小鼠MCAO總結說課材料

小鼠MCAO總結小鼠MCAO模型一、實驗器材：手術器械：眼科剪1、顯微剪1、鉤鑷1、直鑷1、顯微鑷2、止血鉗1、持針器1、縫合線（2-0/5-0）、縫合針、麻醉劑：10%水合氯醛（350mg/kg）栓線：0.18mm（20?25g）、0.20mm（25?30g）；在栓線10mm的位置用黑色記號筆標記；75%酒精清潔后置1:2500單位肝素化生理鹽水中備用。其他用品：酒精棉球、75%酒精、生理鹽水、注射器（1ml、2ml）、黑色記號筆、固定鼠用粗線繩、鼠板二、步驟：ZeaLonga線栓法麻醉：10%水合氯醛腹腔注射（350mg/kg）2?術前準備：仰臥位固定大鼠，備皮消毒3.分離血管及掛線：1）自胸骨柄到下頜骨間取長約1cm正中切口。見下頜下腺，將其分離至兩側；2）見右側肩胛舌骨肌、胸骨舌骨肌、二腹肌形成的三角區(qū)，鏡下分離此三角區(qū)內(nèi)，暴露右側頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）、頸內(nèi)動脈（ICA）；3）首先分離CCA于其上掛線1；4）隨后向頭側分離ECA血管及其分支，于ECA上頭尾側分別掛線2、3；5）然后清除CCA分叉部脂肪，觀察ECA分支與ICA關系，分離ICA及ECA分支，于其上掛線4；6）注意操作輕柔避免迷走神經(jīng)、舌咽神經(jīng)、氣管損傷，避免過度牽拉血管使其嚴重移位或斷裂。結扎：死結：線1、2；活結：線4；不系結：線3剪口插入：1）將鼠臺逆時針旋轉90°,在ECA上距分叉1?1.5mm用顯微剪剪一切口；2）將標記好的線栓由此切口插入CCA中；3）將鼠臺轉回，將線栓從CCA拔出至分叉稍尾側，右手將線栓轉向滑入ICA，右手拉開線4活結，后繼續(xù)插入ICA，待有阻力時再進入少許，深度1cm+，到達大腦中動脈與前交通之間；4）順利插入后將絲線4扎緊，抽出線3減去多余線頭。縫皮術后：小鼠俯臥位，頭略抬高，至于溫濕度適宜環(huán)境。三、注意事項：雌性鼠對于牽拉等操作的反應更強烈，故建議選擇雄性大鼠作為實驗對象。大鼠解剖學變異：一般而言，F(xiàn)isher-344大鼠MCA解剖變異較小，閉塞后形成的梗死體積一致性好；Wistar-Kyoto大鼠變異相對最大；而Sprague-Dawley大鼠介于兩者之間。麻醉：10%水合氯醛腹腔注射（30ml/kg），一般可持續(xù)1?1.5h。如按標準體重計算的麻醉劑量效果欠佳，可使用總量的10%進行追加。需注意反復多次或過量追加易造成動物死亡，或導致清醒推遲而影響再灌注前評分，從而使再灌注時間不能統(tǒng)一界定在2h。水合氯醛可使動物呼吸頻率下降50%左右，但一般不會導致動物窒息而死亡。術中嚴密觀察動物呼吸頻率、深度及有無痰鳴音等。分離氣管前肌肉時注意保護好甲狀腺和甲狀旁腺。甲狀腺呈鮮紅色，緊密貼在氣管前壁上，甲狀旁腺位于甲狀腺外上方，顏色略淡。血管分離要到位，

使用電凝器可明顯減少小血管的出血，從而保證手術野清晰，尤其是肌肉內(nèi)部的血管和ECA的一些細小分支，未明確時不可隨意離斷。結扎血管時要注意力度和方向，由于血管被膜被分離后血管表面相當光滑，結扎不牢可能導致難以控制的出血；術中還要注意保護與血管緊密相依的神經(jīng)，注意觀察神經(jīng)的顏色、反光性和輕觸時的感覺，切勿損傷或離斷。牽拉迷走神經(jīng)時可見動物呼吸明顯減慢甚至血液呈深紫色，出現(xiàn)肢體末端紫紺。在無法給予輔助通氣時，應暫停操作。一般來說，動物呼吸可恢復到麻醉后的平穩(wěn)狀態(tài)，血液顏色也可恢復到正常，這時再繼續(xù)手術較為安全。關于是否結扎PPA文獻報道尚不一致?？裳豂CA一直分離至看到其入顱分支與PPA分叉處，觀察線栓走行狀況，若順利將長度約1cm的線栓插入，則可固定線栓而無需對PPA進行操作；如只進入5mm左右即遇到明顯阻力，則線栓進入PPA的可能性很大，此時可將線栓撤離至ECA/ICA處，提起PPA，以幫助線栓沿ICA進入顱內(nèi)而最終阻塞MCA。6.Koizumi等1986年首次報道不開顱經(jīng)CCA插入尼龍線栓6.Koizumi等1986年首次報道不開顱經(jīng)CCA插入尼龍線栓致MCA閉塞；之后，Longa等進行了改良，將栓線從ECA插入，再灌注時將栓線抽回ECA內(nèi)，通過CCA實B現(xiàn)再灌注。Koizumi使用的絲線末段均勻包被硅膠，直徑增加近30?40%，插入后不僅可伸入大腦前動脈ACA）近端，肯定阻塞ACA及前交通動脈，而且阻塞MCA及后交通動脈開口處，徹底阻塞MCA及其所有側枝供應血管，形成供應區(qū)域完全缺血，因此局部梗死面積大，均勻一致，各動物間差異較小。Longa使用的4-0尼龍線末端球形擴大，但并非直接閉塞MCA，而是依靠結扎同側ICA和其球形擴大的末端伸入ACA腔內(nèi)、阻斷經(jīng)前交通動脈來自對側ACA的血流形成局灶性腦缺血，但不能阻斷來自后交動脈的側枝供應，且絲線末端伸入ACA腔內(nèi)位置不同，所起作用差異很大，因此形成的梗死面積很小，各動物之間差異較大。宋紅松等建議采用Koizumi方法。丁香園：注意盡量不要損傷在頸內(nèi)頸外分叉下的交感神經(jīng)節(jié)。栓線進入后頸內(nèi)動脈后即可逐漸插入了，有時候很順利一插到底，但有時候在中間就怎么也進不去了，這是因為在血管入顱穿過顱骨時有一個狹窄或者角度。因此，碰上這種明顯阻力時，一定不能盲目向前使力插，越插栓線前端變形越進不去且容易損傷血管。這時候正確的作法是往外抽出較多栓線，也許會有一定的動脈血流出，不必慌，只要順著血管走行調整一下進線角度輕柔的使勁，一般都能進去，反復試幾次還不行最好換根栓線，很可能前端也經(jīng)變形角度變了！頸內(nèi)動脈的走向為內(nèi)上方，可以用眼科鑷夾住魚線插，但進去后要注意，別太用力，要不血管就要破了栓線不能在血管里反復進退，否則及容易造成蛛網(wǎng)膜下腔出血，而且很容易誤解為模型成功，因為這時的神經(jīng)功能改變也很明顯，但并不是由于栓塞引起的

大鼠仰臥時，ICA從CCA分出后下行（向背側）約5mm又分為兩支A,即走向乳突泡（Mastoidbulla）的翼腭A和進入顱內(nèi)的ICA的延伸部分。因為翼腭A的走向幾乎和分支前的ICA走向相同，而ICA的延伸部分則是改向頭側走行，所以插線時會很自然的進入翼腭A。進線時，用鑷子將ICA輕輕往頭側推一下，使ICA和其延長的分支成一直線，同時順勢插線，可很容易的進入顱內(nèi)。或使栓線有一定程度的彎曲，且只要保證栓線向屋頂方向彎曲，一般都能將線插如顱內(nèi)，決不會進入翼腭A。注意手的感覺，輕緩推進，直至感覺到阻力為止（當遇到阻力后，再插線會見到線彎曲）?？赡苡腥藭f，把血管插破了也未感覺到阻力或線遇阻后的彎曲。一個原因是線太硬，另一主要原因是當栓線從血管切口插入后為防止血液從此處流出，需要結扎一條細線，這條線結扎的松緊程度很關鍵，應在不流血的情況下盡可能的松，這樣你會發(fā)現(xiàn)進線時很輕松，一旦遇到阻力，就會感覺到。后者至關重要，請體會。栓線一旦進入ACA，就要把上面提到的那根細線適度扎緊（“適度”很重要，會影響到再灌流時大鼠的生死存亡），此時的關鍵是動作輕柔，不要使ICA有任何的牽拉，否則栓線會脫出ACA，可能會造成缺血失敗。血管外的栓線不要留得過長，更不要縫在皮外，大鼠醒來后會自己拔出。如果你用的是中長效麻醉劑，插線成功后，固定絲線，然后讓其俯臥位，而且稍稍抬高其頸部，才能確保模型成功。術后一定要注意保暖。插入線拴要輕柔熟練，速度盡可能快，以避免時間長了血管內(nèi)血栓形成。手術后評分的主觀因素很大，有用5分制和11分制的，我個人認為用5分制比較準些。大鼠大腦中動脈永久性閉塞性腦缺血模型，梗死體積出現(xiàn)的最小時間點可能為2h，體積隨時間進行性增大，至12h基本趨于穩(wěn)定整個試驗是很費動物的，存在15-30%的淘汰率（如果你做的好），但注意嚴格控制自己淘汰的動物（紀錄具體情況）。除了剛才說的蛛網(wǎng)膜下腔出血外，還有一些老鼠肺出血明顯，整個肺暗紅，我也想不出原因，不知道是不是醫(yī)學臨床所說的腦肺綜合癥.術后處理：由于術后動物尚未清醒，因此護理也很重要。但為保證栓線成功，達到預期的阻塞時間，防止栓線脫落暫時把動物留在手術臺上，保證動物不會因掙扎而把栓線過早脫落，但仍需監(jiān)測體溫，并注意保暖。再灌注后動物可放入籠中。另外籠中應保持干燥，沒有積水及粉塵,防止動物誤吸而窒息。我們在實驗中發(fā)現(xiàn)一些模型癥狀不典型甚至沒有癥狀，都是由于動物蘇醒后極力掙扎使栓線過早脫落所致。手術后大鼠存活期可以滿足通常的實驗需求,一般來講，隨著栓塞和再灌注損傷時間的延長,死亡率會上升。大鼠在術后24~48小時最容易死亡，這種死亡是嚴重腦缺血損傷造成的，較直接的因素是腦水腫。用線栓制作持續(xù)性局灶性腦缺血模型時，術后要肌注慶大霉素預防感染;如果動物模型要生存1周以上，必要肌注速尿,防止因腦水腫動物在短期內(nèi)死亡。術后飲水中加入葡萄糖，保證動物術后有充足的能量生存到實驗要求的時間。舍去標準：⑴栓線插入深度不足18mm,且無明顯神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)或癥狀很輕的大鼠⑵蛛網(wǎng)膜下腔出血、MCA起始部或其附近的willis環(huán)動脈有凝血塊的大鼠，因為這是出血性腦損傷或永久性