
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
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原癌基因PIM3在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制以及分子靶向治第1頁(yè)/共31頁(yè)P(yáng)im-3激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制以Pim-3為靶向治療分子的新型有效的抗腫瘤藥物的開(kāi)發(fā)報(bào)告內(nèi)容第2頁(yè)/共31頁(yè)P(yáng)im-3激酶在胰腺癌發(fā)生中的作用機(jī)制第3頁(yè)/共31頁(yè)p34p34p34p37p40KinaseDomainPim-1Pim-2Pim-3DeneenB.etal.MolCellBiol2003;23:3897MikkersH.etal.MolCellBiol2004;24:6104Pim-3
與惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)Pim基因敲出的小鼠生命力旺盛且可繁殖后代Pim-3是原癌基因。研究背景第4頁(yè)/共31頁(yè)P(yáng)im-3isaproto-oncogenewithserine/threoninekinaseactivity.FujiiCetal.IntJCancer.2005Mar20;114(2):209-18.Pim-3激酶是否與肝臟以外的其它臟器腫瘤發(fā)生有關(guān)?
我們聚焦在同是內(nèi)胚層來(lái)源的器官,胰腺。第5頁(yè)/共31頁(yè)NormalTissueCancerTissuesPim-3蛋白在人胰腺癌組織和胰腺癌細(xì)胞株中高表達(dá)PCI55PCI35α-Pim-3第6頁(yè)/共31頁(yè)Actin3643kDaWCL
Pim-3shRNA
NonScramblePim-3PCI55Pim-3siRNA干擾Pim-3蛋白表達(dá),導(dǎo)致人胰腺癌細(xì)胞株細(xì)胞凋亡,從而降低細(xì)胞活力ScrambleshRNAPim-3shRNADNAContentNoshRNASubG1AnnexinVPim-3shRNAScrambleshRNAPim-3shRNAScrambleshRNANo-shRNAScrambleshRNAPim3shRNA
012345
876543210CellviabilityratioTimeafterpassage(days)****第7頁(yè)/共31頁(yè)P(yáng)im-1,Pim-2Pim-3?BadSer136+SurvivalFactorPI3KAKTBad14-3-3SurvivalSer112Pim-1andPim-2CanInactiavtePro-apoptoticMolecule,Bad,byPhosphorylatingItsSerineResiduesApoptosisBadBcl-XL+Bcl-XL第8頁(yè)/共31頁(yè)P(yáng)im-3BadPim-3/BadPCI5520mmPim-3和
Bad
的相互作用a-Pim3HeLaa-Bada-IgGIP:
PCI35PCI55PCI552526kDaBadIgGBlot:anti-Pim3Blot:anti-Bad5036Pim-3IgGImmunoprecipitationwithanti-Pim-3Westernblottingwithanti-BadWashingwithStrippingbufferWesternblottingwithanti-Pim-3第9頁(yè)/共31頁(yè)P(yáng)im-3pBad112Pim-3/pBad112PCI35PCI5520mmPim-3和磷酸化Bad在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)共定位第10頁(yè)/共31頁(yè)ActinBadpBad112pBad136pBad155
Pim-32626262643KDa36shRNA
NonScramblePim-3PCI55降低Pim-3蛋白表達(dá)可以減少Bad112磷酸化第11頁(yè)/共31頁(yè)小結(jié)(1)Pim-3對(duì)于難治性胰腺癌來(lái)說(shuō)是一個(gè)很好的靶向治療分子第12頁(yè)/共31頁(yè)以Pim-3為靶向治療分子的新型有效的抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā)第13頁(yè)/共31頁(yè)胰腺癌是我國(guó)十大惡性腫瘤之一
〉早期診斷困難
〉晚期患者手術(shù)治療5年生存率低于5%,發(fā)病率等于死亡率傳統(tǒng)的化學(xué)治療存在抗腫瘤能力低,殺傷指數(shù)過(guò)小,副作用大等缺點(diǎn)分子靶向治療具有特異性強(qiáng),效果顯著,正常組織損傷小等優(yōu)點(diǎn)現(xiàn)有的抑制增殖因子受體活性的分子靶向治療缺乏腫瘤治療的特異性,而且容易產(chǎn)生耐藥性研究背景Pim-3作為藥物靶點(diǎn),特異性更強(qiáng)。
第14頁(yè)/共31頁(yè)P(yáng)im-3與Pim-1具有高度的同源性(70%)和類(lèi)似的生物功能推測(cè)Pim-3的立體空間結(jié)構(gòu)低分子化合物-Pim-3激酶復(fù)合物立體空間結(jié)構(gòu)從DrugBank和PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選了23種類(lèi)似低分子化合物低分子化合物的篩選選擇并合成了對(duì)Pim-3有高親和性的小分子化合物-蔓生百部堿(stemonamide)合成中間體蔓生百部堿是百部屬生物堿中的一種,其在中國(guó)和日本民間醫(yī)學(xué)中作為鎮(zhèn)咳藥。第15頁(yè)/共31頁(yè)合成順序:T-10>T-6,T-10>T-4>T-5,T-10>T-2>T-3蔓生百部堿合成中間體結(jié)構(gòu)第16頁(yè)/共31頁(yè)P(yáng)im-3Pim-1Pim-2T2,T5體外抑制Pim激酶活性第17頁(yè)/共31頁(yè)IC50(mmol/L)Pim-3Pim-1Pim-2
AKT-1AKT-2
T2T5T10AKT1/27892>2000nd9056>2000nd3350>2000nd1934>2000
>2000>200031.5872.47345462T-2和T-5抑制Pim激酶活性,卻不抑制AKT/PKB的活性第18頁(yè)/共31頁(yè)Timesaftertreatmentwithinhibitor(days)CellproliferationratioT-2T-5L3.6plT-10Miapaca-2T-2,T-5體外抑制人胰腺癌細(xì)胞株的細(xì)胞增殖第19頁(yè)/共31頁(yè)Celllinename T-2 T-5L3.6pl 6.6 26.1MiaPaca-2
5.9 22.9IC50(mmol/L)第20頁(yè)/共31頁(yè)過(guò)表達(dá)Pim-3可以部分逆轉(zhuǎn)由T-2引起的細(xì)胞活力下降RelativeOD450MiaPaca-2第21頁(yè)/共31頁(yè)T-2引起人胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞凋亡第22頁(yè)/共31頁(yè)T-2抑制Pim-3激酶活性,阻止pBad112,減少Bcl-XL的表達(dá),依賴細(xì)胞色素C和Caspase-3途徑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。-DMSOT-2+12h+48h+24hpBad112BadBcl-XLCytochromeCCleaved-caspase-3L3.6plActinpBad136Caspase-3Cdc25APIM-3pBad155第23頁(yè)/共31頁(yè)5X105L3.6plSubcutaneousinjection3615daysSacrify↓:Intraperitonealinjection151617181929303132332223242526(days)T-2(20mg/kg)T-2抑制裸鼠皮下胰腺腫瘤的生長(zhǎng)第24頁(yè)/共31頁(yè)T-2引起裸鼠皮下胰腺腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞增殖第25頁(yè)/共31頁(yè)T-2抑制腫瘤新生血管形成**第26頁(yè)/共31頁(yè)
T-2對(duì)裸鼠血清中的一些生化指標(biāo)沒(méi)有影響DMSO(N=5)T2(N=5)20DMSOT2051015ALT(U/l)NSNa(mEq/l)144148152DMSOT2156160NS02468DMSOT2K(mEq/l)10NSDMSOT2Cl(mEq/l)0108112116120NS第27頁(yè)/共31頁(yè)
DMSO
T2
(n=5)
(n=6)Hematologicalparameters9.3±0.07
8.08±0.3349.88±3.06
46.72±1.9030.04±3.84
9.9±1.70*84.2±1.90
81.17±1.100±0
0.17±0.070±0
0±013.40±1.83
16.67±1.002.40±0.46
2.00±0.15RBCPlateletsWBCNeutrophilEosinophilsBasophilLymphocytesMonocytes〔×106/ml〕〔×104/ml〕〔×103/ml〕〔%〕〔%〕〔%〕〔%〕
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