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關(guān)于臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范第一頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日
尿路感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。尿路感染并非是一種單一的疾病,而是一種臨床綜合征。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染(如腎盂腎炎)及下尿路感染(如膀胱炎),男性還可出現(xiàn)前列腺感染,不同部位同時(shí)感染也很常見。尿路感染是人類最常見的感染之一,可發(fā)生于各個(gè)年齡段的人群,好發(fā)于女性,男:女之比為1:10。第二頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日典型的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難和恥骨上壓痛,臨床表現(xiàn)可因患者年齡和健康狀況不同而異。新生兒尿路感染的癥狀往往是非特異性的、模湖的,可表現(xiàn)有厭食,嘔吐,倦怠,無(wú)發(fā)熱的菌血癥等;嬰兒期直到2歲,常有高熱;2歲以后的尿路感染才會(huì)有典型的臨床表現(xiàn);老年患者的尿路感染,常缺乏明顯的癥狀,更易造成菌血癥和急性腎功能衰竭,應(yīng)引起重視。第三頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日
診斷尿路感染最常用的方法是進(jìn)行尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查,主要致病菌可因尿路感染的原因不同而有所不同(表1)。第四頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日表1尿路感染的原因及常見病原菌
感染原因 主要致病菌 感染特點(diǎn)上行感染大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、淋病奈瑟菌主要為腸道菌群或會(huì)陰部細(xì)菌逆行感染,多見于女性,多為單一細(xì)菌感染,以大腸埃希菌感染最常見泌尿系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)和生理功能改變引起的感染大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、腸桿菌、普羅威登菌、沙雷菌、不動(dòng)桿菌、假單胞菌、葡萄球菌、腸球菌多見于留置導(dǎo)尿管、腎盂造瘺術(shù)、尿路結(jié)石、尿路重建、前列腺肥大、膀胱排空能力受損的患者,容易發(fā)生多種微生物的混合感染,易被誤認(rèn)為標(biāo)本污染發(fā)生于菌血癥的患者,血液中的細(xì)菌通過(guò)血流進(jìn)入腎臟引起感染,比較少見血行感染葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌、沙門菌直接感染大腸埃希菌、葡萄球菌、鏈球菌、腸桿菌外傷或腎周圍器官發(fā)生感染時(shí),細(xì)菌直接侵入腎臟引起感染,非常少見第五頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日
一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送1.采集指征:有典型的尿路感染癥狀;肉眼膿尿或血尿;尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽(yáng)性;不明原因發(fā)熱,無(wú)其他局部癥狀;留置導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱;膀胱排空功能受損;泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前第六頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日2.采集方法:
標(biāo)本采集應(yīng)力爭(zhēng)在未使用抗生素之前,注意避免消毒劑污染標(biāo)本,方法有:
(1)清潔中段尿:最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本,囑咐患者睡前少飲水,清晨起床后用肥皂水清洗會(huì)陰部,女性應(yīng)用手分開大陰唇,男性應(yīng)翻上包皮,仔細(xì)清洗,再用清沖洗尿道口周圍;開始排尿,將前段尿排去,中段尿約10~20ml直接排入專用的無(wú)菌容器中,立即送檢,2h內(nèi)接種。該方法簡(jiǎn)單易行,是最常用的尿培養(yǎng)標(biāo)本收集方法,但很容易受到會(huì)陰部細(xì)菌污染,應(yīng)由醫(yī)務(wù)人員采集或在醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo)下由患者正確留取。第七頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日
(2)恥骨上膀胱穿刺:使用無(wú)菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液,是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法,但有一定的痛苦,患者難以接受。主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒尿標(biāo)本的采集。第八頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日
(3)直接導(dǎo)尿:按常規(guī)方法對(duì)會(huì)陰部進(jìn)行消毒后,用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱,獲取膀胱尿液,可減少尿液標(biāo)本污染,準(zhǔn)確地反映膀胱感染情況。但有可能將下尿道細(xì)菌引入膀胱,導(dǎo)致繼發(fā)感染,一般不提倡使用。第九頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日
(4)留置導(dǎo)尿管收集尿液:利用留置導(dǎo)尿管采集標(biāo)本時(shí),應(yīng)先消毒導(dǎo)尿管外部,按無(wú)菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液,操作時(shí)應(yīng)防止混入消毒劑,注意不能從尿液收集袋中采集尿液。第十頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日3.采集容器:應(yīng)由不與尿液成份發(fā)生反應(yīng)的惰性材料制成;潔凈、無(wú)菌、加蓋、密封、防滲漏;不含防腐劑和抑菌劑;廣口、具有較寬的底部、容積應(yīng)大于50ml、盒蓋易于開啟。第十一頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日4.標(biāo)本運(yùn)送:
標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢、及時(shí)接種,室溫下保存時(shí)間不得超過(guò)2h(夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存),4°C冷藏保存時(shí)間不得超過(guò)8h,但應(yīng)注意冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。第十二頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日二、標(biāo)本驗(yàn)收1.申請(qǐng)單驗(yàn)收:要求尿培養(yǎng)申請(qǐng)單除患者的基本信息以外還應(yīng)包括標(biāo)本收集時(shí)間、收集方式、是否已使用過(guò)抗生素等,驗(yàn)收時(shí)應(yīng)檢查申請(qǐng)單是否填寫完整。第十三頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日2.標(biāo)本驗(yàn)收:(1)檢查標(biāo)本標(biāo)識(shí)是否與申請(qǐng)單相符;(2)檢查標(biāo)本容器有無(wú)溢漏、滲出,是否加蓋;(3)檢查送檢時(shí)間是否超過(guò)標(biāo)本保存時(shí)間。第十四頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日3.不合格標(biāo)本處理:(1)對(duì)申請(qǐng)單信息不全者應(yīng)設(shè)法與臨床醫(yī)生取得聯(lián)系;(2)對(duì)標(biāo)識(shí)不符、送檢容器不合格、送檢時(shí)間超過(guò)規(guī)定時(shí)間的標(biāo)本應(yīng)注明原因,退回,要求重新留取標(biāo)本,并做記錄。第十五頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日三、實(shí)驗(yàn)室檢查1.涂片檢查:尿路感染標(biāo)本可直接做細(xì)菌培養(yǎng)無(wú)需常規(guī)進(jìn)行涂片檢查。對(duì)于臨床懷疑淋病奈瑟菌、假絲酵母菌或結(jié)核分枝桿菌感染的標(biāo)本可用無(wú)菌吸管吸取尿液5~10ml置無(wú)菌試管中,3000~4000r/min離心30min,傾去上清液,取沉渣涂片,行革蘭染色或抗酸染色后鏡檢。第十六頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日
2.細(xì)菌培養(yǎng):(1)普通培養(yǎng):將收集標(biāo)本的容器輕輕旋轉(zhuǎn)混勻,用定量接種環(huán)分別取尿液1ul涂抹接種血平板和麥康凱平板(或中國(guó)藍(lán)平板),35~37°C培養(yǎng)18~24h,觀察結(jié)果。對(duì)導(dǎo)尿、恥骨上膀胱穿刺和已使用抗生素治療的患者標(biāo)本應(yīng)增加一個(gè)10ul接種量。(2)特殊培養(yǎng):對(duì)懷疑有苛養(yǎng)菌感染者應(yīng)采用恥骨上膀胱穿刺法或?qū)蚍ú杉瘶?biāo)本,加種一塊巧克力平板,置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)48h。檢查淋病奈瑟菌、結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)無(wú)需做定量培養(yǎng),可將標(biāo)本離心后取尿沉渣進(jìn)行培養(yǎng),以提高陽(yáng)性率。(3)普通培養(yǎng)18~24h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí),應(yīng)將所有培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。第十七頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日四、結(jié)果觀察和報(bào)告
1.結(jié)果觀察和評(píng)價(jià):
(1)菌落計(jì)數(shù):計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù),采用1ul接種量者,將菌落數(shù)乘以103;采10ul接種量者,將平板菌落數(shù)乘以102,即為每ml尿液中所含有的細(xì)菌數(shù)(CFU/ml)。如菌落生長(zhǎng)過(guò)多無(wú)法精確計(jì)數(shù)時(shí),則報(bào)告>105CFU/ml。
第十八頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日(2)結(jié)果評(píng)價(jià):正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無(wú)菌的,但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受到下尿道中正常菌群的污染而出現(xiàn)細(xì)菌。因此對(duì)不同方法獲取的尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果需正確評(píng)價(jià),才能有效指導(dǎo)臨床合理治療。一般認(rèn)為,清潔中段尿標(biāo)本中單種細(xì)菌菌落數(shù)>105CFU/ml可能為感染;<5×104CFU/ml可能為污染,在兩者之間需要根據(jù)具體情況進(jìn)行評(píng)估(表2)。第十九頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日表2不同方法采集的尿標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià)
標(biāo)本來(lái)源菌落數(shù)CFU/ml 結(jié)果評(píng)價(jià)清潔中段尿<5×104無(wú)意義,僅報(bào)告菌落數(shù)及革蘭染色特征,并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長(zhǎng)純培養(yǎng)有意義,報(bào)告菌落計(jì)數(shù)和菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果;混合菌生長(zhǎng)無(wú)意義,僅做革蘭染色鏡檢,并報(bào)告鏡檢結(jié)果(5~10)×104純培養(yǎng)或混合菌生長(zhǎng),其中某種細(xì)菌數(shù)≥105者有意義,需進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn);4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)意義,報(bào)告標(biāo)本污染>1053種以內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)都有意義,對(duì)2種主要生長(zhǎng)菌需進(jìn)行菌種鑒定及藥敏試驗(yàn);4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)意義,報(bào)告標(biāo)本污染>103導(dǎo)尿都有意義,所有細(xì)菌均需做菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)任意數(shù)目恥骨上膀胱穿刺第二十頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日2.陰性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告:
培養(yǎng)48h無(wú)菌落生長(zhǎng),即為陰性。接種1ul尿量者,應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h,菌落計(jì)數(shù)<103CFU/ml”;接種10ul尿量者,應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h,菌落計(jì)數(shù)<102CFU/ml”。
第二十一頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日3.陽(yáng)性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告:
應(yīng)報(bào)告細(xì)菌種屬名稱、菌落計(jì)數(shù)和藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。如:大腸埃希菌生長(zhǎng),菌落計(jì)數(shù)>105CFU/ml,藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果:……第二十二頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日附錄
1.關(guān)于尿培養(yǎng)標(biāo)本的接種:
由于自然排尿收集的標(biāo)本很難避免會(huì)陰部及下尿道細(xì)菌污染,所以需要定量接種、合理評(píng)價(jià)才能判斷培養(yǎng)的細(xì)菌是否與尿路感染有關(guān)。定量接種的方法有直接劃線法和傾注平板法二種,后者由于操作繁瑣,已幾乎不被臨床實(shí)驗(yàn)室使用。直接劃線法的關(guān)健是保證接種量的準(zhǔn)確性,可使用1ul或10ul的定量接種環(huán),方法是將接種環(huán)校準(zhǔn)后,以垂直方向持拿,使環(huán)圈剛好浸入尿液表面(不可使尿液碰到環(huán)上方的環(huán)柄),取尿液進(jìn)行接種。無(wú)量接種環(huán)的實(shí)驗(yàn)室,可使用無(wú)菌的5ul微量移液器吸取尿液加入平板,再用接種環(huán)劃線接種,將平板菌落數(shù)乘以200,即為每ml尿液中所含有的細(xì)菌數(shù)(CFU/ml)。
第二十三頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日2.關(guān)于尿培養(yǎng)檢驗(yàn)培養(yǎng)基的選擇:
沒(méi)有一種平板可以適合所有尿道病原體的生長(zhǎng),所以應(yīng)該根據(jù)標(biāo)本來(lái)源及臨床對(duì)目標(biāo)菌的要求選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。普通培養(yǎng)推薦使用血平板和麥康凱(或中國(guó)藍(lán))平板,不能以血平板代替麥康凱或中國(guó)藍(lán)平板。
第二十四頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日3.關(guān)于尿培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià):
菌落計(jì)數(shù)>105CFU/ml只是診斷尿路感染的一般標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言,如果僅使用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行解釋,那么若標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)松,將會(huì)造成抗生素濫用和不必要的資源浪費(fèi);制定過(guò)嚴(yán),將有可能導(dǎo)致尿路感染的漏診。所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在與臨床醫(yī)生密切合作的基礎(chǔ)上,根據(jù)不同的情況制定不同的解釋標(biāo)準(zhǔn)。尿培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)可受多種因素的影響,在一些患者即使菌落計(jì)數(shù)較少,也有明顯的臨床意義,所以對(duì)菌落計(jì)數(shù)<5×104CFU/ml,“規(guī)范”中認(rèn)為無(wú)意義的陽(yáng)性結(jié)果,不應(yīng)隨意丟棄,必要時(shí)應(yīng)根據(jù)患者的具體情況或與臨床醫(yī)生聯(lián)系后,決定是否需要做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。
第二十五頁(yè),共二十九頁(yè),編輯于2023年,星期日
以下因素可使尿液中細(xì)菌數(shù)量減少,判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)予以注意:
(1)使用抗生素治療,細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制;(2)尿液稀釋,尿比重<1.003,營(yíng)養(yǎng)成份減少,細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢;
(4)尿頻時(shí),膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短,菌落數(shù)減少;(5)尿道口消毒液混入標(biāo)本中,影響細(xì)菌繁殖,菌落數(shù)減少;
(6)不同種類的細(xì)菌生長(zhǎng)速度不同、營(yíng)養(yǎng)要求不同,有文獻(xiàn)推薦,革蘭陰性菌以菌落計(jì)數(shù)>105CFU
/ml,而革蘭陽(yáng)性菌以菌落計(jì)數(shù)>104CFU/ml為診
斷尿路感染的標(biāo)準(zhǔn)
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