CpGODN的免疫刺激作用

CpGODN的免疫刺激作用第1頁/共33頁Th1免疫應答慢性乙型肝炎患者細胞免疫低下HBV免疫耐受，持續(xù)感染腫瘤微小殘留病的清除第2頁/共33頁CPG提高PBMC中Th1細胞第3頁/共33頁Th1占淋巴細胞百分比第4頁/共33頁CPG提高PBMC中Th1、Tc1細胞百分率***：與對照組比較，P<0.05

第5頁/共33頁CPG刺激BPMC分泌細胞因子**：與對照組比較，P<0.05

第6頁/共33頁CPG誘導PBMC殺傷靶細胞收集CPG活化的PBMC細胞毒性實驗：效應細胞為CPG活化的PBMC；靶細胞為CFSE預染的K562細胞。對照組效應細胞為未經(jīng)CPG活化的PBMC。效：靶＝20：1，混合培養(yǎng)2h。流式細胞術檢測靶細胞死亡率。第7頁/共33頁CPG誘導PBMC殺傷靶細胞第8頁/共33頁CFSE染色靶細胞濃度為5μmol/L的CFSE（2羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯）工作液取對數(shù)生長期的靶細胞濃度108/L細胞懸液與等體積CFSE工作液混合37℃孵育10min。離心洗滌兩次后懸浮細胞備用第9頁/共33頁CFSE染色靶細胞第10頁/共33頁實驗結果

CpG活化PBMC對K562細胞的殺傷作用(N=5)CPG活化PBMC

16.85±5.14%對照組8.62±2.83%**：與對照組比較，P<0.05

第11頁/共33頁CIK細胞殺傷靶細胞第12頁/共33頁CIK細胞殺傷靶細胞第13頁/共33頁研究背景

通過主動免疫、過繼特異性免疫、過繼非特異性免疫等方式，清除慢性乙肝患者體內(nèi)殘存的HBV，達到治療效果。第14頁/共33頁研究背景

B淋巴細胞具有抗原遞呈細胞的性質(zhì)，同時具有CpG-ODN受體：TLR-9。本研究探討CpG-ODN誘導B淋巴細胞成為高效APC，使之具有類似于樹突狀細胞功能的可行性。第15頁/共33頁TOLL受體第16頁/共33頁TOLL受體在血細胞中的表達第17頁/共33頁活化B細胞負載核心抗原磁珠分選B淋巴細胞CPG活化B淋巴細胞核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC流式細胞儀、熒光顯微鏡檢測抗原負載狀況第18頁/共33頁磁珠分選B細胞分選前B細胞7.89%

分選后B細胞89.6%

第19頁/共33頁活化B細胞負載抗原肽第20頁/共33頁活化B細胞負載核心抗原熒光顯微鏡觀察B細胞負載HBcAg18-27肽

第21頁/共33頁APC與T細胞作用機制第22頁/共33頁CPG對B細胞抗原遞呈相關分子的作用研究CpG2006、2216由上海生物工程技術服務有限公司合成，全硫代化修飾對照組為含10%FCS的RPMI1640＋外周血PBMC，細胞量107/孔，37℃、5%CO2、48小時實驗組加入CpG2006或CpG2216，終濃度均為1umol/mL，余同上第23頁/共33頁CpG提高淋巴細胞CD69表達

T淋巴細胞B淋巴細胞

CD69表達率（%）***：與對照組比較，P<0.05

第24頁/共33頁B細胞CD80、CD86表達對照組加CPG-ODN組加CPG-ODN組第25頁/共33頁CpG提高B細胞表面CD80、CD86的表達

CD80

CD86CD80、CD86表達率（%）*****：與對照組比較，P<0.05

第26頁/共33頁B細胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表達對照組加CPG-ODN組第27頁/共33頁CpG提高B細胞表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表達MHC-Ⅰ

MHC-ⅡMHC表達量（MFI）*****：與對照組比較，P<0.05

第28頁/共33頁活化B細胞誘導CTL負載了抗原的活化B細胞與淋巴細胞混合培養(yǎng)(含IL-2的RPMI1640培養(yǎng)液).收集細胞,以五聚體技術檢測HBV特異性CTL.實驗組特異性CTL為0.50±0.19%，對照組為0.20±0.10%。

第29頁/共33頁特異性CTL誘導Pro5TMMHCPentamers檢測對照組和實驗組HBcAg18-27抗原特異性CTL（Q2-1區(qū)）。前者為對照組（未加APC），后者為實驗組（加APC）。第30頁/共33頁結論CpG能夠活化B細胞，對T細胞無明顯的作用CpG能夠提高B細胞表面抗原遞呈相關分子的表達CPG誘導PBMC產(chǎn)生高水平的IFN-γCPG