紫外分光光法測飲料中咖啡因濃演示

（優(yōu)選）紫外分光光度法測飲料中咖啡因濃度當前1頁，總共24頁。CompanyLogo2生活中含有咖啡因的食物、藥品：茶、咖啡1可樂、紅牛、功能飲料等2巧克力3復方阿司匹林、小兒氨酚匹林咖啡因片等感冒消炎藥4去痛片5當前2頁，總共24頁?！妒称房茖W》（JournalofFoodScience）最近發(fā)布的研究說，健康成年人每天攝入的咖啡因含量最多不要超過400毫克（相當于4杯咖啡左右）。適度地使用有祛除疲勞、興奮神經(jīng)的作用，臨床上用于治療神經(jīng)衰弱和昏迷復蘇可以有效抗威脅我們身體健康的自由基，而自由基是造成許多疾病的主因。當前3頁，總共24頁。過度攝入的缺點神經(jīng)過敏易怒焦慮震顫肌肉抽搐失眠心悸當前4頁，總共24頁。咖啡因是一種黃嘌呤生物堿化合物，是一種中樞神經(jīng)興奮劑，能夠暫時的驅(qū)走睡意并恢復精力。有咖啡因成分的咖啡、茶、軟飲料及能量飲料十分暢銷，因此，咖啡因也是世界上最普遍被使用的精神藥品。

簡介咖啡因圖示當前5頁，總共24頁。

化學咖啡因?qū)儆诩谆S嘌呤的生物堿。純的咖啡因是白色的，強烈苦味的粉狀物。它的化學式C8H10N4O2。它的化學名是1,3,7-三甲基黃嘌呤或3,7-二氫-1,3,7三甲基-1H-嘌呤-2,6-二酮。分子量，194.19物理白色粉末或六角棱柱狀結(jié)晶,熔點238°,178°,升華。1g溶于46ml水、5.5ml80°的水、1.5ml沸水、66ml乙醇、22ml60°的乙醇、50ml丙酮及5.5ml氯仿等。

性質(zhì)當前6頁，總共24頁。高效液相色譜法紫外分光光度法氣質(zhì)聯(lián)用分析法近紅外光譜法飲料中咖啡因含量的檢測當前7頁，總共24頁。CompanyLogo8紫外分光光度法儀器與試劑：SPECORD200紫外分光光度計;KQ一50B型超聲清洗器;AnkeTDL一4型離心機;Mettler-ToledoAB104一N電子天平。100mL微量進樣器;5mL注射器三氯甲烷;咖啡因(分析純);各種可樂飲料。當前8頁，總共24頁。實驗方法一、咖啡因標準曲線的繪制精確稱取咖啡因標準樣品0.0500g于100mL的容量瓶中,用三氯甲烷溶解后定容得濃度為500mg/L的儲備液。實驗前用三氯甲烷稀釋,配成0.5,

2,5,

10,

15,

20,

30mg/L的系列標準溶液。(氯仿的極性很弱作萃取劑）。以三氯甲烷作空白,測定其在278nm處的吸光度值。當前9頁，總共24頁。二、樣品前處理

取少量可樂飲料用超聲清洗器在常溫下超聲脫氣l--2min,用100μg/L的微量進樣器準確量取100μL超聲脫氣后的可樂飲料至5mL的離心試管中,加入2mL三氯甲烷,放入離心機,在2500r/min下離心3min,用5mL注射器吸取下層清液（有機層）進行紫外光譜分析.當前10頁，總共24頁。三、樣品測定樣品前處理方法處理市售的娃哈哈無咖啡因兒童可樂飲料來制備參比溶液,并以此為空白在278nm處測定經(jīng)同樣方法處理過的樣品溶液中咖啡因的吸光度值,重復三次,取平均值。通過標準曲線計算其含量。（或者以三氯甲烷作參比液，測定其紫外吸收。）當前11頁，總共24頁。分析條件的優(yōu)化1、溶劑的選擇2、樣品和體積的混合體積比選擇當前12頁，總共24頁。溶劑的選擇

準確移取三份1.0mL200mg/L咖啡因水溶液于三支10mL比色管中,分別加入二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯8.0mL,充分震蕩,萃取后離心分離,取清液在250~300nm波長范圍內(nèi)掃描.比較咖啡因在不同溶劑中的紫外吸收光譜,可以看出三氯甲烷作溶劑時,吸光度最大,最大吸收峰位于276nm.由此可知三氯甲烷的萃取效率最佳..當前13頁，總共24頁?？Х纫蜃贤馕請D譜當前14頁，總共24頁。有關(guān)咖啡因萃取常用溶劑的常用性質(zhì)當前15頁，總共24頁。1、咖啡因在氯仿中的分配比最高,在三氯乙烯中的最小.因此,在通常的咖啡因萃取過程中研究者們較多采用氯仿為溶劑來獲得較高的萃取效率。2、部分溶劑如乙酸乙酯與水之間有一定的相溶性,因此,在飲料中的咖啡因萃取過程中,若取少量的飲料與萃取溶劑進行混合時,飲料中的水及其它各組分和溶劑就會形成一個混容體系而不會出現(xiàn)分層現(xiàn)象。3、水在三氯甲烷中的溶解度很小,萃取過程后可直接取下層氯仿萃取液進行儀器分析而不需要其它的處理過程如干燥等。4、根據(jù)萃取理論,萃取效率E=1-(l+Kφ)-n,其中K為分配比,φ為相比,n為萃取次數(shù),本實驗φ為20,K為15,n為1,則E=0.9967,即一次萃取效率可達99.67%,單步萃取效率高.當前16頁，總共24頁。

選用溶劑為2mL,樣品用量分別選100,200和400μL即相比分別為20,10和5進行測定,樣品體積為400μL時,所得咖啡因含量相對略偏低,而樣品體積為100μL和200μL時結(jié)果基本一致,為了取樣方便(100μL微量進樣器取樣),本實驗取樣體積為100μL,即相比為20.當前17頁，總共24頁。觀察咖啡因的標準曲線可知隨著咖啡因含量的增加,其在最大吸收波長處的吸光度也逐漸增加,呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。線性方程為:Y=0.0491X+0.001相關(guān)系數(shù)R2=0.9999標準曲線當前18頁，總共24頁。實驗結(jié)果當前19頁，總共24頁。高效液相色譜分析實驗試劑及設(shè)備：①Waters1525-2996系統(tǒng)②HypersilODS25um色譜柱③Millipore純水過濾器④4.5umF型過濾膜⑤甲醇HPLC級標準品:含咖啡因濃度分別為20、40、80、160、320μg?mL-1等5份對照品溶液⑥試樣：市售可樂色譜條件：①流動相：等度為60:40（甲醇：水）②檢測波長：254③進樣量：5μL④運行時間：6min⑤積分：自動積分當前20頁，總共24頁。實驗步驟(1)將配制好的流動相于超聲波清洗器上脫氣15min；(2)系統(tǒng)除氣泡、大流速泵抽、裝柱子、小流速裝柱；(3)平衡：流速由小至大，配比緩慢增加至壓力恒定；(4)精密配制含咖啡因濃度為約1mg?mL-1的咖啡因甲醇溶液。將此甲醇稀釋為含咖啡因濃度分別為20、40、80、160、320μg?mL-1等5份對照溶液；(5)根據(jù)前述色譜條件，將儀器調(diào)節(jié)至進樣狀態(tài)，待儀器流路與電路條件達到平衡狀態(tài)后，色譜工作站記錄的基線呈平直，即可進樣分析；(6)依次分別吸取5μL的5份對照品溶液進樣分析，記錄色譜數(shù)據(jù)；(7)將可樂試樣稀釋一倍，經(jīng)超聲波脫氣后，精密吸取5μL可樂試樣，進樣分析，記錄色譜數(shù)據(jù)；(8)實驗完成后，按要求關(guān)好儀器。當前21頁，總共24頁。標準曲線繪制用逐級稀釋法配制成濃度為480,320,16