生態(tài)毒理學 第三章 毒物的分子效應與毒理學機制

§3.1毒物生物轉(zhuǎn)化機制§3.2毒物的分子效應§3.3生物標記物與毒物分子的作用機制當前1頁，總共84頁。生物轉(zhuǎn)化：在生物調(diào)節(jié)下一種化學物質(zhì)被轉(zhuǎn)化成另一種化學物質(zhì),有酶的催化參與,可以加速毒物的消除、解毒、隔離、重新分布或者活化生物轉(zhuǎn)化生物活化生物鈍化當前2頁，總共84頁。生物鈍化作用：是污染物經(jīng)代謝轉(zhuǎn)化成無毒或低毒的產(chǎn)物。也被稱為生物解毒/失活作用生物活化作用：是污染物的有害作用加強或者使一種惰性的化合物被轉(zhuǎn)化成具有高生物活性的有害物質(zhì)當前3頁，總共84頁。親脂性毒物親水性物質(zhì)解毒過程生物轉(zhuǎn)化過程激活過程當前4頁，總共84頁。毒物被活化或增毒的因素1.污染物的化學結(jié)構2.體內(nèi)酶系統(tǒng)的差異3.受體的存在當前5頁，總共84頁。毒物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化，與體內(nèi)的各組織器官的酶活性及其相應的物理、化學、生化、生理效應的綜合作用密切相關。同一種物質(zhì)即使經(jīng)過相同的生物轉(zhuǎn)化，在不同機體上所表現(xiàn)出來的生物效應各不相同。當前6頁，總共84頁。消除:對污染物的排泄或者生物轉(zhuǎn)化,導致生物體內(nèi)其含量的減少凈化:指生物被放如入清潔的環(huán)境隨時間消除污染物后,所測量到的污染物從生物體內(nèi)的消失當前7頁，總共84頁。生物富集:是個體內(nèi)吸收、生物轉(zhuǎn)化和消除過程的凈結(jié)果生長稀釋:指一個正在生長的生物體內(nèi)污染物濃度會因其可分布的組織的量的增加而降低.不屬于消除的一部分(污染總量并未減少)當前8頁，總共84頁。體內(nèi)屏障存在于動物體內(nèi)特定部位,對環(huán)境污染物的轉(zhuǎn)運起著阻礙作用的特殊物質(zhì)結(jié)構血腦屏障對外源化學物的滲透性較小,對毒物進入中樞神經(jīng)系統(tǒng)有阻止作用,許多物質(zhì)即便在血液中的濃度相當高也不能進入大腦胎盤屏障胎盤具有在母體與胎兒之間進行營養(yǎng)物質(zhì)、O2、CO2和代謝產(chǎn)物交換的功能，還具有阻止外援化學物由母體透過胎盤進入胚胎，保護胎兒正常生長發(fā)育的功能皮膚、血眼屏障、血睪屏障當前9頁，總共84頁。外來物的生物轉(zhuǎn)化過程的兩個階段當前10頁，總共84頁。階段Ⅰ代謝污染物一旦進入生物體內(nèi)就會被生物轉(zhuǎn)化，其過程包括4種反應，即氧化、還原、水解和結(jié)合反應通常將氧化、還原、水解稱為外來化合物代謝轉(zhuǎn)化的第一階段即階段Ⅰ代謝當前11頁，總共84頁。氧化反應微粒體混合功能氧化反應微粒體外氧化反應脂肪族羥化、芳香族羥化、氧化脫氨反應、N-脫烷基反應、N-羥化反應、S-氧化反應醇脫氫酶、醛脫氫酶、過氧化氫酶、單胺氧化酶脂肪族羥化當前12頁，總共84頁。還原反應還原酶酶促哺乳動物組織內(nèi)不活躍腸道細菌體內(nèi)反應能力強脂類酰胺類含酯式鍵的磷酸鹽類水解反應多種水解酶毒性降低當前13頁，總共84頁。階段Ⅱ代謝又稱結(jié)合反應，指進入機體的毒物在代謝過程中與某些內(nèi)源性化合物或基團發(fā)生的生物合成反應在結(jié)合反應過程中需要輔酶和轉(zhuǎn)移酶，并且消耗代謝能量當前14頁，總共84頁。毒物在代謝過程中可以直接發(fā)生結(jié)合反應，也可以經(jīng)過階段Ⅰ的氧化、還原或水解反應再發(fā)生結(jié)合反應根據(jù)結(jié)合劑不同結(jié)合反應分為：葡萄糖醛酸結(jié)合、硫酸結(jié)合、谷光甘酞結(jié)合、甘氨酸結(jié)合、乙?；Y(jié)合等主要類型當前15頁，總共84頁。葡萄糖醛酸結(jié)合反應當前16頁，總共84頁。硫酸結(jié)合反應當前17頁，總共84頁。當前18頁，總共84頁。通常，毒物在發(fā)生結(jié)合反應后，一方面可使其分子上某些功能基團失去活性以及喪失毒性，另一方面多數(shù)毒物經(jīng)過結(jié)合反應后其極性（水溶性）增強，脂溶性降低，加速排泄過程，故大多失去毒性或有所降低，并排出體外當前19頁，總共84頁。影響生物轉(zhuǎn)化的因素物種差異與個體差異飲食營養(yǎng)結(jié)構年齡、性別等生理因素代謝飽和狀態(tài)代謝酶的抑制與誘導當前20頁，總共84頁。經(jīng)生物轉(zhuǎn)化后,污染物的生物有效性發(fā)生改變，其改變程度根據(jù)不同的生物個體或個體的不同生命階段而不同比較不同污染物的生物有效性應考慮生物個體差異和所選效應指標的一致性當前21頁，總共84頁。影響生物轉(zhuǎn)化的重要因素生物有效性：指進入機體的污染物與受體結(jié)合，并產(chǎn)生生物學效應的能力，也是表征污染物的實際毒性生物可利用率：指某種來源的污染物可被吸收的程度當前22頁，總共84頁。比較不同污染物的相對生物有效性，除考慮生物之間的差異，還需確定所選用的效應指標的一致性和可比性，最常用的效應指標是“致死性”當前23頁，總共84頁。排泄是外源化學物及其代謝產(chǎn)物由機體向外轉(zhuǎn)運的過程動物的排泄

經(jīng)腎臟隨同尿液排泄：腎小球過濾、腎小管重吸收、腎小管的排泌作用

經(jīng)肝臟隨同膽汁排泄

經(jīng)肺隨同呼出氣排泄

其它排泄途徑:乳汁、胃腸、汗液、唾液、毛發(fā)、指甲植物的排泄

植物分泌：泌鹽植物當前24頁，總共84頁。bioaccumulationeffect

bioenrichmenteffect

biomagnificationeffect

有毒物質(zhì)的不同效應當前25頁，總共84頁。生物富集效應:污染物從環(huán)境中包括水、空氣和固相物質(zhì)等所有來源,向生物體內(nèi),或者在某些情況下在生物體表的凈積累生物放大效應:污染物在食物鏈中因營養(yǎng)級的提高其濃度逐級增高的現(xiàn)象生物濃縮效應當前26頁，總共84頁。超量蓄積現(xiàn)象外來物質(zhì)在生物體內(nèi)的蓄積極限值與其吸收量和清除半衰期成正比,即吸收量越大,清除半衰期越長,則其蓄積極限值越高.當兩個值足夠大,生物體的蓄積極限值將會異常高.這種生物體能夠蓄積異常高含量外源化學物的現(xiàn)象即當前27頁，總共84頁。一種污染物在生物群中的富集程度是污染物性質(zhì)、生物以及生物和污染物相互作用的環(huán)境狀況的函數(shù)。污染物性質(zhì)決定其在環(huán)境中呈現(xiàn)出的化學形式及能夠被吸收、生物轉(zhuǎn)化和消除的程度圖3簡單的生物富集—消除結(jié)果毒物動力學：運用數(shù)學方法,定量的研究外來化學物的生物轉(zhuǎn)化隨時間的動態(tài)變化的規(guī)律和過程毒物動力學當前28頁，總共84頁。一室模型：指將機體視為單一的室,外來化學物進入機體后,能迅速均勻的分布在整個機體中當前29頁，總共84頁。單速率常數(shù)模型：描述當生物被轉(zhuǎn)移到清潔環(huán)境中使其凈化污染物時污染物從體內(nèi)的消除dC/dt=-KCC為房室內(nèi)的濃度為速率常數(shù)K當前30頁，總共84頁。二室模型血液與臟器當前31頁，總共84頁。1室：dC1/dt=K21C2-(K12+K10)C11室：C1=[D(α-K21)/V1(α-β)]e-αt+[D(K21–β)/V1(α-β)]e-βt2室：dC2/dt=K12C1-K21C22室：C2=[DK12/V2(α-β)](e-βt-e-αt)分布相α;清除相β當前32頁，總共84頁?！?.2污染物的分子效應當前33頁，總共84頁。污染物不同水平的生態(tài)效應當前34頁，總共84頁。污染物的毒激活毒激活:指將前致癌劑轉(zhuǎn)化成致癌物的生物轉(zhuǎn)化過程外源化學物在生物轉(zhuǎn)化過程形成具有親電子基團的中間代謝物,通過這些親電子基團與生物大分子的親核基團結(jié)合,產(chǎn)生致癌作用基礎當前35頁，總共84頁。毒激活機制①將化學性質(zhì)穩(wěn)定的化合物轉(zhuǎn)變成有化學反應性的代謝產(chǎn)物②形成環(huán)氧化物③形成N-羥基化合物（N-羥基化作用）當前36頁，總共84頁。⑥呼吸道中的代謝活化作用⑤腎臟內(nèi)的活化作用④形成亞硝酸鹽和亞硝胺化合物（胃腸道內(nèi)的活化作用）當前37頁，總共84頁。致癌物的激活方式①微生物酶的代謝活化方式對位硝基聯(lián)苯腸道細菌對位氨基聯(lián)苯②化學方式的代謝活化（無酶反應）當前38頁，總共84頁。當前39頁，總共84頁。當前40頁，總共84頁。毒物的轉(zhuǎn)運毒物與靶分子作用當前41頁，總共84頁。毒物與靶分子作用當前42頁，總共84頁。毒性的產(chǎn)生與表現(xiàn)當前43頁，總共84頁。確定污染物對環(huán)境造成的危害程度,需要檢測并衡量其引起的生物效應生物監(jiān)測根據(jù)化學物質(zhì)所能夠引起的生物效應而進行的用生物來監(jiān)測污染,特定的生物效應可以表征某特定化合物及其有害暴露效應當前44頁，總共84頁。biomarker是生化、物理、形態(tài)、或組織學上的某種物質(zhì),用來指示毒物的暴露或者效應。biomarker：是生物監(jiān)測中用活著的個體、組織、體液、生理或生化改變來定量地作為重要污染物存在的指示或者即將出現(xiàn)的效應的早期預警系統(tǒng)當前45頁，總共84頁。生物標記物性質(zhì)①生物標記物應該在生物組織的高層次發(fā)生有害的顯著效應之前能夠被檢測,具預警工具的價值②理想生物標記物的檢測應該是快速、經(jīng)濟、簡單,適合廣泛應用當前46頁，總共84頁。④

理想生物標記物應該對單一毒物或者一組毒物具特異性③這種檢測應該服從于標準的質(zhì)量控制/質(zhì)量保證的實行⑤毒物與生物標記物之間必須存在清晰的濃度-效應關系當前47頁，總共84頁。⑥

理想的生物標記物應該能夠被應用于廣范圍的警戒性物種上,以使之具有廣泛的應用性⑦在生物標記物變化與毒物有關的適應性降低之間可以建立起理想的相關性當前48頁，總共84頁。生物標記物的分類接受器生物標記物生物化學生物標記物個體生物標記物生理學生物標記物暴露生物標記物效應學生物標記物當前49頁，總共84頁?，F(xiàn)有主要的biomarker金屬硫蛋白細胞色素P450單加氧酶應激蛋白或熱沖擊蛋白結(jié)合酶(轉(zhuǎn)移酶谷胱甘肽)亞鐵血紅素和卟啉氧化應激酶和抗氧化酶當前50頁，總共84頁?！?.3生物標記物與毒物分子的作用機制當前51頁，總共84頁。金屬硫蛋白（MT）定義：是一組低分子量、可以與金屬結(jié)合的蛋白質(zhì)作用：是吸收、內(nèi)部區(qū)域化、隔離、排泄必需（Cu、Zn）和非必需（Ag、Cd、Hg）金屬。參與必需金屬正常的代謝活動,在無有毒金屬暴露時以基本水平存在,可以被多種物質(zhì)以及物理化學條件所誘導當前52頁，總共84頁。金屬硫蛋白（MT）特性：①低分子量,高金屬含量②高半胱氨酸含量,無芳香族AA或組氨酸③獨特的AA序列,尤其是半胱氨酸的位置Cys-cyscys-X-X-cyscys-X-cys④金屬硫簇當前53頁，總共84頁。溢出假說：認為在超過了金屬硫蛋白（MT）結(jié)合金屬的能力之后,毒效將開始顯現(xiàn)。未被結(jié)合的金屬“溢出”,在有害作用的地點發(fā)生作用金屬硫蛋白（MT）被用于多種暴露模式下金屬污染的生物標記物當前54頁，總共84頁。金屬硫蛋白（MT）與有毒金屬的作用方式當前55頁，總共84頁。金屬硫蛋白（MT）在生態(tài)毒理學中的作用●MTmRNA被作為MT基因表達的指示物●MT被作為解毒途徑活化的指示物●與MT結(jié)合的金屬被作為解除毒性的金屬的指示物當前56頁，總共84頁。在生態(tài)毒理學中,生物標記物的用途之一就是評價來自具有多種人為和自然應激源特點的環(huán)境中,特定污染物的暴露或毒性。MT金屬專一異構物的存在代表了此潛力金屬硫蛋白（MT）當前57頁，總共84頁。植物金屬螯合蛋白金屬可以與MT或相似功能的分子結(jié)合并且被隔離開來當前58頁，總共84頁。當前59頁，總共84頁。常見致癌物的代謝活化①多環(huán)和雜環(huán)芳烴（PAH）當前60頁，總共84頁。②有機鹵化物（PCB、PBB、TCP、PCP、二堊英類當前61頁，總共84頁。③有機氯殺蟲劑隨著DDE的蓄積，加強了對酶活性的抑制DDD可抑制腎上腺皮質(zhì)分泌激素，產(chǎn)生性別畸變當前62頁，總共84頁。④有機磷殺蟲劑當前63頁，總共84頁。⑤有機金屬（有機錫）當前64頁，總共84頁。當前65頁，總共84頁。環(huán)境因子對于毒物效應的影響●溫度效應●濕度效應●光照●環(huán)境pH值●氧化-還原電位Eh當前66頁，總共84頁。生物因子對于毒物效應的影響●植物效應（種類、生態(tài)型、生長部位、階段）●動物效應（遺傳因素、性別、生長發(fā)育階段、健康狀況、生活方式、營養(yǎng)條件）●多因子聯(lián)合效應（非生物因子、生物因子、多種因子交互）當前67頁，總共84頁?；旌瞎δ苎趸窶FO細胞色素P-450單加氧酶是與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)合的血紅素蛋白,階段Ⅰ反應中外來化學物質(zhì)的氧化反應都與細胞色素P-450單加氧酶系統(tǒng)有關。MFO是通過改變外來化學物質(zhì)的結(jié)構而影響其毒性,既可以產(chǎn)生某種特定的無毒化合物也可大大增強某化合物的毒性.當前68頁，總共84頁。MFO系統(tǒng)是由不同基因位點編碼的具相同功能的酶的不同形式的集合.大多數(shù)動植物體內(nèi)都有這種系統(tǒng),它可以改變非極性有機化學物質(zhì)的毒性(通常將其轉(zhuǎn)變?yōu)楦邩O性進行降解的方式).許多PAH與鹵化物都可誘導MFO產(chǎn)生活性.MFO常被用做有機化合物在生理生化水平上的生物標記物當前69頁，總共84頁。細胞色素P-450酶通過催化氧化反應合成并降解動物體內(nèi)的內(nèi)源化合物(類固醇,前列腺素,脂肪酸和其他生物分子)同時對于外源污染物的毒理作用和排泄過程起到非常關鍵的作用.不同的P-450蛋白質(zhì)決定不同的細胞,器官,個體以及種群會發(fā)生哪些酶促反應.當前70頁，總共84頁。PAH、含氯碳氫化合物、多氯聯(lián)苯、二堊英、造紙廠廢水中的有機化合物細胞色素P-450的誘導受許多因素的影響,包括環(huán)境溫度,目標暴露毒物和生物體重、動物性別等等。當將這些可以改變它的因素考慮在內(nèi)時,細胞色素P-450的誘導就是一個非常有效的生物標記物,被作為多種污染物的大量暴露的指示。當前71頁，總共84頁。應激蛋白細胞應激反應：指對作為細胞蛋白質(zhì)的保護和再利用系統(tǒng)的關鍵蛋白質(zhì)的有序誘導的反應?？梢栽跓?、缺氧、某些金屬、外來化學物質(zhì)、乙醇、砷化鈉或者紫外線輻射的影響下引發(fā)。當前72頁，總共84頁。應激蛋白：指參與減少與熱、缺氧、紫外線輻射、砷、金屬及某些外來化學物質(zhì)等應激源有關的蛋白質(zhì)損傷的一組蛋白質(zhì)。蛋白毒性：指蛋白質(zhì)損傷的毒性。當前73頁，總共84頁。分子伴侶：指結(jié)合蛋白質(zhì)并指導其正確折疊和聚集的應激蛋白,其亦可防止蛋白質(zhì)變性和凝聚,促使它們重新折疊為具有功能的結(jié)構主要應用在應激蛋白90、應激蛋白70上，是始終存在的，應激蛋白90在沒有應激源時就有較高濃度；應激蛋白70正常條件下濃度較低當前74頁，總共84頁。具有顯著蛋白毒性的物理和化學物質(zhì)均可誘導應激蛋白。不同分子量的應激蛋白,應激蛋白90、應激蛋白70、低分子量熱休克蛋白（LMW）、分子伴侶60（cpn60）和泛素產(chǎn)量的提高由變性的蛋白質(zhì)引發(fā),以保護、修復或引導細胞中的蛋白質(zhì)分解當前75頁，總共84頁。應激蛋白識別變性蛋白富含憎水的縮氨酸的暴露部分,并與之結(jié)合,在應激蛋白90和應激蛋白70的幫助下,變性或凝聚的蛋白質(zhì)展開,然后重新正確折疊恢復功能。損傷后不能被恢復的蛋白質(zhì)與泛素結(jié)合,泛素幫助它們移動到溶酶體以完成最后的分解作用方式當前76頁，總共84頁。各種應激蛋白濃度的增加被用于一般細胞應激反應的生物標記物不同的應激源所誘導的各種應激蛋白的程度不同，應激蛋白的誘導模式被用做該誘導反應的生物標記物當前77頁，總共84頁。谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶是存在于細胞質(zhì)和微粒體里的階段Ⅱ酶,它通過結(jié)合作用把谷胱甘肽加到外來化學物質(zhì)或其