+”）最高血清稀釋度的倒數(shù)表示。意義：陽(yáng)性結(jié)果，表明曾受到漢坦病毒感染，>1：20有診斷參考意義；恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4倍或4倍以上升高則可確診。附件4酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清IgG抗體試驗(yàn)材料：（1）純化的重組漢坦病毒核蛋白抗原預(yù)包被酶標(biāo)板：（2）辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗人IgG抗體；（3）緩沖液：包被液：pH9.6碳酸緩沖液；稀釋液：pH7.4PBS（含5%脫脂奶）洗滌液：pH7.4PBS－T（0.05％吐溫－20）；（4）顯色液：A/B液（5）終止液：4NH2SO4（6）酶標(biāo)板、酶標(biāo)儀。檢測(cè)步驟：（1）將待檢血清用稀釋液從1：100開始作2倍連續(xù)稀釋，加入抗原孔，100μl/孔，同時(shí)設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照，37℃水浴1小時(shí)；（5）棄去血清，用洗滌液洗滌5～6次；（6）加酶結(jié)合物，用稀釋液按工作濃度稀釋，100μl/孔，37℃水浴1小時(shí)；（7）棄去酶標(biāo)抗體，用洗滌液洗滌6次，甩干；（8）加顯色液：于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分鐘；（9）加終止液于每反應(yīng)孔，一滴/孔。結(jié)果判斷：于450nm（TMB）陽(yáng)性對(duì)照孔OD值/陰性對(duì)照孔OD值，即P/N≥2.1，對(duì)照成立；若待檢血清孔OD值與陰性對(duì)照孔OD比值≥2.1，則標(biāo)本為出血熱IgG抗體陽(yáng)性，反之陰性。（陰性對(duì)照孔OD值小于0.05按0.05記，若大于0.05按實(shí)際數(shù)值計(jì)算）意義：陽(yáng)性結(jié)果，表明曾受到漢坦病毒感染，>1：100有診斷參考意義；恢復(fù)期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4倍或4倍以上升高則可確診。附件5VeroE6或Vero細(xì)胞分離漢坦病毒標(biāo)本：（1）患者血清：無(wú)菌采集發(fā)病后5日內(nèi)靜脈血3ml，置冰壺中，于實(shí)驗(yàn)室中分離血清，接種細(xì)胞培養(yǎng)；不能及時(shí)接種細(xì)胞者可置-70℃保存。污染的血清要先用雙抗（青霉素、鏈霉素，最終濃度各500000U/mL），4℃2小時(shí)處理后接種細(xì)胞。（2）鼠肺：生理鹽水沖洗數(shù)次后，用研磨器研碎，每份加0.5mlHank’s液，2000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清加雙抗（青霉素、鏈霉素，最終濃度各1000U/ml），4℃過(guò)夜，備用。病毒分離：將培養(yǎng)好的單層細(xì)胞上清棄掉，用Hank’s液洗滌2遍，接種用Hank’s液稀釋成10-1的患者血清0.1ml或組織懸液0.2ml。37℃孵箱吸附1小時(shí)，補(bǔ)加維持液。37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)至第7～10天刮取細(xì)胞點(diǎn)抗原片，按附件5方法進(jìn)行鑒定。陰性者需盲傳3代。附件6RT-PCR檢測(cè)漢坦病毒基因及分型材料：（1）急性期病人血清、鼠肺、鼠血或分離的漢坦病毒（2）引物：引物序列（5’～3’）位置片段（bp）逆轉(zhuǎn)錄引物TAGTAGTAGACTCC1~14LMS通用外引物AAAGTAGGTGITAYATCYTIACAATGTGG1910~1939M(+)GTACAICCTGTRCCIACCCC2373~2354M(-)型特異性引物漢灘病毒GAATCGATACTGTGGGCTGCAAGTGC1958~1984M(+)GGATTAGAACCCCAGCTCGTCTC2318~2340M(－)漢城病毒GTGGACTCTTCTTCTCATTATT1936~1957M(+)TGGGCAATCTGGGGGGTTGCATG2331~2353M(－)S片段引物ATGTTGCCTGGGGIAAAGAGG1200~1220S(+)GCGCACTAGTAGTAGTAGACTCCCTAAAGA1670~1696S(-)方法：（1）病毒RNA的提?。翰捎肨RIzol按說(shuō)明提取，制備模板RNA；（2）逆轉(zhuǎn)錄、合成cDNA：采用SuperScripTMII或AMV逆轉(zhuǎn)錄酶，按說(shuō)明書進(jìn)行；（3）PCR擴(kuò)增：反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性10分鐘，94℃60秒、55℃60秒、72℃45秒、擴(kuò)增30～35個(gè)循環(huán)，72℃延伸12分鐘。（4）擴(kuò)增產(chǎn)物用1～2％瓊脂糖凝膠電泳鑒定。若條帶的分子量與預(yù)期片段大小相同，則表明為特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。必要時(shí)，可進(jìn)行：（5）PCR片段的回收和核苷酸序列測(cè)定：切下特異分子量條帶，用QIAquick凝膠回收試劑盒回收（按其說(shuō)明書進(jìn)行），自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序。意義：擴(kuò)增到特異性條帶可確診漢坦病毒并明確其型別，序列測(cè)定還可以對(duì)漢坦病毒的變異情況進(jìn)行研究。附件7交叉保護(hù)中和