植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)氯化三苯基四氮唑(TTC)法測定根系活力

植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)氯化三苯基四氮唑(TTC)法測定根系活力第一頁，共22頁。實(shí)驗(yàn)4

氯化三苯基四氮唑(TTC)法測定根系活力第二頁，共22頁。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

根系活力是衡量根系活動(dòng)能力強(qiáng)弱的重要指標(biāo)，可以衡量根系吸收水分或礦質(zhì)元素的能力大小，甚至可以反映地上部分的營養(yǎng)狀況以及產(chǎn)量水平。學(xué)會(huì)利用TTC法測定根系活力。第三頁，共22頁。一、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）溶于水中成為無色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯基甲替（TTF），如下式：第四頁，共22頁。生成的TTF比較穩(wěn)定，不會(huì)被空氣中的氧自動(dòng)氧化，所以TTC被廣泛地用作酶試驗(yàn)的氫受體，植物根所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸得到增強(qiáng)，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性，并作為根系活力的指標(biāo)。第五頁，共22頁。二、材料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料：玉米等植物根系。（二）儀器設(shè)備：分光光度計(jì)；天平；恒溫箱1臺(tái)；研缽1套；漏斗；量筒；移液管；試管；刻度試管10ml；試管架；藥勺；石英砂適量；燒杯；小培養(yǎng)皿；洗瓶。第六頁，共22頁。二、材料、設(shè)備儀器及試劑（三）試劑：1.乙酸乙酯2.次硫酸鈉（Na2S2O4，強(qiáng)還原劑，俗稱保險(xiǎn)粉）3.1mg/ml的TTC溶液：4.磷酸緩沖液（66mmol/L，pH7）。5.1mol/L硫酸：6.0.4mol/L琥珀酸：第七頁，共22頁。三、實(shí)驗(yàn)步驟1．定性測定(教師做演示實(shí)驗(yàn)）（1）配置反應(yīng)液把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸鈉和磷酸緩沖液按1︰5︰4比例混合。（2）把根仔細(xì)洗凈，把地上部分從莖基切除，將根放入三角瓶中，倒入反應(yīng)液，以浸沒根為度，置37℃左右暗處放1h，以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細(xì)側(cè)根都明顯地變成紅色，表明該處有脫氫酶存在。第八頁，共22頁。三、實(shí)驗(yàn)步驟2．定量測定（1）TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取1mg/mL的TTC2mL于100mL容量瓶中，加入2勺（黃豆大小）保險(xiǎn)粉搖勻，加入乙酸乙酯40mL左右劇烈震蕩至保險(xiǎn)粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度，即成TTF標(biāo)準(zhǔn)液(20μg/mL)。按下表制作TTF標(biāo)準(zhǔn)曲線。以空白作參比，在485nm波長下測定光密度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。第九頁，共22頁。試管編號(hào)123456空白樣品TTF含量(ug)020406080100TTF(ml)012345乙酸乙酯（ml)498765OD(485nm)｝1010第十頁，共22頁。三、實(shí)驗(yàn)步驟（2）.樣品的提取及測定樣品提?。悍Q取根樣品0.5g，放入小培養(yǎng)皿，加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml，把根充分浸沒在溶液內(nèi)，在37℃下暗處保溫1h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反應(yīng)。（與此同時(shí)做一空白實(shí)驗(yàn)，先加硫酸，再加根樣品，其他操作同上）。第十一頁，共22頁。根系活力測定：把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把紅色提出液過濾后移入10ml刻度試管，用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈於寥?，皆移入試管，最后加乙酸乙酯使總量?0ml，用分光光度計(jì)在485nm下比色，以空白作參比讀出光密度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出四氮唑還原量。第十二頁，共22頁。

四、結(jié)果計(jì)算四氮唑還原強(qiáng)度：mg/g(根鮮重)/h=四氮唑還原量（mg）/根重（g）×?xí)r間(h)第十三頁，共22頁。五注意事項(xiàng)分光光度計(jì)的使用：看視頻保險(xiǎn)粉的量要過量。乙酸乙酯容易揮發(fā)，研磨時(shí)要求操作迅速。TTF暴露空氣中易被還原，標(biāo)準(zhǔn)曲線要求現(xiàn)配現(xiàn)用。第十四頁，共22頁。第十五頁，共22頁。第十六頁，共22頁。第十七