病毒感染的檢查和防治

關(guān)于病毒感染的檢查和防治第一頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二一、標(biāo)本的采集與送檢基本原則與細(xì)菌的相似，但還要特別注意：對(duì)本身帶有雜菌或易受污染的標(biāo)本，分離培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用抗生素。低溫保存并盡快送檢，因病毒在室溫易失去活性。血清學(xué)診斷標(biāo)本應(yīng)采集發(fā)病初期和病后2~3w內(nèi)各一份血清，觀察其抗體的動(dòng)態(tài)變化。第二頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二二、病毒的分離與鑒定（金標(biāo)準(zhǔn)）㈠病毒的分離

1.動(dòng)物接種

2.雞胚培養(yǎng)：按病毒種類接種不同部位

絨毛尿囊膜—天花病毒、痘苗病毒、HSV等尿囊腔—流感病毒、腮腺炎病毒等羊膜腔—流感病毒的初次培養(yǎng)卵黃囊—某些嗜神經(jīng)病毒

3.細(xì)胞培養(yǎng)：病毒分離鑒定中最常用的方法。按其生長(zhǎng)方式分為單層培養(yǎng)和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)按來(lái)源、染色體特征及傳代次數(shù)等分為原代細(xì)胞、二倍 體細(xì)胞和傳代細(xì)胞系

第三頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo)1.細(xì)胞的變化

細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE）：有些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)可引起特有的細(xì)胞病變。①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等；②鄰近的細(xì)胞相互融合形成巨細(xì)胞(融合細(xì)胞)如：麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒；③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成胞質(zhì)或核內(nèi)包涵體，如狂犬病病毒、麻疹病毒2.紅細(xì)胞吸附(hemadsorption,HAd)

具有血凝素的病毒（流感病毒等），使受染細(xì)胞膜含有病毒血凝素抗原成分，能與紅細(xì)胞結(jié)合出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象，以檢測(cè)是否有病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖。3.干擾現(xiàn)象(interference)

某些病毒感染細(xì)胞時(shí)不出現(xiàn)CPE、Had等變化，但能干擾在其后感染的另一病毒的增殖，從而阻抑后者所特有的CPE。4.細(xì)胞代謝的改變

培養(yǎng)液的PH改變

第四頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二㈡病毒的數(shù)量與感染性測(cè)定

常用的方法：蝕斑測(cè)定法和50%組織細(xì)胞感染量（ID50或TCID50）①空斑形成單位（PFU）：可測(cè)定病毒數(shù)量，空斑（P1aque）是病毒在單層細(xì)胞中增殖并擴(kuò)散而形成的不易著色的病灶區(qū)。一般是由一個(gè)感染性病毒體大量復(fù)制形成，類似細(xì)菌的菌落，稱為空斑形成單位。病毒懸液中感染性病毒量以每毫升中的空斑形成單位數(shù)來(lái)表示。②50％組織細(xì)胞感染量（TCID50）是病毒毒力測(cè)定的方法，應(yīng)用不同稀釋度的病毒懸液接種動(dòng)物、雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)，引起50％發(fā)生病變或死亡的最小病毒量。可以估計(jì)病毒感染的強(qiáng)弱程度及含量。

第五頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二㈢新分離病毒的鑒定病毒核酸類型的測(cè)定 DNA病毒和RNA病毒理化形狀的測(cè)定 包括病毒顆粒大小及結(jié)構(gòu)、衣殼對(duì)稱類型、有無(wú)包膜等形態(tài)學(xué)觀察 通過(guò)電鏡和免疫電鏡檢查血清學(xué)鑒定 病毒型別的最后鑒定須靠血清學(xué)方法基因測(cè)序和生化對(duì)比第六頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二三、病毒感染的血清學(xué)診斷中和試驗(yàn)(neutralizingtest)病毒在活體內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗(yàn)，可用來(lái)檢查患者血清中抗體的消長(zhǎng)情況，也可用來(lái)鑒定未知病毒或研究病毒的抗原結(jié)構(gòu)。適用于人群免疫情況的調(diào)查。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(comolementfixationtest,CFtest)用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原來(lái)檢測(cè)病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體。血凝抑制試驗(yàn)(hemagglutinatiainhibitiontest,HItest)相應(yīng)的抗體與病毒結(jié)合后，阻抑了病毒表面的HA與紅細(xì)胞的結(jié)合。常用于粘病毒及乙型腦炎病毒感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查，也可鑒定病毒的型與亞型。凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)主要用于診斷HBV與乙型腦炎病毒等感染。第七頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二四、病毒感染的快速診斷㈠形態(tài)學(xué)檢查

1.電鏡和免疫電鏡檢查

2.普通光學(xué)顯微鏡檢查㈡病毒蛋白抗原檢查1.免疫熒光法

(IF)

2.固相放射免疫測(cè)定（SPRIA）

3.酶免疫測(cè)定（EIA）㈢特異性IgM抗體的檢測(cè)㈣檢測(cè)病毒核酸

1.核酸雜交技術(shù)斑點(diǎn)雜交、DNA印跡技術(shù)

2.核酸擴(kuò)增技術(shù)⑴聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreation,PCR) ⑵連接酶鏈反應(yīng)(ligasechainreation,LCR) ⑶反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR) 3.基因芯片技術(shù)(genechip)第八頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二

特異性預(yù)防與治療

特異性防治是應(yīng)用獲得性免疫的原理，給機(jī)體注射或服用病原微生物抗原（包括類毒素）或特異性抗體以達(dá)到預(yù)防和治療的目的。這種方法稱為人工免疫(artificalimmunization)。人工免疫分為人工主動(dòng)免疫和人工被動(dòng)免疫。人工主動(dòng)免疫(artificalactiveimmunization)：將疫苗及類毒素（抗原）接種于人體，使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生獲得性免疫力。主要用于預(yù)防。

人工被動(dòng)免疫(artificalpassiveimmunization)：輸入含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體立即獲得特異性免疫力的過(guò)程第九頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二一、人工主動(dòng)免疫㈠疫苗

1.死疫苗(killedvaccine)

用物理或化學(xué)方法將其殺死病原微生物，但仍保持其抗原性的一種生物制劑。如霍亂、百日咳、傷寒、鉤端螺旋體疫苗等。

2.活疫苗(livingvaccine)

通過(guò)毒力變異或人工選擇發(fā)而獲得的減毒或無(wú)毒株，或從自然界篩選得到的毒力弱毒或無(wú)毒株經(jīng)培養(yǎng)后制成的疫苗亦稱減毒疫苗(attenuatedvaccine)。如BCG、鼠疫、脊髓灰質(zhì)炎等減毒活疫苗。死疫苗和活疫苗各有優(yōu)缺點(diǎn)，見(jiàn)下表。

3.新型活疫苗

第十頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二活疫苗與死疫苗的比較區(qū)別點(diǎn) 活疫苗 死疫苗制品特點(diǎn) 減毒或無(wú)毒的疫苗 死菌，仍保持免疫原性制備方法 通過(guò)非正常培養(yǎng)減毒株 通過(guò)物理化學(xué)方法使病原體失活接種次數(shù) 1次 2~3次接種量 量小 量大接種反應(yīng) 可在體內(nèi)增殖，類似于 在體內(nèi)不增殖，可出現(xiàn)發(fā)熱、全 輕型感染或隱性感染 身或局部腫痛等反應(yīng)免疫的類型 體液免疫和細(xì)胞免疫 體液免疫免疫效果 較好，維持長(zhǎng)(1~5年) 較差，維持短(0.5~1年)毒力回升 有可能 不可能安全性 對(duì)免疫缺陷者有危險(xiǎn) 安全性好疫苗穩(wěn)定性 相對(duì)不穩(wěn)定 相對(duì)穩(wěn)定保存 不宜保存，4℃存活2w， 宜保存，4℃存活1年 真空凍干可長(zhǎng)期保存生產(chǎn)和成本 生產(chǎn)較復(fù)雜，成本高 生產(chǎn)簡(jiǎn)單，成本低第十一頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二4.基因工程疫苗

利用基因工程方法獲得帶有病原體保護(hù)性抗原表位的目的基因，將其導(dǎo)入原核或真核表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)該種保護(hù)性抗原，提純后研制成疫苗。

5.重組載體疫苗將編碼某一蛋白抗原的基因轉(zhuǎn)入減毒的病毒或細(xì)菌而制成的疫苗。

6.合成疫苗根據(jù)病原體抗原的氨基酸序列合成的多肽作為疫苗。

7.亞單位疫苗利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分（抗原）制成不含有核酸、能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗，稱為亞單位疫苗。

8.DNA疫苗

第十二頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二

9.轉(zhuǎn)基因植物疫苗

將編碼某一病原體保護(hù)性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達(dá)，當(dāng)人們吃這些植物性食物的同時(shí)，完成一次預(yù)防接種。

10.治療疫苗

以治療為目的的一種新興疫苗。

第十三頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二病毒感染的治療㈠抗病毒化學(xué)試劑

1.核苷類藥物：無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷(阿昔洛韋)、丙氧鳥(niǎo)苷(庚昔洛韋)、阿糖腺苷、疊氮胸苷、雙脫氧肌苷、拉米呋定等。作用機(jī)制： ⑴抑制病毒基因復(fù)制 模擬核苷成分摻入病毒基因組 競(jìng)爭(zhēng)病毒復(fù)制酶 ⑵抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄2.非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑

nevirapine(第一個(gè)新合成的非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，1996年獲準(zhǔn)用于治療HIV)、

pyridone

第十四頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二3.蛋白酶抑制劑賽科納瓦(saquinavir)1995年批準(zhǔn)的第一個(gè)蛋白酶 抑制劑英迪納瓦(indinavir)

1996年批準(zhǔn)的新一代蛋白酶抑 制劑，用于HIV4.其他抗病毒藥物

金剛烷胺(amantadine)和甲基金剛烷胺(rimantadine)： 主要用于治療甲型流感。甲酸磷霉素(phosphonoformicacid,PFA)： 可抑制多種皰疹病毒。第十五頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期二㈡干擾素和干擾素誘生劑的應(yīng)用干擾素主要用于甲、乙、丙型肝炎，HSV，乳頭瘤病毒和鼻病毒等感染的治療。IFN誘生劑polyI:C、甘草甜素、蕓芝多糖中草藥防治病毒感染