實驗四小鼠精子畸形試驗

關于實驗四小鼠精子畸形試驗第一頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一目的

精子畸形試驗是檢測受試化學毒物能否破壞哺乳動物精子正常形態(tài)的實驗方法。通過該實驗，學習和掌握小鼠精子畸形試驗的原理和步驟。第二頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一原理小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體基因直接或間接地決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結果。因此形態(tài)的改變提示有關基因及其蛋白質產(chǎn)物的改變。第三頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一器材和試劑器材：眼科剪、眼科鑷、小平皿、顯微鏡、擦鏡紙、帶橡皮頭吸管、載玻片、玻璃染缸試劑生理鹽水、甲醇（分析純）、環(huán)磷酰胺第四頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一操作步驟動物雄性小鼠6~8周齡，體重20~30g藥物環(huán)磷酰胺劑量環(huán)磷酰胺40mg/kg腹腔注射，每天

1次，連續(xù)5天第五頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一制片在第1次染毒后第4~5周，小鼠脫頸椎處死，剪開腹腔，分離并摘取雙側附睪，將附睪放入有約1mL生理鹽水的小平皿中。第六頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一制片用眼科剪將附睪縱向剪1~2刀，用吸管將懸浮液輕輕吹打5-6次，靜置3-5min；用4層擦鏡紙過濾除組織碎片，用膠頭滴管吸取精子懸液，滴一滴于清潔載玻片上，均勻推片；待玻片晾干后用甲醇固定5分鐘，干燥。第七頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一先用低倍鏡粗檢，找到背景清晰、精子重疊較少的部位，用高倍鏡檢查精子形態(tài)。每只小鼠檢查精子1000條。精子畸形：主要在頭部，其次為尾部?；晤愋涂煞譃闊o鉤、香蕉形、雙頭、胖頭、無定形、尾折疊、雙尾等。分別記錄異常類型和數(shù)量，以便統(tǒng)計精子畸形率及精子畸形類型的構成比。鏡檢第八頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一注意事項判斷雙頭、雙尾畸形時，要注意與兩條精子的部分重疊相鑒別，判斷無定形時要與人為剪碎及折疊相鑒別。使用的小鼠要健康，以免感染、體溫增高等可能導致精子畸形率增高，造成假陽性結果。第九頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一結果分析與評價計算精子畸形發(fā)生率，與陰性對照組比較，畸形率至少為陰性對照組的2倍或2倍以上；或經(jīng)統(tǒng)計有顯著性差異（P＜0.01），并有劑量反應關系。一般陰性對照組的精子異常率為0.8％～3.4％。第十頁，共十三頁，編輯于2023年，星期一正常和畸形精子形狀第十一頁，共十三頁，編輯于2023年，星